贵州地区105例血脂异常人群ApoE和SLCO1B1基因多态性及血脂特征分析*

骆姝琳， 任凌雁， 陈琨， 令狐克燕， 卓召振， 靳倩， 安宇， 黄盛文**

(1.贵州省人民医院 产前诊断中心， 贵州 贵阳 550002； 2.贵州省人民医院 中心实验室， 贵州 贵阳 550002)

血脂异常通常指血总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)的水平升高，广义上还包括低高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)血症在内的各种异常[1]。以低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)或TC升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病的重要危险因素[2]。随着行为生活方式的改变，血脂异常人群逐渐增多，动脉粥样硬化和随后进展的心肌梗死的风险也随之增加[3]。在动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD)一级和二级预防中，他汀类药物能够显著降低心血管事件的发生率[4]。药物基因组学研究表明，遗传基因多态性会造成不同个体对于药物疗效和不良反应的差异[5]，参与他汀类药物肝脏代谢的关键性转运蛋白阴离子转运多肽1B1 (organic anion transporting polypeptide 1B1 ，OATP1B1)和载脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)的基因多态性可影响他汀类药物的血浆及肝脏浓度，从而影响他汀类药物的疗效和安全性[6-7]。OATP1B1由溶质载体有机阴离子转运体1B1(solute carrier organic anion transporter 1B1，SLCO1B1)基因编码，SLCO1B1基因存在多态性，可形成9种基因型和3种基因表型[8]。突变的SLCO1B1基因引起编码的OATP1B1转运活力减弱，表现为肝脏摄取他汀能力降低，引起他汀类药物血药浓度上升，从而增加患者横纹肌溶解症或肌病的发生风险[9]。ApoE基因多态性被认为是高脂蛋白血症及动脉粥样硬化性血管病的易感候选基因，其可形成6种基因型和3种基因表型[10]。有研究显示，ApoE4携带者患冠心病的风险要高40%，并且他汀类药物对ApoE4携带者疗效往往不佳或无疗效，而对ApoE2携带者的降脂作用最强[11]。目前研究较多的与他汀药物不良反应及疗效相关的基因位点主要是SLCO1B1基因上的c.521T>C(Val174Ala)、c.388A>G(Asn130Asp)位点和ApoE基因c.388T>C(Cys130Arg)、c.526C>T(Arg176Cys)位点[9]，本研究通过检测105例贵州地区37～84岁血脂异常人群上述相关位点，分析其在该类人群中多态性分布情况，为临床他汀类药物的合理应用提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1样本人群来源 选取2017年6月—2020年9月就诊的血脂异常患者为研究对象，血脂异常诊断参考《中国成人血脂异常防治指南(2016年修订版)》[1]中相关规定，共纳入血脂异常患者105例，男性69例、女性36例，年龄37～84岁、平均(63±9.81)岁。本研究所有参加者均为来自贵州地区，研究前均签署知情同意书。

1.1.2普通人群数据来源 来源于“The 1 000 Genomes Project”中千人基因组南方人群数据，网址https://www.internationalgenome.org/。

1.2 研究方法

1.2.1血脂指标检测 所有血脂异常患者空腹12 h，清晨抽取静脉血，1 500 r/min离心5 min，取上清；采用全自动生化分析仪[雅培贸易(上海)有限公司]检测测血清中的TG、TC、HDL-C、LDL-C、载脂蛋白A1 (apolipoprotein- A1，Apo-A1) 和Apo-B水平，规定血脂异常分为高TG(≥1.70 mmol/L)、高TC(≥5.17 mmol/L)、高LDL-C(≥3.37 mmol/L)、低HDL-C(<1.04 mmol/L)及混合型高脂血症(TG≥2.26 mmol/L和TC≥6.22 mmol/L)[12]。

1.2.2ApoE和SLCO1B1基因位点检测 采用连接酶介导的荧光探针技术(ligase Mediate Fluorescence Probe，LMFP) 对ApoE基因c.388T>C(Cys130Arg)、c.526C>T(Arg176Cys)和SLCO1B1基因c.521T>C(Val174Ala)、c.388A>G(Asn130Asp)进行基因分型。所有血脂异常患者抽取静脉血2 mL，乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)抗凝，在Fascan 48E多通道荧光定量分析仪(西安天隆科技有限公司)上进行检测；取全血样本10 μL加测序反应通用试剂盒[西安天隆科技有限公司(SNP-U4)]样本稀释液290 μL处理，根据研究需要预留8联管数n，相邻4孔为一完整检测(A4、B4、C4、D4)，将处理好的全血样本2 μL加到A4、B4、C4、D4预留孔位中，试剂盒阳性质控品、阴性质控品无需稀释处理，直接加2 μL到对应的A4、B4、C4及D4孔位中，盖紧8联管，37 ℃温浴3 min，6 000 r/min离心40 s，试剂管再次涡旋3 s混匀，6 000 r/min离心5 s，上机检测。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 血脂异常

