盐炙方格星虫与缩泉丸对水负荷大鼠缩尿效能的比较

胡佳敏，袁慧情，刘思溢，侯鉴基，梁少华，罗 辉,,3，吴斌华,,3*（.广东省天然药物研究与开发重点实验室；.广东湛江海洋医药研究院；3.南方海洋科学与工程广东省实验室（湛江），广东湛江 5403）

方格星虫（Sipunculus nudus），俗称沙虫，肉质鲜美，富含多种蛋白质、多种氨基酸和微量元素，药食两用[1]。我国药典记载了其药用价值，被称为“海洋冬虫夏草”，具有滋阴降火、清肺补虚以及补肾养颜等功能，可治疗骨蒸潮热、阴虚盗汗、肺虚咳喘等症状，对治疗肺痨咳嗽、神经衰弱、小儿脾虚与肾亏而夜尿频繁等均有效果，民间常用于治疗小儿夜间遗尿（验方）[2-3]。中药经盐灸制法炮制常具有提高功效的作用[4-5]。本研究将方格星虫进行盐炙，观察其是否能提高水负荷大鼠的缩尿功能，并将其与市售的缩泉丸进行比较，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

SPF 级雄性大鼠体质量为180～220 g（由广东省医学实验动物中心提供，动物合格证编号为No.44007200078821）；赛多利斯QUINTIX224-1CN分析天平；SL-100 高速多功能粉碎机（浙江省永康市松青五金厂）；UPH-Ⅱ-10T优普超纯水制造系统（成都超纯科技有限公司）；缩泉丸（吉林龙鑫药业有限公司，生产批号：191002022）；方格星虫干制品购于湛江东风市场；羧甲基纤维素钠购于廊坊森轩纤维素有限公司；5 号筛购于言锦丝网加工厂；代谢笼由广东医科大学药理教研室研制；LP-C30001 电子天平，通感0.1g（昆山优科维特电子科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物培养及筛选 SD 大鼠由广东医科大学海洋医药研究院动物房饲养。动物房温度保持在20～25 ℃，采用光照定时装置（12 h光照，12 h黑暗），鼠粮每天按照100 g/只，每天及时补充食用水。水负荷多尿模型：实验前12～18 h禁食不禁水，按体质量灌胃生理盐水22 mL/kg，收集2 h尿液，凡尿量超过灌注体积的40%者即为合格[6]。

1.2.2 药物的配制 操作依据相关文献[7]，将虫体干燥、粉碎，过5 号筛将粉末配成用0.5%羧甲基纤维素钠68 g/L 的混悬液，待用。因粉末比较难溶于水，因此用羧甲基纤维素钠辅助增溶。取干燥虫体进行盐炙，具体如下：称取50 mg 方格星虫干制品，置于500 mL 烧杯内；另称取食盐1.5 mg 溶于9 mL 超纯水中，倒入烧杯，使盐水充分渗入方格星虫干制品内部；然后将其置入炒药锅内，用文火加热翻炒至微黄色；晾凉打粉，过5 号筛，配成0.5%羧甲基纤维素钠68 g/L的混悬液，待用。同时取适量缩泉丸，粉碎，过5 号筛，将粉末配成0.5%羧甲基纤维素钠234 g/L 的混悬液，待用。

1.2.3 动物分组 与给药将32 只合格的SD 大鼠随机分为阴性对照组（NC 组）、方格星虫干制品组（SP组）、方格星虫干制品盐炙组（SP-salt 组）、缩泉丸组（阳性对照组，PC 组），每组8 只。各组按照大鼠体质量每200 g 灌胃1 mL 药物或者含0.5%羧甲基纤维素钠的超纯水：NC 组按体质量灌含0.5%羧甲基纤维素钠的超纯水；SP 组按体质量灌干制品液；SP-salt 组按体质量灌干制品盐炙液；PC 组按体质量灌缩泉丸液。给药方法：连续给药10 d（给药第9 天晚上禁食不禁水，过夜），于第2 天给药1 h 后用50 mL/kg 的水对各组大鼠灌胃造成水负荷。以代谢笼收集大鼠的尿液，并计算尿量体质量比和排泄率。

1.2.4 代谢指标 挤尽膀胱余尿，代谢笼法收集各组大鼠5 h 尿液，以尿量体质量比及排泄率为判断指标对各组药效进行评价。尿量体质量比（mL/kg）＝大鼠尿量（mL）/大鼠（kg）；排泄率（%）=大鼠每小时内排尿量（mL）/灌胃盐水量（kg）。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 尿量

SP-salt 组和PC 组大鼠0～1 h 时的尿量体质量比均低于NC 组，差异有统计学意义（P＜0.05）。其余各时间段各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。见图1。

图1 各组对水负荷大鼠尿量影响的比较

2.2 排泄率

SP-salt组和PC组大鼠0～1 h的排泄率均低于NC组（P＜0.05），其余各时间段各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见图2。

图2 各组对水负荷大鼠排泄率影响的比较

3 讨论

中医将改善尿频、夜尿、遗尿等症状的现象称为“缩尿”[8]，小儿遗尿之病总不离肾之虚[4]，而五脏六腑皆可相关，其机乃属三焦失司而膀胱不约[4,9]，其治当以补肾固本止遗为要，寒热虚实者，则随证而治，用缩泉丸可治肾阳虚之症[10]。缩泉丸治疗此症由来已久，然而它属于陆地药材，当前供应有限。本研究中采用的缩泉丸是复合方剂，益智仁为君药，温补脾肾，固精气，缩小便；乌药为臣药，调气散寒，除膀胱肾间冷气，止小便频数；佐之以山药，健脾补肾，固涩精气。三药合用，温肾祛寒，使下焦得温而寒去，则膀胱之气复常，约束有权，溺频遗尿可痊愈。方格星虫属湛江特色海产品，营养价值高，具有滋阴补阳、清肺降火、提高免疫力、缩尿止遗等功效。前期研究发现，未经研制的方格星虫缩尿功能并不强，因此我们尝试将方格星虫进行盐炙，以期增强其缩尿功能。在中医理论著作《本草蒙筌》中，陈嘉谟有“盐入肾脏仍仗软坚”的描述，说明中药通过盐炙，可以引药入肾经，更好地发挥其软坚散结的作用。根据中医药传统盐炙理论，经过盐炙是可以加强药物作用的，而当前对缩尿作用的研究，主要集中在对益智仁盐炙方面[11]。本研究参考上述文献的操作方法：将净药材或生片加入一定量的食盐水混合均匀后，经闷润使盐水渗入药材组织内部，置炒药锅内，用文火(微火)加热翻炒至显微黄火色，透香气时，取出，摊晾散热制得。研究中发现，动物多尿模型有单纯水负荷模型、D-半乳糖致衰老模型、肾阳虚多尿模型、自然衰老模型、水负荷＋利尿药模型等[12]。李梦琪等[13]通过水负荷多尿模型说明缩尿丸提取物对缩尿的作用；冯惠敏等[14]通过水负荷多尿模型对益智仁缩尿进行了研究。因此，参照上述方法，我们采用单纯水负荷多尿模型进行试验。本实验结果显示，SP-salt组和PC组大鼠0～1 h时的尿量体质量比和排泄率均低于NC 组（P＜0.05），其余各时间段各组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明盐炙后的方格星虫具有明显的缩尿功能。SP-salt组与PC 组比较虽差异无统计学意义，但盐灸方格星虫属药食同源性食品，营养价值丰富、味道鲜美，可为开发利用提供基础。