安顺市烟草根结线虫病防控药剂室内毒力测定

代 飞 代惠娟李沛柏 张 权 白茂军 陈恩发

（1贵州省烟草公司安顺市公司，贵州安顺 561000；2河北中烟工业有限责任公司，河北石家庄 050000；3贵州省农业科学院植物保护研究所，贵州贵阳 550009）

烟草根结线虫病作为世界性病害之一，在世界各烟区均有分布。烟草根结线虫主要寄生于烤烟根系，造成根系吸收养分受阻，导致烟株叶片叶尖周围产生焦尖焦边，降低烟株对其他病害的抵抗力，形成复合感染，直至烟株死亡，降低烟草产量和质量，对烟区种烟农户造成了重大经济损失，轻的损失30%左右，重的造成绝收。近年来，烟草根结线虫病已逐渐上升为贵州烟区的主要病害之一。目前，在烟草根结线虫病防控研究方面，大多以直接在田间采用化学药剂防治的方式开展试验，这些化学药剂中有许多是高毒性、高残留农药，施用后会对烟地及环境造成严重污染，长此以往，还会对人体产生负面影响[1-5]。在烟草根结线虫病防治方面，目前虽然也有报道，但各种处理方式很不统一，毒力测定也主要是对田间防治的一种印证。本研究针对安顺市实际，先在室内对烟草根结线虫病防控药剂进行测定与筛选，主要目的是事前对高污染、高残留、衰减期过长、对环境不友好的农药进行筛选，遴选适宜的药剂用于病虫害防治，避免此类污染再次发生，为大田用药提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试线虫为烟草根结线虫，从安顺市西秀区试验地云烟85烟株根结样品中分离而得。

供试药剂有90%阿维菌素原粉（华北制药爱诺股份有限公司生产）、25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐（华北制药爱诺股份有限公司生产）、81.7%噻唑膦原油（寿光市申达化学工业有限公司生产）、90%丁硫克百威原油（冀州市凯明农药有限公司提供）、灭线磷（德国Dr公司生产）、硫线磷（FMC公司提供）。

试验药剂母液的配制方法：用90份99.5%丙酮溶解2份原药，然后加8份Tween-20乳化。将25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、90%阿维菌素原粉、灭线磷、硫线磷分别配制成 25、50、100、200、400 mg/L 梯度，81.7%噻唑膦原油配制成 10、20、40、80、160 mg/L梯度，90%丁硫克百威原油配制成 100、200、400、800、1 600 mg/L梯度，备用。

1.2 试验方法

1.2.1 根结线虫二龄幼虫悬浮液的制备。取有大量根结的烤烟根系，用自来水轻轻冲洗干净，将病根剪成5 cm小段，在1%次氯酸钠溶液中漂洗约4 min，用竹片轻取烟根上表面组织，利用200目与500目线虫筛收集线虫卵，放入直径8 cm的小培养皿内，加入少量无菌水，在25℃恒温箱中孵化3～4 d，收集二龄幼虫，并加入无菌水将其配制成浓度500条/mL左右的悬浮液备用。

1.2.2 室内毒力测定方法。取96孔细胞培养板，每孔加入0.15 mL线虫悬浮液，每列为1个浓度处理，重复3次，使25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐、90%阿维菌素原粉、灭线磷、硫线磷在孔板中的浓度均分别为 25、50、100、200、400 mg/L，81.7%噻唑膦原油浓度分别为 10、20、40、80、160 mg/L，90%丁硫克百威浓度分别为 100、200、400、800、1 600 mg/L。

1.3 调查统计

根结线虫的死亡可从线虫形态做出判断，死亡的线虫身体僵直或有呈角度的弯折，未死亡的根结线虫虫体有呈弧度的弯折。若从根结线虫的形态无法明确判断其死亡与否，48 h后可采用针刺法判断。计算死亡率、校正死亡率、LC50及LC95，用DPS软件计算出药剂的毒力回归方程、LC50和LC95置信限，用SPSS软件计算差异显著性[6-8]。计算公式如下：