女性血脂异常人群血清中TC、HDL-C及Apo-A1水平均高于男性，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；女性血脂异常类型中高TG、高TC及低HDL-C占比低于男性，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。

表1 贵州地区105例血脂异常人群各项血脂指标Tab.1 The blood lipid concentration in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou

2.2 ApoE基因多态性分布

针对血脂异常患者的ApoE基因上388T>C位点和526C>T位点多态性进行检测，这2个位点的不同基因型可组成E2(E2/E2，E2/E3)、E3(E2/E4，E3/E3)及E4(E3/E4，E4/E4)3个基因表型组，性别比较结果表明，526C>T位点基因型频率及等位基因频率在血脂异常患者男女间比较、差异有统计学意义(P<0.05)，ApoE基因3个基因表型组E2、E3、E4在不同性别间比较、差异有统计学意义(P<0.05)，其中女性E2型占比高于男性、E4型占比低于男性。见表2。

表2 贵州地区105例血脂异常人群ApoE基因位点的多态性分布[n(%)]Tab.2 The polymorphism distribution of ApoE in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou[n(%)]

2.3 SLCO1B1基因多态性分布

针对血脂异常患者SLCO1B1基因388A>G、521T>C进行检测，这2个位点的不同基因型可组成Ⅰ类(*1a/*1a，*1a/*1b，*1b/*1b)、Ⅱ类(*1a/*5，*1b/*15，*1a/*15 或 *1b/*5)、Ⅲ类(*5/*5，*5/*15，*15/*15)3个基因表型组，结果显示，388A>G位点基因型频率及等位基因频率在血脂异常患者男女间差异有统计学意义(P<0.05)，SLCO1B1各基因表型组Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类在血脂异常患者男女间差异无统计学意义(P>0.05)，其中未检出*5相关基因频率。见表3。

2.4 与普通人群的比较

血脂异常患者ApoE、SLCO1B1基因频率与千人基因组南方人群数据作比较，结果表明，526C>T位点基因型频率在血脂异常人群和普通人群比较，差异有统计学意义(P<0.05)；其他基因多态性位点分布频率与普通人群比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

2.5 ApoE及SLCO1B1基因不同表型血脂异常人群的血脂水平

血脂异常人群中不同ApoE、SLCO1B1基因型的血脂水平比较结果显示，ApoE基因E4型人群LDL-C、Apo-B浓度均高于E2型，但差异无统计学意义；E2型人群TG、TC、HDL-C、Apo-A1浓度均高于E4型，其中TG指标差异有统计学意义(P<0.05)；SLCO1B1基因Ⅰ类人群的TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A1和Apo-B的浓度和Ⅱ类比较，差异均无统计学意义。Ⅲ类人群仅有1位男性患者数据，未做统计分析。见表5。

表3 贵州地区105例血脂异常人群SLCO1B1基因位点的多态性分布[n(%)]Tab.3 The polymorphism distribution of SLCO1B1 in 105 cases with dyslipidemia from Guizhou[n(%)]

表4 贵州地区105例血脂异常人群和普通人群的基因频率[n(%)]Tab.4 Gene frequency of 105 cases with dyslipidemia from Guizhou and general population[n(%)]

表5 贵州地区105例血脂异常人群中ApoE及SLCO1B1基因不同表型者的血脂水平Tab.5 Blood lipid levels of ApoE and SLCO1B1 genes in 105 cases with different phenotypes of

3 讨论

心血管事件的发生是多种危险因素导致，其中血脂异常是重要的一项危险因素[13]。近年来，由高脂血症引起的动脉粥样硬化、心血管病的发病人数持续增加，已严重威胁着患者的生命健康和生活质量。监测血脂异常患者的血脂水平变化是有效实施ASCVD防止措施的重要基础，其中LDL-C或TC水平对个体或群体ASCVD发病危险具有独立的预测作用[14]。国内相关血脂异常防治指南也提倡以降低血清LDL-C水平来防控ASCVD危险[15]。本研究中贵州地区105例不同血脂异常类型人群分别占比例依次为低HDL-C、高TG、高TC及高LDL-C，其中高LDL-C水平患者可作为后续血脂异常重点干预人群进行监测。有研究表明雌激素具有血脂调节作用，可降低LDL-C水平，增加HDL-C水平，女性绝经后雌激素水平下降，LDL-C水平升高风险增加；中老年女性的饱和脂肪酸摄入量与TC水平增加正相关；Apo-A1主要存在于HDL中，与HDL-C水平正相关[16]。本研究中女性患者TC、HDL-C、Apo-A1浓度比男性患者高，差异有统计学意义(P<0.05)，该结果与上述报道基本相符，推测该结果和雌激素对于血脂代谢的影响有关系，即是构成同一地区男女血脂异常类型有差异的原因之一。

