高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的含量

许秦　唐一秋　郑世妍

[摘要]本文对国家标准《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》（GB/T 19681—2005）中利用高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红含量的方法进行优化，使方法更加简便快捷，且满足实验要求。以正己烷为提取溶剂，提取液经ProElut SDH固相萃取柱净化，经高效液相色谱柱分离，外标法定量。优化后的方法中，苏丹红Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56?g/mL的浓度范围内线性关系良好，苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检出限分别为0.010 7?g/kg、0.011 1?g/kg、0.011 9?g/kg、0.011 0?g/kg，加标回收率为89.21%～95.69%。优化后的实验方法易于操作，能够缩短实验时间，有良好的回收率，更适合检测辣椒油中苏丹红的含量。

[关键词]高效液相色谱法;辣椒油;苏丹红

中图分类号：O657.72;TS264 文献标识码：ADOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.202004

苏丹红是亲脂性偶氮化合物，它的化学成分中含有一种叫萘的化合物，此物质具有偶氮结构，这种化学结构决定了它的致突变性和致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用，在人类肝细胞研究中显现出可能致癌的特性。苏丹红属于化工染色剂，主要用于石油、机油和其他一些工业溶剂中，目的是使其增色，在我国禁止应用于食品加工。食品中苏丹红含量的检测方法主要有薄层色谱法、高效液相色谱法、近红外光谱、凝胶渗透色谱、液相色谱-质谱联用法，该方法有机试剂用量大、操作过程烦琐、耗时长。本文对此方法进行了优化，使操作过程简单直观，减少了有机试剂用量，缩短了实验时间，提高了实验效率，更适合用于辣椒油中苏丹红含量的检测[1-4]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与设备

高效液相色谱仪（戴安Ultimate 3000）：赛默飞世尔科技有限公司;万分之一电子天平（先行者CP224C）：奥豪斯仪器（上海）有限公司;十万分之一天平（METTLER AE 240）：梅特勒-托利多有限公司;旋转蒸发仪（Rotavapor R210）：BUCHI有限公司;数控超声波清洗器（KQ5200DB）：昆明市超声仪器有限公司[5]。

1.1.2 试剂与材料

苏丹红Ⅰ～Ⅳ标准品：美国Stanford Chemicals;正己烷：色谱纯;丙酮：色谱纯;乙腈：色谱纯;磷酸：分析纯;超纯水;ProElut SDH 6mL 30/pkg固相萃取柱：迪马科技;滤膜：0.22?m;辣椒油样品：市售。

1.2 标准溶液的配置

标准储备液：分别称取苏丹红I、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ标准品各10mg于250mL容量瓶中，正己烷溶解后并定容至刻度线。

标准溶液：分别取标准储备液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1mL、1.6mL，用正己烷定容至25mL，该标准系列浓度为0.16?g/mL、0.32?g/mL、0.64?g/mL、1.28?g/mL、1.6?g/mL、2.56?g/mL，绘制标准曲线。

1.3 样品的前处理

1.3.1 《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》的前处理方法

称取1g样品于小烧杯中，加入适量的正己烷溶解（约10mL），慢慢加入氧化铝层析柱中（柱中页面约为2mm时上样），待样液完全流出后，根据样品中油类杂志的多少用10～30mL正己烷洗柱，直至流出液无色，弃去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60mL洗脱，收集，浓缩，用丙酮定容至5mL，过0.22?m的滤膜，备用[6]。

1.3.2 优化后的前处理方法

精密称取样品约1g于50mL离心管中，加入10mL正己烷溶解，超声30min，将上清液全部加入ProElut SDH固相萃取柱中（预先用5mL二氯甲烷，5mL正己烷活化平衡），待上清液全部过滤完后，用5mL正己烷淋洗，再用5mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液于50mL鸡心瓶中，40℃旋干，再用1mL正己烷定容，过0.22?m的滤膜，备用。