死亡率（%）=死亡二龄线虫数/处理二龄线虫数×100；

校正死亡率（%）=（处理线虫死亡率-对照线虫死亡率）/（1-对照线虫死亡率）×100。

2 结果与分析

2.1 6种农药不同浓度处理对烟草根结线虫二龄幼虫校正死亡率的影响

由表1可知，无论是24 h后还是48 h后，烟草根结线虫二龄幼虫的校正死亡率均呈现出一定的规律，即随着每种农药浓度的增加，校正死亡率均呈上升趋势；不同浓度梯度处理间存在差距，最大浓度与最小浓度之间差异极显著。24 h校正死亡率与48 h校正死亡率存在差异，总体表现为48 h校正死亡率略高于24 h校正死亡率，但基本无显著性差异，其中25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和90%阿维菌素原粉出现48 h后25 mg/L和50 mg/L浓度的校正死亡率较24 h低的现象，原因是根结线虫假死，于48 h后复苏。从6种药剂对烟草根结线虫二龄幼虫的抑制作用分析，81.7%噻唑膦原油以较低的浓度就能较好地抑制烟草根结线虫二龄幼虫，而90%丁硫克百威原油需要很大的浓度才能抑制，总体抑制活力大小表现为81.7%噻唑膦原油＞90%阿维菌素原粉＞25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐＞硫线磷＞灭线磷＞90%丁硫克百威原油。因此，用量少、成本低、效果佳、田间易操作成为首选方案之一。

表1 6种药剂不同浓度对烟草根结线虫二龄幼虫的影响

2.2 6种农药不同浓度处理对烟草根结线虫二龄幼虫毒力测定运算结果分析

由表2可知，6种药剂对根结线虫二龄幼虫均有一定的毒力作用，药后48 h对二龄幼虫的毒力有所提高。对6种药剂对烟草根结线虫二龄幼虫的毒力显著性分析表明，各处理间均存在差异，81.7%噻唑膦原油24 h LC50为29.13 mg/L，对烟草根结线虫二龄幼虫毒力最强；90%阿维菌素原粉、25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐及硫线磷对烟草根结线虫二龄幼虫的毒力低于81.7%噻唑膦原油，优于其他供试药剂，三者LC50相差甚微，未达显著水平；灭线磷及90%丁硫克百威原油毒力相对较低。24 h LC95毒力略有差异，但总体趋势基本一致。81.7%噻唑膦原油的48 h LC50为21.34 mg/L，与24 h有少许差别，对烟草根结线虫二龄幼虫毒力最强；48 h LC95毒力虽然略有差异，但是总体趋势也基本与24 h LC50一致。从各处理的毒力分析得出，6种农药处理的毒力大小排序为81.7%噻唑膦原油＞90%阿维菌素原粉＞25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐＞硫线磷＞灭线磷＞90%丁硫克百威原油。

表2 6种药剂对根结线虫二龄幼虫毒力测定运算结果分析

3 结论与讨论

（1）通过对6种农药不同浓度处理对烟草根结线虫二龄幼虫的室内毒力测定，各个药剂对烟草根结线虫二龄幼虫均有抑制作用，与张胜博等[9]、王 军等[10]、黄 阔等[11]的研究相类似，并随着每种农药浓度增加、时间的延长，烟草根结线虫二龄幼虫校正死亡率均呈现上升趋势，与张映杰等[12]、王 军等[13]、孔凡玉等[14]的结果略有不同，但24 h、48 h的校正死亡率之间未达显著水平。6种农药对烟草根结线虫二龄幼虫抑制活力大小表现为81.7%噻唑膦原油＞90%阿维菌素原粉＞25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐＞硫线磷＞灭线磷＞90%丁硫克百威原油。

（2）6种药剂对烟草根结线虫二龄幼虫的毒力测定结果表明，部分药剂的毒力在浓度及时段上达显著或极显著差异，总体毒力无显著差异，其大小排序为81.7%噻唑膦原油＞90%阿维菌素原粉＞25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐＞硫线磷＞灭线磷＞90%丁硫克百威原油。

（3）根据6种农药对烟草根结线虫二龄幼虫的抑制效果及毒力测定结果，结合成本、效应、安全等因素[15-17]，推荐表现较好的81.7%噻唑膦原油、90%阿维菌素原粉、25%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐用于烟田继续试验。建议在筛选出的农药中，轮换使用或复合使用，使其达到经济、安全的目的。

（4）由于烟草根结线虫选取样品材料中未进行种类详细鉴别，可能存在一定误差，测定结果仅作为农药使用的参考[18-20]。