分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达及意义

苏雅静 罗安平 叶琳 李炜 王立娟

分泌性中耳炎为非化脓炎症类疾病，其主要特征包括中耳腔积液、耳闷及听力下降，多数患者早期未给予足够重视，导致病情易反复、迁延不愈，增加耳聋风险，给患者生活造成极大困扰，严重影响患者身心健康。目前该病病因尚不完全清楚。分泌性中耳炎在病情发展过程中涉及炎症因子及免疫调节因子水平变化[1，2]。高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)为一种重要的炎症介质，可促进血小板活化及神经轴突生长，调节机体固有免疫功能，在机体受到刺激时，炎症细胞的坏死细胞将HMGB1从核内分泌到胞外，发挥促炎因子的作用。HMGB1在急性肺损伤、急性胰腺炎、盆腔炎等多种炎性疾病中发挥重要作用[3，4]。白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）是由巨噬细胞、T细胞、成纤维细胞等产生的炎症因子，具有强烈的致炎活性，在免疫、炎症中发挥重要作用[5]。IL-6在急性分泌性中耳炎患者耳积液中表达水平升高，且显著高于外周血IL-6水平[6]。分泌性中耳炎是一种炎性反应疾病，本研究推测HMGB1与IL-6可能与分泌性中耳炎炎症的发生发展有关，因此通过检测分泌性中耳炎患者HMGB1与IL-6表达情况，探讨二者与分泌性中耳炎的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2019年6月～2020年12月本院治疗的分泌性中耳炎患者83例，其中男41例，女42例，年龄20～70岁，平均年龄56.70±6.50岁。依据患者病情分期[7]分为急性组(急性中耳炎，病程＜3周)28例、亚急性组(亚急性中耳炎，病程3周～3个月)30例和慢性组(慢性中耳炎，病程3～6个月)25例；根据耳积液性质分为浆液性组50例，黏液性组33例。纳入标准：（1）符合分泌性中耳炎诊断标准[8]；（2）单耳发病者且穿刺检测抽出耳积液；（3）患者知情同意并签署知情同意书。排除标准：（1）合并免疫性疾病或者急慢性感染者；（2）合并严重心、肝、肾疾病或其他疾病者；（3）鼓膜穿刺不能抽出积液者。

另选取同期健康体检人员（无任何耳鼻喉疾病史）85例作为对照组（只采取外周血），其中男45例，女40例，年龄21～72岁，平均年龄55.90±5.60岁。各组性别、年龄一般资料无显著差异（P＞0.05）。本研究样本采集均经过本院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。

1.2 试剂与仪器

人高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)酶联免疫吸附测定试剂盒、人白细胞介素6（IL-6）试剂盒购自美国Elabscience公司，Bio-rad酶标仪购自美国伯乐公司。

1.3 研究方法

1.3.1 样品采集及保存 治疗前收集中耳炎患者耳积液，在耳内镜监视系统下，鼓膜表面麻醉，无菌条件下经鼓膜穿刺抽取0.5 ml中耳积液，穿刺过程中避免污染耳积液，置于-80 ℃保存备用。抽取患者晨起空腹外周静脉血，健康体检人员于体检当天清晨空腹抽取外周静脉血4 ml，室温下静置30 min后，3000 r/min离心10 min，留取血清，置于-80℃保存备用。

1.3.2 HMGB1、IL-6检测 采用ELISA方法检测血清及耳积液HMGB1、IL-6水平，按照相应检测试剂盒说明书进行检测。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 观察组与对照组血清及耳积液中HMGB1、IL-6水平比较

对照组与观察组血清HMGB1、IL-6水平无显著差异（P＞0.05）；与观察组血清比较，分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6水平显著升高（P<0.05），见表1。

表1 观察组与对照组血清及耳积液中HMGB1、IL-6 水平比较

2.2 观察组各亚组患者耳积液中HMGB1、IL-6水平比较

3组间HMGB1、IL-6水平比较均有显著差异（P<0.05），与急性组相比，亚急性组、慢性组中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平显著升高（P<0.05），与亚急性组比较，慢性组中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平均显著升高（P<0.05），见表2。

表2 观察组各亚组患者耳积液中HMGB1、IL-6 水平比较

2.3 不同性质耳积液中 HMGB1、IL-6表达水平比较

与浆液性组比较，黏液性组患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平显著升高（P<0.05），见表3。

