那曲尼玛县牦牛布氏杆菌病血清抗体检测初报

央 珍，王玉恒，吉哈利，于子淇，周海娟，普布卓玛，丹真次旦

（1.西藏自治区动物疫病预防控制中心(畜牧总站) 850000；2.西藏自治区兽医生物药品制造厂 850000；3.那曲市畜牧兽医技术推广总站 852000；4.西藏莲茎生物科技有限公司 850000）

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种流产、生殖器官和胎膜发炎等临床症状的人畜共患传染病，牛、羊、猪等动物最常发。迄今为止，该病在世界范围内广泛传播，对畜牧业和人类健康造成严重损害[1-2]。因此对于该病的监测以及防控尤为重要。酶联免疫吸附试验（ELISA）是国际贸易中检测牛种布鲁氏菌病的指定试验，这种方法可以用于乳汁检查，还可用于血清学检查[3]。本文用 ELISA 试验方法对西藏那曲市尼玛县牦牛血清进行检测，以了解该病在本地区的流行情况，为该病防控提供一定参考。

1 材料

1.1 血清

西藏牦牛血清100份，采集于西藏那曲市尼玛县。2℃～8℃保存，4h送至兽医生物实验室。

1.2 检测试剂

布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒购于洛阳莱普生信息科技有限公司，生产批号为20191204。

1.3 仪器

酶标分析仪（DNX-9620，北京普朗新技术有限公司）、恒温培养箱（GNP-9050，上海三发科学仪器有限公司）、台式高速冷冻离心机（TGL16，湖南星科科学仪器有限公司）、电热恒温水浴锅（HH-2A，北京科伟永兴仪器有限公司），其他耗材均为Corning公司产品。

2 试验方法

在稀释板上利用样品稀释液5倍稀释待检样品，并吹打混匀；取预包被的酶标板，加入50μL牛阴性对照血清和50μL牛阳性对照血清，在相应的孔中加入50μL稀释样品，然后每孔再加50μL抗体溶液和酶结合物的混合物，混合均匀后于37℃条件下温育30min；将各孔的液体废弃，利用300μL洗涤液洗涤板孔，共重复洗涤5次，在最后一次洗涤液弃去后，将孔中残留的洗涤液在吸水纸上拍干；每酶标孔加入50μL显色液A和50μL显色液B；在37℃条件下温育15min； 每孔加入50μL终止液，振荡混匀，终止反应；在酶标仪上测量并且记录样品和对照的OD值（450nm）。

3 结果

由表1可得，那曲市尼玛县100份牦牛血清均为布氏杆菌病抗体阴性。

表1 西藏那曲牦牛中的布氏杆菌抗体与其他文献数据对比情况

4 讨论

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种流产、生殖器官和胎膜发炎等临床症状的人畜共患传染病，牛、羊、猪等动物最常发。迄今为止，该病在世界范围内广泛传播，对畜牧业和人类健康造成严重损害[1-2]。因此对于该病的日常监测以及防控尤为重要。本实验利用 ELISA 检测方法对西藏那曲市尼玛县100份牦牛血清进行血清抗体检测，结果显示100份牦牛血清中未检测到布氏杆菌病抗体，进一步表明西藏那曲市尼玛县无布氏杆菌病分布，这可能与西藏那曲市养殖环境、地理位置等原因，导致该病没有传播途径。此外与当地兽医主管部门重视传染病的防疫也有一定关系。2007年、2015年分别在新疆库尔勒地区、吉林松原地区和吉林延边地区的牛群中检测到布氏杆菌病抗体，阳性率为10.97%、35.90%、58.13%。由此可见，布鲁氏杆菌病在其他省区较为普遍，阳性率较高。虽然本次在西藏那曲市尼玛县没有检测到该病分布，但也应该保持警惕，做好日常监测，防止该病的传入。

5 原因分析及防控措施

5.1 该病阳性率较高的原因分析

当发现布鲁氏杆菌病时，通常会采取屠宰患病动物和对健康动物进行隔离和免疫等措施，但有个别养殖场对于奶牛、种羊、种牛等经济价值较高的病畜，采取隔离、逐渐淘汰等措施，从而该病传染源没有彻底清除，导致该病在牛群中流行；饲养管理不到位，常见流产羔羊、死胎等随处乱放的恶性习惯；饲养环境消毒不全面，常见消毒药选择不匹配、配制不准确、使用不正确等问题，导致消毒效果大大降低；养殖人员自我防护意识薄弱，对于该病的危害认识不充分，也是布氏杆菌病流行主要原因之一。

5.2 防控措施

布鲁氏菌病防控是一场长期的斗争，要做好长期防控的准备。 一经发现，应严格按照有关法律、法规的规定，采取隔离、接种、屠宰等措施，彻底切断该病传播环节，避免该病再次流行，造成二次危害；对于易感动物进行强制性免疫，提高免疫密度；提升养殖人员动物疫病相关知识，做好自我防护；对于养殖环境进行定期消毒，定期更换消毒种类，从而切断该病传播途径；并时刻关注疫情变化和发展走向，加强饲养管理，严格执行免疫程序，尽一切力量控制布氏杆菌病的暴发和流行[6-10]。