基于CREB/Bcl-2信号通路探究当归芍药散改善Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡的作用机制

李 泽，尹 芳，杨 苗，于文静，罗荣司庆，周金勇，李 平，宋祯彦，成绍武

基于CREB/Bcl-2信号通路探究当归芍药散改善Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡的作用机制

李 泽，尹 芳，杨 苗，于文静，罗荣司庆，周金勇，李 平，宋祯彦*，成绍武*

湖南中医药大学 中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南 长沙 410208

探究当归芍药散对β淀粉样蛋白（amyloid β-protein，Aβ）诱导的胆碱能神经元损伤的保护作用及相关机制。以30 μmol/L Aβ25-35诱导基底前脑胆碱能神经元损伤模型，给予2.5%、5.0%和10.0%当归芍药散含药血清进行干预，采用MTT法检测细胞存活率；TUNEL法和碘化丙啶（PI）/Hoechst荧光双染检测神经元凋亡情况；采用胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）/磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP-response element binding protein，p-CREB）和ChAT/剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cystein-asparate protease-3，cleaved Caspase-3）荧光双染检测当归芍药散对胆碱能神经元的抗凋亡情况；采用Western blotting法检测CREB/B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）信号通路相关蛋白的表达情况。5.0%和10.0%当归芍药散含药血清可显著增加Aβ诱导的胆碱能神经元存活率（＜0.01），改善Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡（＜0.01），降低Caspase-3活化水平（＜0.01）；10%当归芍药散含药血清能逆转Aβ诱导p-CREB水平的降低（＜0.01），增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达（＜0.05）。当归芍药散可能通过CREB/Bcl-2信号通路改善Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡。

当归芍药散；β淀粉样蛋白；胆碱能神经元；细胞凋亡；环磷腺苷效应元件结合蛋白；B淋巴细胞瘤2

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种与年龄相关的神经退行性疾病，其特征为记忆力的进行性丧失和高级认知功能的恶化。目前，导致AD进行性记忆丧失的的具体机制仍不清楚[1]。在许多关于AD发病机制的假说中，胆碱能假说是唯一将记忆丧失与特定神经元子集联系在一起的假说。基底前脑胆碱能神经元是记忆功能的基础，无论是β-淀粉样蛋白（amyloid β-protein，Aβ）富集的老年斑和神经原纤维缠结的特征性改变，还是突触的炎症，最终都会汇集到AD广泛的基底前脑胆碱能神经元丢失[2]。环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein，CREB）是参与大脑发育、神经存活和神经发生的主要转录因子，大量的研究发现CREB介导的信号通路在记忆的形成过程和AD的发展过程中发挥重要作用[3]。研究发现，激活CREB途径能抑制胆碱能神经元凋亡，改善AD大鼠的记忆障碍[4]。针对胆碱能系统的AD药物干预也主要作用于CREB相关通路[5]，美国食品和药物管理局批准的AD胆碱酯酶抑制剂类药物如多奈哌齐、利斯的明等能增加乙酰胆碱（acetylcholine，Ach）水平，但它们的疗效相对较低，且存在呕吐、腹泻、头晕等不良反应[6]。当归芍药散出自张仲景《金匮要略》，经临床验证其是治疗AD的有效方剂[7-8]，实验研究证明该方可通过抑制神经炎症、抑制神经元凋亡、抗氧化等途径发挥神经保护作用，并能改善AD动物模型的认知功能障碍[9-12]。已有研究表明，该方的君药当归提取物当归多糖可通过激活脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF/酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase B，TrkB）/CREB途径提高Ach和胆碱乙酰转移酶（choline acetyltransferase，ChAT）水平改善AD大鼠的记忆障碍[13]。本研究以Aβ25-35诱导基底前脑神经元构建AD细胞模型，探究当归芍药散含药血清对Aβ25-35诱导的胆碱能神经元损伤的保护作用及机制

1 材料

1.1 动物

SPF级妊娠SD大鼠5只，体质量380～420 g，7周龄；SPF级雄性SD大鼠10只，体质量220～260 g，5周龄，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证号SCXK（湘）2013-0004。动物饲养于湖南中医药大学实验动物中心，室内温度20～24 ℃，相对湿度35%～45%，室内光线12 h明暗交替。动物实验通过湖南中医药大学动物伦理委员会批准（批准号LL-2020071501）。

