3 株水产病原维氏气单胞菌对常用抗菌药物耐药性比较分析

2022-04-13汤环宇翟伟朱鑫海周一凡唐建清张晓君

水产养殖 2022年2期

汤环宇，翟伟，朱鑫海，周一凡，唐建清，张晓君

（1.扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州 225009；2.江苏省淡水研究所，江苏南京 210017）

本研究采用纸片扩散法（K－B 法）测定了分离自罗氏沼虾、克氏原螯虾和青虾的3 株维氏气单胞菌对37 种抗菌类药物的敏感性，同时采用试管稀释法测定了5 种抗菌药物对这3 株病原维氏气单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），研究结果可为水产养殖中维氏气单胞菌引起的水生动物疾病的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

维氏气单胞菌JDM2020 分离自扬州高邮市某养殖场患病罗氏沼虾，维氏气单胞菌CPA2020 分离自江苏省泗洪县某养殖场患病克氏原螯虾，维氏气单胞菌GJL2020 分离自扬州市某养殖场患病青虾。3 株维氏气单胞菌均保存于实验室备用。

1.2 试验药品

表1 5 种抗菌药药品信息

1.3 病原菌药物敏感性测定

病原菌对37 种抗菌类药物的敏感性测定采用常规琼脂扩散法。将菌JDM2020、CPA2020和GXL2020 分别接种于普通营养肉汤，在28 ℃，180 r/min 的摇床中培养 24 h 后，取 100 L 菌液均匀涂布于普通营养琼脂平板上。待自然干后，用经灭菌的镊子取药敏纸片依次平贴于涂布细菌的培养基表面，每个平板贴6 张药敏纸片，重复3 次。置28 ℃培养箱中培养24 h 后测量抑菌圈直径，并根据药敏纸片使用说明书判定敏感性。

1.4 病原菌对5 种常见药物的MIC 和MBC 测定

将菌株 JDM2020、CPA2020 和 GXL2020 分别接种于普通营养肉汤中，在28 ℃，180 r/min 的摇床中培养24 h 后，将菌液浓度稀释至10CFU/mL。5 种药物各设 14 个浓度梯度试验组（30，25，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3，2 和 1 mg/L）和 1 个空白对照组。各试验组分别加入0.1 mL 上述菌液，空白对照组不加菌液。每个试验组设3 个重复。振荡使被测菌与药液充分混匀，置28 ℃恒温培养24 h 后，肉眼观察呈现澄清且摇动后仍澄清者，则表示无细菌生长（被抑制）；若呈混浊状态则表示有细菌生长（无抑制）。无细菌生长的最大稀释度的药液，即为该药物的MIC。从澄清的试管中吸取0.1 mL，涂布于普通营养琼脂平板，于28 ℃培养箱中培养24 h后，仍无细菌生长的最低药物浓度为供试药物对细菌的MBC。

2 结果与分析

2.1 3 株不同来源维氏气单胞菌对37 种抗菌类药物的敏感性

通过纸片扩散法测定罗氏沼虾源维氏气单胞菌JDM2020、克氏原螯虾源维氏气单胞菌CPA2020、青虾源维氏气单胞菌GXL2020 对供试37 种抗菌类药物敏感性见表2。结果显示，罗氏沼虾源维氏气单胞菌JDM2020 对头孢呋辛、氧氟沙星和左氟沙星等9 种药物敏感，对氟苯尼考、庆大霉素、头孢唑林、氨曲南等14 种药物中介，对恩诺沙星、诺氟沙星、卡那霉素等14 种药物耐药。克氏原螯虾源维氏气单胞菌CPA2020 对氯霉素、头孢呋辛、左氟沙星等13 种药物敏感，对恩诺沙星、氟苯尼考、卡那霉素等10 种药物中介，对复方新诺明、环丙沙星、氨苄西林等14 种药物耐药。青虾源维氏气单胞菌GXL2020 对氟苯尼考、妥布霉素、头孢呋辛等10 种药物敏感，对恩诺沙星、卡那霉素、庆大霉素等17 种药物中介，对四环素、青霉素G、环丙沙星等10 种药物耐药。

表2 3 株不同来源维氏气单胞菌对37 种抗菌药物的敏感性①

续表

2.2 5 种抗菌药物对3 株不同来源维氏气单胞菌的MIC

表3 5 种抗菌药对3 株维氏气单胞菌MIC①

2.3 5 种抗菌药物对3 株不同来源维氏气单胞菌的MBC

表4 5 种抗菌药对3 株不同来源维氏气单胞菌的MBC①

3 讨论

为指导对维氏气单胞菌引起的水生动物疾病的精准用药，研究开展了不同来源的维氏气单胞菌对常见抗菌药物的敏感性测定，并采用试管稀释法测定了养殖生产中常用的5 种抗菌药物对不同来源的维氏气单胞菌的MIC 和MBC，结果发现氟苯尼考、恩诺沙星对维氏气单胞菌的杀菌效果最好，可用较低浓度杀灭不同来源的维氏气单胞菌。氟苯尼考可以通过抑制转肽酶，使肽酶的增长受阻，抑制细菌内肽链的形成，从而阻止蛋白质的合成，达到抗菌目的，亦具有广谱抗菌作用。恩诺沙星属第三代氟喹诺酮新药，具有良好的抗菌活性，而且杀菌力强，吸收快，被广泛用于水产养殖业。