脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1 表达与急性肺损伤的相关性研究

徐盼盼 郑 诚 张楚明 王昌明 张细江

脓毒症是严重感染、创伤、休克、大手术后常见并发症及死亡原因之一，是人体对感染反应失调导致的多器官功能障碍，其中肺是最易发生感染的器官[1-3]。急性肺损伤是脓毒症主要并发症之一，救治困难，病死率高[4-5]。目前，临床缺乏早期诊断脓毒症急性肺损伤的有效指标，常用的微生物学检测耗时较长且阳性率低。烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）是哺乳动物细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸补救合成途径的限速酶，是一种多功能分子，具有促炎作用[6-7]。研究发现，NAMPT 表达水平与呼吸机相关性肺炎患者预后关系密切[8]。沉默信息调节因子1（SIRT1）是第3 类组蛋白去乙酰化酶Sirtuin 家族成员之一，主要通过翻译后修饰调节肺部免疫炎症系统及老化进程，从而参与各种肺部疾病的发生发展。白华等[9]研究发现，血清SIRT1 表达水平与慢性阻塞性肺疾病急性加重期病情严重程度及患者的死亡风险有关。目前有关血清NAMPT、SIRT1 在脓毒症急性肺损伤患者中的研究鲜有报道，因此本研究探讨脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1 表达水平，并分析二者与急性肺损伤关系，为临床探寻简单易测、可靠的生物学指标以评估脓毒症急性肺损伤病情，提高诊断准确性提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017 年3 月至2021 年2 月浙江省台州市立医院收治的脓毒症患者238 例为研究对象，男127 例，女111 例，年龄40～84（62.83±10.58）岁。根据患者是否并发急性肺损伤，将患者分为无急性肺损伤组120 例（脓毒症未并发急性肺损伤患者）和急性肺损伤组118 例（脓毒症并发急性肺损伤患者）。本研究获得医院伦理委员会批准后实施，批准编号：LS2017-07 号。所有患者或其家属均签署知情同意书。

1.2纳入及排除标准 纳入标准：（1）所有患者均符合脓毒症诊断标准[10]；（2）急性肺损伤患者符合《急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征诊断和治疗指南（2006）》中的相关诊断标准[11]，（3）临床资料完整者。排除标准：（1）严重肝肾功能不全或衰竭者；（2）近期使用免疫抑制剂治疗的患者；（3）不愿意参加或不配合的患者。

1.3主要试剂与仪器 NAMPT、SIRT1 酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司，批号SEA480H、SEA509H）；肺功能测定仪（上海涵飞医疗器械有限公司，型号：S-980A Ⅲ）；全自动血气分析仪（美国Nova Biomedical 公司，型号：GEM4008）。

1.4方 法

1.4.1临床资料收集 收集患者临床资料，包括性别、年龄、感染部位、气管插管机械通气、氧疗、白细胞计数（WBC）、C 反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）。

1.4.2肺损伤评分 参照Murray 肺损伤评分标准[12]：0 分，即无肺损伤；＞0～2.5 分，即轻、中度肺损伤，＞2.5分，即重度肺损伤。

1.4.3急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHEⅡ）评分 患者入院24h 内进行APACHEⅡ评分[13]以评价病情严重程度，包含：年龄、急性生理学、慢性健康状况评分三个部分，取总分，最高71分，得分越高对应病情越严重。

1.4.4肺功能及血气指标检测 患者入院24h 内采用肺功能测定仪检测患者肺功能指标：第1 秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）、第1 秒用力呼气容积占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）、计算呼吸指数（RI）、氧合指数（OI）。采用血气分析仪进行持续性动脉血氧分压（PaO2）、动脉血二氧化碳分压（PaCO2）检测，直到血气分析仪器数据显示稳定后，收集PaCO2、PaO2。

1.4.5血清NAMPT、SIRT1 水平检测 收集患者在入院后24h 内清晨空腹静脉血5mL，静置30min，室温条件下以4000r/min 离心10min，取上清液，采用ELISA 法测定患者血清NAMPT、SIRT1 水平，所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

1.5统计学方法 应用SPSS 25.0 统计软件对数据进行分析，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，两组间比较采用独立样本t 检验；计数资料用例数表示，采用χ2检验；采用Pearson 法分析血清NAMPT、SIRT1 水平与APACHEⅡ评分、RI、OI、PaCO2、PaO2的相关性；采用二元logistic 回归分析脓毒症患者发生急性肺损伤的影响因素；利用受试者工作特征（ROC）曲线评估血清NAMPT、SIRT1 对脓毒症患者发生急性肺损伤的诊断效能，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1临床资料比较 无急性肺损伤组和急性肺损伤组患者性别、年龄、感染部位、气管插管机械通气、氧疗、PCT、WBC、CRP、FEV1%、FEV1/FVC 比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与无急性肺损伤组比较，急性肺损伤组患者APACHEⅡ评分、PaCO2、RI 水平较高（P＜0.05），PaO2、OI 水平较低（P＜0.05）。见表1。

表1 两组脓毒症患者临床资料比较

2.2血清NAMPT、SIRT1 水平比较 与无急性肺损伤组比较，急性肺损伤组患者血清NAMPT 水平显著升高（P＜0.05），SIRT1 水平显著降低（P＜0.05）。见表2。2.3 血清NAMPT、SIRT1 水平与APACHEⅡ评分、RI、OI、PaCO2、PaO2的相关性分析 Pearson 法分析显示，脓毒症患者血清NAMPT 水平与APACHEⅡ评分、RI、PaCO2水平均呈正相关（P＜0.05），与OI、PaO2呈负相关（P＜0.05）；血清SIRT1 水平与APACHEⅡ评分、RI、PaCO2水平均呈负相关（P＜0.05），与OI、PaO2呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表2 两组脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1 水平比较（ng/mL，）

