食品中罗丹明B快速检测方法的研究

◎ 郝 冉

（广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司，广东 广州 510000）

罗丹明B（Rhodamine B，RB）是一种碱性鲜桃红色的荧光染料，属于非食品原料。因其价格低廉、色泽红艳、性质稳定，不法分子将其作为调味品的染色剂，使调味品颜色鲜艳、卖相好，消费者长期食用易诱发癌症[1-3]。我国将其列入《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中，明确规定其不允许用作食品添加剂及食品染色剂[4]。

本方法利用固相萃取和免疫层析技术原理来定性检测辣椒粉、辣椒酱、番茄酱等调味品中罗丹明B的非法添加，具有操作简单、灵敏度高、可通过肉眼直接判读结果的特点，适用于各类企业、检测机构、监督机构的快速检测。

1 材料与方法

1.1 样品来源

采集市场64份样品，包括辣椒粉、辣椒酱、辣椒油和番茄酱类样品。

1.2 仪器与试剂

样品浓缩仪（DCY08-1，常州康华仪器制造厂）。硫酸镁、石油醚、丙酮和氨水（分析纯，广州化学试剂厂）；Cleanert COOH填料（天津博纳艾杰尔科技有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 标准方法

参考《进出口食品中罗丹明B的检测方法》（SN/T 2430—2010）对辣椒粉、辣椒油、番茄酱等样品中罗丹明B含量情况进行测定[5]。方法开发技术指标参照《食品中罗丹明B的快速检测 胶体金免疫层析法》（KJ 201703）[6]。

1.3.2 试剂及材料准备

提取剂：石油醚与丙酮以9∶1比例混合；层析小柱：以PP为筛板，称取0.05～0.10 g Cleanert COOH装于5 mL层析柱中；洗脱液：乙醇与氨水以100∶1混合；复溶液：0.02 mol·L-1磷酸盐缓冲液，pH=7.2。

罗丹明B免疫层析检测卡：利用戊二醛法将RB的衍生物罗丹明123（R123）与牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）、卵清白蛋白（Ovalbumin，OVA）分别合成完全抗原（R123-BSA）和包被抗原（R123-OVA），对6～8周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射R123-BSA获得多克隆抗体，胶体金作为示踪标记物标记到硝酸纤维素膜（NC膜）上，涂覆R123-OVA作为检测线，用羊抗鼠ⅠgG作为质控线，并组装成胶体金检测卡。

1.3.3 样品前处理

称取2.0 g样品加入15 mL离心管中，加入3 g硫酸镁，向离心管中准确加入8 mL罗丹明B提取液，大力振摇2 min（或混匀后超声5 min），静置直至分层或上清清澈（如样品浑浊，可4 000 r·min-1离心2 min）。取2.5 mL上层清液过罗丹明B SPE小柱，洗耳球加压，使液体以2滴/s的速度流下，充分挤干，弃去滤液。向小柱中加入2 mL罗丹明B乙醇，洗耳球加压，使液体以2滴/s的速度流下，充分挤干，弃去滤液。将柱子置于10 mL离心管上方，向柱子中加入0.4 mL罗丹明B洗脱液，用洗耳球加压，使液体以1滴/s的速度流下，充分挤干，收集洗脱液。将洗脱液于60～90 ℃样品浓缩仪中吹干后，加400 μL罗丹明B复溶液，涡旋30 s，备用。

1.3.4 样品检测

取出罗丹明B免疫层析检测卡，用移液枪移取100 μL待测液于微孔中，反复吹打3～5次，混合均匀，静置3 min，把混合液全部转移至加样孔中，加样后开始计时，5～8 min即可观察结果，8 min后判读无效。结果判定方法见图1，若T线显色（检测线）比C线（质控线）深或一样深，表示样品中罗丹明B浓度低于检测限或不含罗丹明B。若T线显色比C线浅，或T线无显色，表示样品中罗丹明B残留浓度高于检测限。

2 结果与分析

2.1 方法检测时间

选取6名人员，分别检测1个样品和6个样品，并记录检测用时。由表1统计分析，不同人员检测单个样品用时在30 min以内，检测6个样品用时在60 min以内。

表1 不同人员检测样品用时试验结果表

2.2 最低检出限检测结果

采用已知阴性的辣椒粉、辣椒酱、辣椒油和番茄酱样品分 别 加标 0 μg·kg-1、2.5 μg·kg-1、5 μg·kg-1和10 μg·kg-1罗丹明 B，每个浓度点做 10 组，未加标与加标2.5 μg·kg-1罗丹明B样品均判定为阴性，加标 5 μg·kg-1和 10 μg·kg-1罗丹明 B 组均为阳性。SN/T 2430—2010与KJ 201703两种方法中罗丹明B的检出限均为5 μg·kg-1，因此判定快检方法适用于辣椒粉、辣椒酱、辣椒油和番茄酱的测定，对罗丹明B最低检出限可判为5 μg·kg-1，检测结果具有良好的重复性。考虑胶体金免疫层析技术存在的不确定范围，未进一步做细化加标检测。

2.3 样品检测结果

对市场上随机抽检64份样品进行检测，并与《进出口食品中罗丹明B的检测方法》（SN/T 2430—2010）测定结果进行比较。由表2可见，两种方法检测63份样品都为阴性，1份样品都为阳性，两者的符合率为100%。本方法通过大量的实验室加标验证，测试结果符合率为100%，由于样品资源有限，未进行太多的实际阳性样品验证，不排除有假阴或假阳的可能性。

表2 样品检测结果表

2.4 抗干扰性能检测

分别对已知阴性的辣椒粉、辣椒酱、辣椒油和番茄酱加标500 μg·L-1的苏丹红、日落黄、胭脂红、苋菜红、柠檬黄和糖精钠，应用本快检方法检测，结果均呈阴性。

3 结论

传统的检测方法灵敏度高、特异性强，但存在样品前处理较为复杂、耗时长和需要专业人员进行操作等缺陷，难以用于罗丹明B的现场快速检测。本研究开发的罗丹明B快速检测方法操作简便、快速，样品只需进行简单处理，检测单个样品约30 min，6个样品60 min以内即可出结果，不易受样品成分的干扰，适用于辣椒粉、辣椒酱、辣椒油和番茄酱中罗丹明B的快速检测。检测样品时，本方法测试灵敏度和测试结果与《进出口食品中罗丹明B的检测方法》（SN/T 2430—2010）相吻合，且检测限、灵敏度、特异性、假阴性率和假阳性率满足《食品中罗丹明B的快速检测 胶体金免疫层析法》（KJ 201703）技术要求。因此，该产品适合于各类企业、检测机构、监督机构的快速检测。