1.2 药品与试剂

Aβ25-35（批号A4559）、Forskolin（批号F6886）、ChAT鼠抗（批号MAB5270）、山羊抗兔二抗（批号AP132P）、山羊抗鼠二抗（批号AP124）购自美国Sigma-Aldrich公司；MTT（批号M8180）、胰蛋白酶-EDTA消化液（批号T1320）购自北京索莱宝科技有限公司；二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO，批号D806645）购自上海麦克林生化科技有限公司；B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）兔抗（批号ab194583）购自英国Abcam公司；剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cleaved cystein-asparate protease-3，cleaved Caspase-3）兔抗（批号9661）、CREB兔抗（批号9197）、p-CREB兔抗（批号9198）、β-actin鼠抗（批号3700）购自美国CST公司；驴抗鼠荧光二抗Alexa Fluor 488（批号A-10680）、驴抗兔荧光二抗Cy3（批号A10520）、Hoechst 33258（批号H1398）、红色荧光碘化丙啶（PI）染料（批号P1304MP）购自美国Invitrogen公司；Triton X-100（批号9002-93-1）、5×上样缓冲液（批号P0015L）购自碧云天公司；RIPA裂解液（批号01408/504074）购自康为世纪生物科技有限公司；ProLong™玻璃抗淬灭封片剂（含NucBlue™染色剂，批号P36983）、BCA蛋白定量分析试剂盒（批号NCI3227CH）购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

1.3 仪器

ChemiDoc XRS＋化学发光凝胶成像仪（美国Bio-Rad公司）；Medifuge™小型台式离心机、Series 8000 WJ CO2培养箱（美国Thermo Fisher Scientific公司）；Cytation3多功能酶标仪（美国BioTek公司）；A1+共聚焦激光显微镜（日本Nikon公司）；AxioVert.A1倒置荧光显微镜（德国Zeiss公司）。

2 方法

2.1 当归芍药散含药血清制备

按照本课题组前期研究方法，当归芍药散采用水提法进行提取，通过旋转蒸馏浓缩和冻干制备冻干粉并进行质量控制，以阿魏酸、芍药苷、藁本内酯、白术内酯I和乙酰泽泻醇B为对照品鉴定当归芍药散冻干粉主要成分含量，当归芍药散提取液中阿魏酸、芍药苷、藁本内酯、白术内酯I和乙酰泽泻醇B的质量分数分别为148.2、5320、400.7、7.2和26.7 mg/kg[14]。100 g生药制备冻干粉为12.6 g，根据动物体质量配制质量浓度为生药2 g/mL（冻干粉0.252 g/mL）的口服液。取雄性SD大鼠10只随机分为当归芍药散含药血清组和对照组，每组5只，当归芍药散含药血清组大鼠ig当归芍药散口服液（生药24 g/kg），对照组ig等体积蒸馏水，1次/d，连续7 d，末次给药2 h后ip 10%水合氯醛（3.5 mL/kg）麻醉，暴露腹主动脉，用负压采血管采集全血5 mL至无抗凝剂的普通采血管中，静置过夜，3000 r/min离心10 min，收集上清，经0.22 μm滤膜滤过，−80 ℃冻存备用。

2.2 胆碱能神经元的提取

原代胆碱能神经元取自胚胎期16～18 d的SD大鼠，妊娠大鼠ip 50 mg/kg戊巴比妥钠麻醉后，断头处死。取出胚胎，解剖分离基底前脑，放入解剖缓冲液中（HBSS、10 mmol/L HEPES、1%青霉素/链霉素）。组织用0.25%胰蛋白酶消化15 min后，加入脱氧核糖核酸酶/胰蛋白酶抑制剂溶液研磨分解，台盼蓝筛选活细胞。神经元以1.5×105/cm2的密度于培养皿中培养。培养液含有2% B-27和1%青霉素/链霉素，培养环境37 ℃、5% CO2。以5 μmol/L阿糖胞苷作用48 h抑制非神经元细胞生长。