有效的降低血脂,尤其是降低血浆TC和LDL-C己成为防治心血管疾病的重要手段之一[17]。血脂异常患者临床治疗常用药物为他汀类药物，然而他汀药物疗效与个体遗传背景密切相关[18]。目前研究结论表明，ApoE基因与SLCO1B1基因与他汀药物的疗效及不良反应风险有关[7，19]。

ApoE基因定位于19号染色体长臂13 区2带(13q13.2)，基因全长3,611bp，共有6个外显子，mRNA长1180 nt，编码由317个氨基酸残基组成的蛋白质[20]。其编码的载脂蛋白与血脂代谢有直接关系，ApoE基因E4型血脂代谢能力低于E2、E3型人群[21]，且他汀药物疗效下降[22]，同时该基因型还与冠心病[23]、阿尔茨海默病的发病风险相关[24]。本研究中贵州地区105例血脂异常人群ApoE基因分型中E3型频率最高，E2型频率最低，这与文献报道大体相符[19，25]。有研究表明E3型人群罹患脑梗死、冠心病、老年痴呆风险正常，E2型人群发病风险低，E4型人群发病风险高[26]。本研究中E2型在男性中占比低于女性,而 E4型在男性中占比高于女性，差异有统计学意义(P<0.05)，推测贵州地区105例血脂异常人群中男性罹患这些疾病的风险要显著高于女性，同时他汀药物使用效果相比女性患者较差，需定期随访。本研究中贵州地区105例血脂异常人群的ApoE基因526C>T位点的基因型突变频率与甘肃、重庆地区血脂异常人群的频率分布基本一致[13,25]。但与普通人群相比差异有统计学意义(P<0.05)，尤其是TT突变纯合型比例高于普通人群，表明该位点突变或与血脂水平升高有关。

SLCO1B1基因定位于12 号染色体短臂12 区(12p12)，基因全长约109 kb，有14 个编码外显子和一个非编码外显子[26]。SLCO1B1基因3种型别与他汀的肌病风险密切相关，Ⅱ类风险增高，Ⅲ类风险最高[27]，与机体脂代谢相关性较小[28]。本次研究中SLCO1B1三种基因型，在不同性别间差异无统计学意义(P>0.05)，推测他汀药物应用后的肌病发生风险可能与性别无关。本文中贵州地区105例血脂异常人群中SLCO1B1Ⅰ类基因型频率最高，Ⅱ类基因型频率居中，Ⅲ类基因型频率最低，该结果与甘肃、重庆地区血脂异常人群频率分布基本一致[13,25]。同时，由于Ⅰ类基因型人群存在较低横纹肌溶解症或肌病风险，Ⅲ类基因型存在高度风险[27]，推测此次研究的贵州地区血脂异常人群服用他汀类药物后出现横纹肌溶解症的风险较小。

此外，ApoE基因E2与E4型的TG浓度差异有统计学意义(P<0.05)，与刘国栋等[29]研究结果相近，E2型TG浓度高于E4型，推测在血脂异常人群中ApoE不同基因型与TG浓度可能具有一定相关性，大量研究均表明ApoE基因型与血脂水平存在差异[30-32]，因此临床可根据基因型差异来评估指导临床的治疗方案。而SLCO1B1基因不同表型组的 TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A1及Apo-B的浓度差异无统计学意义(P>0.05)， 推测SLCO1B1基因与个体血脂水平无直接联系。本研究初步探讨了贵州地区105例血脂异常人群的ApoE基因、SLCO1B1基因多态性分布，同时针对该人群血脂水平特征进行基本分析，对于该地区人群他汀药物使用提供了有益参考。但由于本研究入组人群较少，且患者均为血脂异常人群，相关基因突变情况及其血脂异常人群的血脂指标特征具有一定局限，后期研究需增加样本量，旨在为血脂异常患者用药情况作出合理评价并提供个性化用药指南。