1.4 色谱条件

1.4.1 《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》的色谱条件

色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：30℃;流动相A：0.1%甲酸水的溶液∶乙腈=85∶15;流动相B：0.1%甲酸乙腈溶液∶丙酮=80∶20。流速1.0mL/min;進样量10?L;检测波长：苏丹红Ⅰ为478nm，苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ均为520nm。

1.4.2 优化方法一的色谱条件

色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：40℃;流动相乙腈：水（V∶V=90∶10）。流速1.0mL/min;进样量10?L;检测波长：500nm。

1.4.3 优化方法二的色谱条件

色谱柱：Poroshell 120 EC-C18 4.6×150mm，4.0?m;柱温：40℃;流动相A：乙腈;流动相B：0.2%磷酸。流速1.0mL/min;进样量10?L;检测波长：500nm。

2结果与分析

2.1 色谱图比较

比较国标法、优化方法一和优化方法二所得到的色谱图可看出，三种方法中不同的流动相均能使苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ和苏丹红Ⅳ有效分离。但国家标准中的流动相配置过程烦琐，使用有机试剂量较大，且分析时间最长。优化方法一中所用的是乙腈和水进行等度洗脱，虽分析时间最短，但苏丹红Ⅱ和苏丹红Ⅲ的分离度较其余两种方法较差，且苏丹红Ⅳ的峰型也不如其余两种方法好。优化方法二的流动相是乙腈与0.2%磷酸进行梯度洗脱，各苏丹红的峰型良好，分离度佳，且分析时间也不长[7-8]。

2.2 方法检出限、定量限和线性回归方程

以标准系列溶液浓度为纵坐标，峰面积为横坐标绘制标准曲线。均以3倍信噪比（S/N）为检出限，以10倍信噪比（S/N）为定量限。

可看出三种方法在一定浓度范围内均形成良好的线性关系，但优化方法二中各苏丹红的检出限和定量限最低。

2.3 样品回收率

分别按照三种方法进行样品处理，样品加标浓度分别为0.321 6?g/mL和1.286 4?g/mL，加标回收率。可看出，优化方法二加标回收率优于《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》（GB/T 19681—2005）和优化方法一。

3 结 论

在对辣椒油中苏丹红混合物的含量检测实验中，对《食品中苏丹红染料的检测方法》（GB/T 19681—2005）规定的高效液相色谱法进行反复实验，并对样品前处理和色谱条件进行优化，发现优化方法二操作过程更简便快速、色谱分析时间更短、各色谱峰间分离度佳、回收率更高、检出限和定量限更低，更适合于实验室中大批量进行辣椒油中苏丹红含量的测定。

参考文献

[1]王明月，桂卫星，袁宏球.HPLC法测定咸蛋、皮蛋黄中的四种苏丹红染料[J].食品科学，2009，30（2）：193-195.

[2]梁桂娟，肖洋，王文平，等.超高液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）测定辣椒制品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的含量[J].食品科技， 2012（8）：301-304.

[3]王坤，趙浩军，张燕.高效液相色谱法测定辣椒油中的苏丹红染料[J].云南化工，2015，42（1）：38-41.

[4]杜志峰，黄宇锋，罗海英，等.高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红Ⅰ染料的不确定度[J].化学分析计量，2008（2）：10-12+33.

[5]于维森，于红卫，曲青.高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红的不确定度评定[J].职业与健康，2006（20）：1696-1698.

[6]刘昱，岳振峰，彭艳，等.高效液相色谱法快速测定辣椒制品中苏丹色素含量[J].中国国境卫生检疫杂志，2005（2）：110-112.

[7]吴银良，杨挺，赵健，等.固相萃取高效液相色谱法测定辣椒油中苏丹红和对位红染料[J].食品科学，2009，30（16）：243-246.

[8]刘珺，弓振斌.高效液相色谱-柱后在线光化学衍生荧光检测法测定辣椒油中4种苏丹红染料[J].色谱，2012，30（6）：624-629.