2.3 Aβ诱导胆碱能神经元模型的构建

Aβ25-35用PBS溶液配制成100 mg/mL的母液，于37 ℃老化48 h。提取基底前脑神经元细胞培养7 d后，在含有不同浓度Aβ25-35（15、30、60 μmol/L）的培养基中培养16 h，构建Aβ诱导模型。

2.4 MTT检测细胞存活率

胆碱能神经元以5×103/孔接种于96孔板中，设置对照组、模型组和当归芍药散（2.5%、5.0%、10.0%）组，模型组给予30 μmol/L Aβ25-35处理16 h，各给药组在构建Aβ诱导模型后，分别加入2.5%、5.0%、10.0%当归芍药散含药血清处理24 h，对照组加入不含药物的培养基。吸弃孔中培养液，每孔加入含5 mg/mL MTT的DMEM培养基，同时设置调零孔，继续培养4 h，弃去培养液，每孔加入100 μL DMSO，摇匀后采用酶标仪测定490 nm处的吸光度（）值，计算细胞存活率。

细胞存活率＝(实验－调零)/(对照－调零)

2.5 神经元凋亡的测定

胆碱能神经元以5×104/孔接种于12孔板中，模型组用30 μmol/L Aβ25-35处理16 h，当归芍药散（5%、10%）组在构建Aβ诱导模型后，分别加入5%、10%当归芍药散含药血清处理24 h。吸弃培养液，用预冷的含5%冰醋酸的甲醇于4 ℃固定45 min，PBS洗涤3次，用3%牛血清白蛋白于室温封闭1 h；用Hoechst 33258和PI染色以及TUNEL检测细胞凋亡。采用A1＋共聚焦激光显微镜和AxioVert.A1倒置荧光显微镜观察细胞凋亡特征并拍照。

2.6 当归芍药散含药血清对Aβ诱导的胆碱能神经元Caspase-3活化的影响

2.6.1 免疫荧光检测胆碱能神经元ChAT和cleaved Caspase-3蛋白表达 在12孔板中放置圆形盖玻片，接种5×104个细胞使细胞爬片，模型组用30 μmol/L Aβ25-35处理16 h，5%、10%当归芍药散组在构建Aβ诱导模型后，分别加入5%、10%当归芍药散含药血清处理24 h。按“2.5”项下方法固定细胞并封闭，PBS清洗3次，分别加入ChAT鼠抗（1∶100）和cleaved Caspase-3兔抗（1∶200），4 ℃孵育过夜，PBS清洗3次，分别加入驴抗鼠荧光二抗Alexa Fluor 488（1∶600）、驴抗兔Cy3（1∶600），室温孵育1 h；PBS洗涤3次，从孔板中捞出圆形盖玻片，反向扣于载玻片上，用抗淬灭封片剂封片固定，采用A1＋共聚焦激光显微镜观察和拍照。

2.6.2 图像获取与计数 ChAT/Caspase-3双染色免疫荧光实验采用基底前脑细胞重复培养3次。对于每次重复，每个条件至少分析2个玻片。细胞计数时，每张玻片随机获得10个目标区域（20×物镜，每个视野含有约40～50个细胞）。不同阶段A1＋共聚焦激光显微镜观察，每个通道采集参数设置（增益、曝光时间、激光强度）保持固定。计数具有完整的细胞核、共定位胞质cleaved Caspase-3和ChAT的细胞。最终结果显示cleaved Caspase-3阳性细胞与ChAT阳性神经元或ChAT阴性神经元的百分比。

2.6.3 Western blotting检测胆碱能神经元cleaved Caspase-3蛋白表达 按“2.6.1”项下方法分组并处理细胞，收集细胞，加入含蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液匀浆，4 ℃孵育30 min，4 ℃、12 000 r/min离心20 min，取上清。用BCA蛋白定量分析试剂盒测定上清液的总蛋白含量。加入5×上样缓冲液，100 ℃金属浴20 min，使蛋白变性，于−80 ℃保存。蛋白样品经10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至PVDF膜，加入5%脱脂牛奶，于室温封闭1 h；分别加入兔抗cleaved Caspase-3（1∶1000）和鼠抗β-actin（1∶5000），4 ℃孵育过夜；吸弃一抗，TBST洗涤3次，每次10 min，孵育对应二抗，37 ℃孵育1 h；吸弃二抗，TBST洗涤3次，每次10 min，加入显影液，采用凝胶成像仪成像分析。