表2 两组脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1 水平比较（ng/mL，）

注：NAMPT 为烟酰胺磷酸核糖转移酶；SIRT1 为沉默信息调节因子1

表3 脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1 水平与APACHEⅡ评分、RI、OI、PaCO2、PaO2 的相关性

2.4二元logistic 回归分析脓毒症患者发生急性肺损伤的影响因素 以脓毒症患者是否发生急性肺损伤为因变量，以APACHEⅡ评分、PaO2、PaCO2、OI、RI、NAMPT、SIRT1 为自变量，进行二元logistic 回归分析。结果显示，血清NAMPT、SIRT1、APACHEⅡ评分是脓毒症患者发生急性肺损伤的独立危险因素（P＜0.05）。见表4。

表4 脓毒症患者发生急性肺损伤的影响因素分析

2.5血清NAMPT、SIRT1 对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断价值分析 血清NAMPT 对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的曲线下面积（AUC）为0.771（95%CI：0.710～0.831），截断值为32.77ng/mL，灵敏度、特异度分别为77.20%、64.90%；血清SIRT1 对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的AUC 为0.835（95%CI：0.779～0.890），截断值为6.82ng/mL，灵敏度、特异度分别为78.50%、68.30%；二者联合检测对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的AUC 为0.908（95%CI：0.869～0.947），灵敏度、特异度分别为89.80%、62.70%。见图1。

图1 血清NAMPT、SIRT1 诊断脓毒症患者发生急性肺损伤的ROC 曲线

3 讨论

脓毒症作为一种全身炎症反应综合征，由感染引起，是ICU 常见危重症，极易引发多功能器官衰竭，其中急性肺损伤是其常见并发症之一，若不及早诊断、及时治疗，其病死率可高达80%左右[14]。因此，早期诊断脓毒症急性肺损伤并及时采取相应措施进行干预，对降低其死亡风险、改善预后有较大意义。

NAMPT 是一种多功能蛋白质，又称为前B 细胞克隆增强因子或内脏脂肪素，是哺乳动物尼克酰胺腺嘌呤合成通路的限速酶，在机体多种组织及器官（如肝脏、骨髓、肺等）均广泛表达，且可作为炎症因子参与急、慢性炎症性疾病的发生与发展[15-17]。Chen等[18]研究发现，NAMPT 高表达与新生儿败血症发生有关，微小RNA-96-5p 可通过靶向NAMPT 和抑制新生儿败血症中的核因子-κB（NF-κB）通路减轻炎症反应。本研究结果显示，与无急性肺损伤组比较，急性肺损伤组患者血清NAMPT 水平显著升高，提示血清NAMPT 水平异常高表达与脓毒症急性肺损伤发生发展有关。

SIRT1 编码基因位于染色体10q22.1，包含9 个外显子、8 个内含子，具有烟碱腺嘌呤二核苷酸依赖性的蛋白脱乙酰化酶活性，广泛表达于成熟组织（如早期胚胎），通过对相关因子去乙酰化增加细胞能量供应、减少细胞凋亡、减轻炎症反应、抵抗氧化应激、改善血管内皮细胞功能等[19-20]。Fu 等人[21]研究发现，SIRT1 可通过降低内皮紧密连接通透性改善脂多糖诱导的小鼠肺损伤。本研究结果显示，与无急性肺损伤组比较，急性肺损伤组患者血清SIRT1 水平显著降低，提示血清SIRT1 水平异常低表达与脓毒症急性肺损伤发生发展有关。

APACHEⅡ评分是根据患者年龄、既往健康状况对生命体征进行的评分，操作简单，能够反映疾病严重程度[22]。本研究Pearson 分析显示，血清NAMPT水平与APACHEⅡ评分、RI、PaCO2水平均呈正相关，与OI、PaO2呈负相关。而血清SIRT1 水平与APACHEⅡ评分、RI、PaCO2水平均呈负相关，与OI、PaO2呈正相关。提示血清NAMPT、SIRT1 异常表达与脓毒症急性肺损伤患者病情严重程度、呼吸功能下降有关。进一步研究发现，血清NAMPT、SIRT1、APACHEⅡ评分是脓毒症患者发生急性肺损伤的独立危险因素。再次提示血清NAMPT、SIRT1 异常表达与脓毒症急性肺损伤发生发展及病情严重程度关系密切。目前临床寻求简单易测、可靠的生物学指标以早期诊断脓毒症急性肺损伤，并采取积极措施进行干预对改善患者预后有较大意义。本研究ROC 曲线分析结果显示，血清NAMPT、SIRT1 对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的AUC 分别为0.771、0.835，灵敏度分别为77.20%、78.50%，特异度分别为64.90%、68.30%。二者联合检测对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的AUC 为0.908，灵敏度、特异度分别为89.80%、62.70%。提示二者联合诊断对脓毒症急性肺损伤具有较高诊断价值。

综上所述，脓毒症急性肺损伤患者血清NAMPT异常高表达、SIRT1 异常低表达，且是脓毒症患者发生急性肺损伤的独立危险因素，二者联合检测对脓毒症患者发生急性肺损伤有较高诊断价值，可为脓毒症患者临床评估急性肺损伤提供一定参考。但本研究纳入样本量较少，后期应加大样本量对血清NAMPT、SIRT1 在脓毒症急性肺损伤相关机制进行深入研究。