55对不良孕产史夫妇的细胞遗传学研究

曾南阳，谢妍，洪钦明，王彧

1.广东省揭阳市榕城区妇幼保健计划生育服务中心 检验科，广东 揭阳 522000；2.广东省揭阳市榕城区妇幼保健计划生育服务中心 产前诊断生殖保健中心，广东 揭阳 522000

0 引言

不良孕产史是指曾经有过唇腭裂、神经管缺损、唐氏综合征等畸胎儿生育史，胚胎停育、死胎、死产、自然流产等妊娠史[1]。二胎开放后，优生优育咨询门诊中有过不良孕产史的患者越来越多，随着社会经济的发展，生活水平的提高，不良孕产史的问题越来越被人们关注。对于已婚夫妇而言，不良孕产史疾病的发生率较高。脱氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid，DNA）的主要载体为染色体，如果染色体出现数目异常或者结构畸变，有可能增加或减少基因，从而导致不良孕产[2]。不良孕产史的病因十分复杂，染色体异常、内分泌异常、环境及母体全身性疾病等都有可能是其发生的原因[3]。其中孕早期流产的胚胎组织中，染色体异常的发生率为50%～60%。现代医学理念认为，在精准医学的发展下，根据个体差异制定疾病的预防和发展方案，有助于疾病的诊断和治疗，因此进行外周血染色体检查非常必要[4]。这对了解不良孕产的原因诊断有重要的意义，更重要的是检出携带者，包括家族中的携带者，对明确有染色体异常者，应进行产前诊断，避免遗传病患儿出生，对做好优生优育，提高人口素质有重要意义，同时也是为人类遗传性疾病的诊断寻找病因提供了科学依据[5]。基于此，本研究选择于本院治疗的不良孕产史夫妇探讨其染色体异常的发病率，及筛查外周血染色体的意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年5月-2021年2月于广东省揭阳市榕城区妇幼保健计划生育服务中心治疗的不良孕产史夫妇110例（55对）作为研究对象，临床特征呈现出胚胎停育、习惯性流产、畸胎史、染色体异常儿孕产史等。本研究经本院伦理委员会批准，且所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

染色体核型检查方法：取患者静脉血4mL，肝素钠（厂家：国药集团容生制药有限公司；生产批号：国药准字H20033326）抗凝，接种于外周血细胞培养基，用1mL无菌注射器加0.5mL于培养基内，然后混匀，在37℃培养箱培养约72h，而后加入80μL秋水仙素（浓度：100μg/mL；厂家：西双版纳版纳药业有限责任公司；生产批号：国药准字H53020871），继续培养30min，再收获滴片烤片，进行G显带处理。每个患者常规计数20个中期分裂相，分析5个核型，嵌合体核型数到100个。根据人类细胞遗传学国际命名体制（international system for human cytogenetic nomenclature，ISCN）2016的标准描述染色体核型。

1.3 观察指标

观察所有不良孕产史夫妇的临床表现及异常核型，同时比较不同性别、流产次数染色体异常检出率。

1.4 统计学方法

应用SPSS 20.0统计软件进行统计分析，计数资料采用例或率表示，比较用χ2检验，P＜0.05时，差异有统计学意义。

2 结果

2.1 110例不良孕产史夫妇异常核型及临床表现

在110例不良孕产史夫妇中，22例出现染色体异常，占比20.00%。其中7例平衡易位，占比31.82%（7/22）；15例正常变异，占比68.18%（15/22）。正常变异中，2例染色体倒位，占比13.33%（2/15）；13例染色体多态性，占比86.67%（13/15），见表1。

表1 不良孕产史夫妇110 例异常核型及临床表现

2.2 不同性别染色体异常检出率比较分析

不同性别染色体异常检出率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 不同性别染色体异常率比较（n，%）

2.3 不同流产次数染色体异常检出率比较分析

不同流产次数染色体异常检出率对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 不同流产次数染色体异常检出率比较（n，%）

3 讨论

目前，由于染色体异常治疗困难，疗效不满意，对于先天性智能障碍的治疗也没有有效药物[6]。不同类型染色体发育不全预后不尽相同，智力低下和生长发育迟滞是染色体病的共同特征[7]。有文献报道染色体异常在自然流产患者中的发生率约为12.6%。性染色体从胎儿期就决定了个体的性分化、性成熟，从而影响了患者的生殖器官发育、第二性征及身高、智力等[8]。性染色体异常在女性患者中表现为原发性闭经、月经不调、性器官发育差，而在男性患者表现为小睾症、无精子症、外生殖器发育差，甚至出现女性第二性征等，结果均造成了生殖能力的下降甚至丧失，常见的有特纳综合征（45，X）及克氏综合征（47，XXY）等[9]。