2.7 当归芍药散含药血清对Aβ诱导的胆碱能神经元CREB/Bcl-2通路相关蛋白表达的影响

2.7.1 免疫荧光检测胆碱能神经元ChAT和p-CREB蛋白表达 在12孔板中放置圆形盖玻片，接种5×104个细胞使细胞爬片，模型组用30 μmol/L Aβ25-35处理16 h，Forskolin组和10%当归芍药散组在构建Aβ诱导模型后，分别加入10 μmol/L Forskolin、10%当归芍药散含药血清处理24 h。吸弃培养液，用预冷的含5%冰醋酸的甲醇于4 ℃固定45 min，PBS洗涤3次，用3%牛血清白蛋白于室温封闭1 h；PBS清洗3次，分别加入ChAT鼠抗（1∶100）和p-CREB兔抗（1∶200），4 ℃孵育过夜，PBS清洗3次，分别加入驴抗鼠荧光二抗Alexa Fluor 488（1∶600）、驴抗兔Cy3（1∶600），室温孵育1 h；PBS洗涤3次，从孔板中捞出圆形盖玻片，反向扣于载玻片上，用抗淬灭封片剂封片固定，采用A1＋共聚焦激光显微镜观察和拍照。

2.7.2 Western blotting检测胆碱能神经元p-CREB、CREB和Bcl-2蛋白表达 按“2.7.1”项下方法分组并处理细胞，提取细胞总蛋白，蛋白样品经10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至PVDF膜，加入5%脱脂牛奶，于室温封闭1 h；分别加入鼠抗p-CREB（1∶1000）、兔抗CREB（1∶1000）、兔抗Bcl-2（1∶1000）和鼠抗β-actin（1∶5000），4 ℃孵育过夜；吸弃一抗，TBST洗涤3次，每次10 min，孵育对应二抗，37 ℃孵育1 h；吸弃二抗，TBST洗涤3次，每次10 min，加入显影液，采用凝胶成像仪成像分析。

2.8 统计数据

采用SPSS 26.0软件进行采用单因素方差分析，计量资料以表示，＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 当归芍药散含药血清对Aβ诱导的胆碱能神经元细胞存活率的影响

采用MTT检测不同浓度Aβ25-35（15、30、60 μmol/L）作用于胆碱能神经元细胞的存活率，细胞活率分别为82%、51%、40%，因此选取30 μmol/L Aβ25-35作为Aβ诱导胆碱能神经元损伤模型浓度。当归芍药散含药血清对Aβ损伤胆碱能神经元细胞存活率的影响如图1所示，2.5%、5.0%、10.0%当归芍药散作用于Aβ损伤胆碱能神经元的细胞存活率分别为60%、87%和92%，与模型组相比，5.0%、10.0%当归芍药散组胆碱能神经元细胞存活率显著升高（＜0.01），提示当归芍药散能够提升Aβ损伤胆碱能神经元的细胞存活率，且呈剂量相关性。

与对照组比较：**P＜0.01；与模型组比较：#P＜0.05 ##P＜0.01，下图同

3.2 当归芍药散含药血清改善Aβ诱导的神经元凋亡

TUNEL染色和PI/Hoechest细胞凋亡染色结果见图2，与模型组相比，5%、10%当归芍药散能够明显减少神经细胞凋亡数（＜0.01），PI阳性细胞率也显著降低（＜0.01），且呈剂量相关性，表明当归芍药散含药血清能抑制Aβ诱导的神经元凋亡。

3.3 当归芍药散含药血清对Aβ诱导的胆碱能神经元Caspase-3活化的影响

为了进一步明确当归芍药散是否对胆碱能神经元凋亡有抑制作用，采用胆碱能神经元标志物ChAT与凋亡标志物cleaved Caspase-3进行免疫荧光双染。如图3所示，Aβ毒性作用下基底前脑神经元ChAT表达明显减少，神经元相连的胞体崩解破碎，cleaved Caspase-3表达明显增加；给予当归芍药散含药血清干预后，神经元形态结构趋于完整，ChAT表达明显增加，cleaved Caspase-3表达明显减少。进一步检测了基底前脑神经元cleaved Caspase-3表达情况，结果如图3所示，与对照组相比，模型组促凋亡蛋白cleaved Caspase-3表达水平明显升高（＜0.01），5%、10%当归芍药散含药血清能够显著降低cleaved Caspase-3蛋白表达水平（＜0.01），且呈剂量相关性。

图2 当归芍药散含药血清改善Aβ诱导的神经元凋亡

图3 当归芍药散含药血清减少Aβ诱导的胆碱能神经元cleaved Caspase-3蛋白表达

3.4 当归芍药散含药血清通过CREB/Bcl-2通路抑制Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡

ChAT/p-CREB荧光双染结果如图4所示，Aβ毒性作用下基底前脑神经元胞体内p-CREB表达明显减少，给予腺苷酸环化酶激动剂Forskolin后p-CREB表达显著增加，10%当归芍药散含药血清组p-CREB表达显著增加，与Forskolin效果类似。进一步检测CREB/Bcl-2通路相关蛋白表达情况，发现与对照组相比，模型组p-CREB和Bcl-2蛋白表达水平明显降低（＜0.01）；与模型组相比，Forskolin和10%当归芍药散含药血清组p-CREB和Bcl-2蛋白表达水平均显著升高（＜0.05、0.01）。

图4 当归芍药散含药血清对Aβ诱导的胆碱能神经元CREB/Bcl-2通路的影响

4 讨论

中药含药血清是方剂药理学细胞实验常用的媒介，当归芍药散全方由当归、芍药、川芎、茯苓、白术和泽泻6味中药组成，其中主要药效成分有单萜苷类成分芍药苷和芍药内酯苷，机酸类成分阿魏酸、三萜类成分24-乙酰泽泻醇A和24-乙酰泽泻醇B，以及白术内酯I和茯苓酸。本课题组前期已有研究用HPLC-MS/MS技术测定当归芍药散提取物和含药血清中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸的含量，用于该方提取物及含药血清的质量控制[15]，并验证了当归芍药散含药血清具有减少氧化损伤、抗神经元凋亡和神经保护作用[10-11]。因此，本研究以此为基础来验证当归芍药散含药血清改善Aβ诱导的胆碱能神经元凋亡的作用机制。

越来越多的证据表明Aβ的过度积累是导致AD的最重要的病理事件，Aβ具有直接的神经元毒性，同时Aβ的过度沉积会引起神经元炎症反应间接损害神经元，最终表现为神经元凋亡[16]。胆碱能功能障碍是AD患者记忆加工障碍的主要原因之一。Ach是一种神经递质，在组织内迅速被胆碱酯酶破坏。在神经细胞中，Ach由胆碱和乙酰辅酶A在ChAT的催化作用下合成，ChAT是参与Ach合成的关键胆碱能标记物[17]。研究认为，人体内Ach含量增多与阿尔兹海默病的症状改善显著相关，Ach的维持对正常功能至关重要，AD患者中ChAT的缺陷和酶活性降低会导致大脑中Ach水平显著降低[18]。过表达ChAT的人类神经干细胞可以通过释放Ach恢复胆碱能神经元功能，同时能恢复小胶质细胞功能，减少Aβ沉积，从而改善AD动物的认知功能[19]。本研究结果表明，Aβ毒性作用下可显著降低基底前脑神经元ChAT蛋白表达，同时诱发神经元凋亡，提示所观察到的神经元凋亡是胆碱能功能障碍所致。而当归芍药散含药血清可明显减轻Aβ介导的胆碱能功能障碍，发挥与腺苷酸环化酶激活剂Forskolin类似的作用。