随着生命科学和医学科学的发展，人们逐渐认识到医学实践中所遇到的一些问题需要用遗传学的理论和方法才能得以解决，遗传已成为现代医学中的另外一个重要方面，临床医生在临床工作中遇到越来越多的遗传学问题，其中染色体异常与不良孕产史有着密切的关系。染色体是遗传物质的载体，它具有储存和传递DNA、控制基因活动和调整基因重组的作用[10]。人类染色体核型分析是将人的一个体细胞有丝分裂中期的染色体，在G显带技术基础上，按照染色体的大小和形态特征，对染色体进行分组、排队和配对[11]。这对探索人类遗传病的发病机制具有重要意义。

染色体易位同不良孕产史有一定相关性，染色体易位中比较常见的就是罗伯逊易位与平衡易位，属于临床中最常见的一种造成胚胎停育及流产的不正常核型。平衡易位的患者因为未丢失遗传物质，通常有正常的智力及临床表型，然而病人生殖细胞于减数分裂期间会分裂18种配子，同正常人婚配有1/18的概率会分娩正常的后代，1/18属于有正常表型的易位携带者[12]。于减数分裂期间，正常染色体会被易位染色体干扰，出现杂合体，于临床上呈现为无精症或生精阻滞。本研究110例不良孕产史夫妇中，7例出现平衡易位，均有不良孕产史。

染色体倒位因为未具有遗传物质改变，所以染色体倒位患者的表型往往是正常的，然而它能够出现类型不同的4种配子，若倒位圈内交换1次，染色体倒位患者会携带不平衡配子2种，若倒位圈不交换，会出现倒位染色体配子及正常配子各1种[13]。不平衡配子是一些缺失或重复不正常染色体携带者，他们缺失或重复片段的基因致死效应及片段长短是遗传效应产生的关键。倒位的片段越长，基因缺失或重复片段就越短，这一配子同正常配子相结合的合子比较容易孕育到生产，但是产出的婴儿通常是畸形儿，与此相反，倒位的片段越短，基因缺失或重复片段就越长，这种状况的合子不容易生长发育，较大可能会引发死胎或流产。本研究110例不良孕产史夫妇中，2例出现倒位，均有不良孕产史。

染色体多态性为染色体的诸多微小变异，通常出现于染色体之异染色质区域内，这一区域DNA序列高度重复，其中结构基因几乎不含编码，往往不具有转录活性，所以染色体多态性通常不会导致严重后果，因此，能够同传统染色体异常区分[14]。多态性变异通常仅涉及同源染色体一对中的一个，特征是16、1、9号染色体次缢痕区缩短或变长，着丝粒区域荧光强度变异、G或D组短臂增长等。Y染色体长臂变异也包含在多态性变异内。多态性变异发生于异染色质区域，因此，携带者表型被影响的程度通常不明显，异染色质区DNA序列高度重复，且在遗传上不活跃，所以传统观点认为不良孕产史同多态性没有显著关系。然而相关学者认为异染色质区域增减DNA序列，能干扰细胞分裂进而引发同源染色体配对困难，出现非整倍体胚胎、不平衡配子的概率增加，最终引发流产、死胎等[15]。本研究110例不良孕产史夫妇中，13例出现多态性，均有不良孕产史。

相关文献显示，于反复流产夫妇中，女性染色体异常率明显高于男性，认为主要是因为男女生殖细胞数目差异导致，异常核型携带者的精子于受精期间通过优胜劣汰选择[16]。然而，本次研究显示，22例异常核型病人中，10例为女性，检出率为18.18%，12例为男性，检出率为21.82%，差异无统计学意义，所以需对不良孕产史夫妇双方进行染色体检查。本研究有43例患者因自然流产就诊，占比78.18%，于自然流产病人中检出染色体异常的概率为20.93%，同自然流产胚胎内的染色体异常检出率（50%～60%）[17]相比，明显较低。本研究显示，不同流产次数检出染色体异常的概率无统计学差异。

综上所述，染色体异常为造成不良孕产的一个重要原因，细胞遗传学研究对于明确不良孕产史夫妇的病因有帮助。