CREB介导的转录可由膜受体刺激并激活细胞内通路将信号传递到细胞核来启动，被认为是学习和记忆所需的分子开关，CREB磷酸化被认为是导致转录激活的原因，可产生脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）等细胞因子，在突触可塑性和认知功能中起关键作用[20]。CREB磷酸化过程受损是神经退行性疾病的一个已知病理因素，通过促进凋亡的过程触发海马和皮层神经元的丢失[21]。CREB的抑制会影响各种记忆测试中的行为表现。相反，CREB的过度表达抑制了神经细胞凋亡，并通过激活CREB/神经生长因子（nerve growth factor，NGF）信号通路恢复胆碱能和抗凋亡活性，从而改善东莨菪碱毒性所致的小鼠认知功能障碍[22]。因此在与认知相关的大脑区域中通过药物干预诱导CREB磷酸化，可能成为开发治疗AD药物的新途径。Bcl-2的上游启动子区域有1个CREB结合位点，该位点已被证明是由CREB的激活引起B细胞活化来挽救细胞凋亡，说明CREB/Bcl-2通路具有抗凋亡作用[23]。本研究结果显示，当归芍药散含药血清显著增加了CREB在基底前脑神经元的磷酸化水平。此外，与对照组相比，当归芍药散含药血清治疗后基底前脑神经元抗凋亡蛋白Bcl-2的表达显著增加，凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3的表达显著降低。TUNEL染色实验表明，当归芍药散含药血清治疗后，基底前脑神经元凋亡明显减少。这些结果表明当归芍药散含药血清可能通过激活CREB磷酸化和CREB/Bcl-2通路抑制神经元凋亡，从而发挥胆碱能神经元保护作用。

综上，本研究证明了当归芍药散含药血清对Aβ所致基底前脑神经元胆碱能系统损伤具有保护作用，其机制可能是激活CREB/Bcl-2信号通路和抑制凋亡相关通路，从而对胆碱能系统发挥保护作用。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Mechanism of Danggui Shaoyao San on ameliorating Aβ-induced apoptosis of cholinergic neurons based on CREB/Bcl-2 signaling pathway

LI Ze, YIN Fang, YANG Miao, YU Wen-jing, LUO Rong-si-qing, ZHOU Jin-yong, LI Ping, SONG Zhen-yan, CHENG Shao-wu

Hunan Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Prevention and Treatment of Cardio-Cerebral Diseases, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China

To study the protective effect and mechanism of Danggui Shaoyao San (当归芍药散, DSS) on amyloid β-protein (Aβ)-induced cholinergic neuron injury.Basal forebrain neuron injury model was induced by 30 μmol/L Aβ25-35, 2.5%, 5.0% and 10.0% DSS containing serum were given for intervention, MTT assay was used to detect cell survival rate; TUNEL and PI/Hoechst fluorescence staining were used to detect neuronal apoptosis; Choline acetyltransferase (ChAT)/phosphorylated cAMP-response element binding protein (p-CREB) and ChAT/cleaved cystein-asparate protease-3 (Caspase-3) fluorescence double staining were used to detect the anti-apoptotic effect of DSS on cholinergic neurons; Western blotting was used to detect the expressions of CREB/B-cell lymphoma 2 (Bcl-2) signaling pathway related proteins.DSS serum (5.0% and 10.0%) significantly increased the cell survival rate of Aβ-injured cholinergic neurons (< 0.01), improved Aβ-induced apoptosis (< 0.01) and decreased activation level of Caspase-3 (< 0.01). DSS serum (10%) reversed Aβ-induced decrease in p-CREB level (< 0.01) and increased expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 (< 0.05).DSS may ameliorate Aβ-induced apoptosis of cholinergic neurons through CREB/Bcl-2 signaling pathway.

Danggui Shaoyao San; amyloid β-protein; cholinergic neuron; apoptosis; cAMP-response element binding protein; B-cell lymphoma 2

R285.5

A

0253 - 2670(2022)08 - 2376 - 07

.7501/j.issn.0253-2670.2022.08.014

2021-12-28

国家自然科学基金资助项目（81774129）；国家自然科学基金资助项目（82004184）；湖南省教育厅科研基金重点项目（21A0241）；2019年湖湘高层次人才聚集工程-创新人才（2019RS1064）；2021年度湖南省大学生创新创业训练计划项目（S202110541049）

李 泽，硕士，研究方向为中西医结合神经退行性疾病防治研究。E-mail: 769428761@qq.com

宋祯彦，硕士，高级实验师，主要从事中西医结合神经退行性疾病防治研究。E-mail: songzhenyan2013@hnucm.edu.cn

成绍武，博士，教授，研究方向为中西医结合防治神经退行性疾病。E-mail: scheng@hnucm.edu.cn

[责任编辑 李亚楠]