表3 不同性质耳积液中HMGB1、IL-6 表达水平比较

2.4 分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平与病程相关性分析

相关性分析显示，分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平与患者病程呈正相关（r=0.667，r=0.546，P＜0.05），见图1。

图1 HMGB1、IL-6表达水平与病程相关性

3 讨论

分泌性中耳炎是耳鼻喉科临床的常见病，以听力减退、耳鸣、耳痛，伴耳堵塞、闷胀感及鼓室积液等主要特征，该病患者分布于各个年龄段，若治疗不及时，会产生中耳黏连、鼓膜萎缩等严重并发症，最终造成听力受损，因此对于分泌性中耳炎患者病情及早判断、治疗和预后具有重要临床意义[9，10]。

分泌性中耳炎是一种炎症性疾病，其病情严重程度与炎症因子水平变化有关，本研究发现分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6水平显著升高，本研究国内外对于中耳炎中HMGB1、IL-6的表达及释放及其在该病中起的作用研究较少，因此，本研究把这两个炎症因子作为评价指标。

HMGB1在真核细胞内广泛存在，胞外的HMGBl作为一种重要的炎症介质和致炎细胞因子，与关节炎、急性肺炎、脓毒症、肝炎、自身免疫性疾病等的发病机理关系密切，在耳部疾病中主要表达在不同发育阶段的耳蜗中，表达分布于血管纹、螺旋韧带、螺旋缘、Corti器、螺旋神经元等处，在耳蜗的形态发育过程中发挥重要作用[11]。HMGB1可以介导炎症和免疫反应，与多种疾病的发生发展有关[12]，Bellussi等[13]分析了慢性化脓性中耳炎患者黏膜中HMGB1表达情况，结果显示，HMGB1阳性与炎性浸润的密度一致，HMGB1在慢性中耳炎中过度表达，并且可能在从复发性急性中耳炎到慢性化脓性中耳炎的炎症过程中发挥作用。巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的新生小鼠耳蜗组织中，HMGB-1 mRNA 表达水平显著升高，HMGB-1炎性通路可能在CMV先天性感染所致听力减退的发病机制中发挥作用[14]。本研究结果显示，分泌性中耳炎患者耳积液中HMGB1水平高于对照组血清水平，且急性组、亚急性组、慢性组患者的HMGB1水平均依次升高，提示患者体内存在明显炎症反应，HMGB1可能参与中耳炎的发展进程，可成为评价中耳炎疾病进展情况的一项指标。

IL-6是由单核巨噬细胞等多种细胞活化产生的炎症因子，具有调节免疫应答、急性期反应，在发生内外伤、外科手术、应激反应、感染、脑死亡、肿瘤产生以及其它情况的急性炎症反应过程中IL-6会快速生成，其过度激活时可加重炎性反应程度，对组织造成损害[15]。IL-6在成人分泌性中耳炎患者中表达水平升高，且耳积液中IL-6水平显著高于血浆水平[16]。急性分泌性中耳炎患者外周血IL-6水平显著升高，且治疗无效组患者外周血IL-6水平显著高于治疗有效组，表明可根据IL-6水平变化早期预测患者预后[17]。IL-6水平高的患者，机体可能存在过度免疫应答，咽鼓管功能损伤严重，影响预后。本研究结果显示，与对照组血清水平比较，分泌性中耳炎患者耳积液中IL-6水平显著升高，与先前报道一致，且急性组、亚急性组、慢性患者的HMGB1水平均依次升高，提示IL-6水平变化与中耳炎患者的炎症严重程度有关，可能参与中耳炎的发生发展。

本研究显示，分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6水平显著高于其血清水平，提示HMGB1、IL-6主要由病变部位局部分泌，其水平升高可能与机体免疫反应有关。不同积液性质患者 HMGB1、IL-6水平亦存在明显差异。本研究显示，黏液性组患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平显著升高，黏液性中耳积液患者更为严重，是导致中耳积液黏滞度增加的主要因素，患者炎症程度越重，表明咽鼓管纤毛上皮以及鼓室黏膜受到耳积液影响时间越长，病情越严重[18]。本研究显示分泌性中耳炎患者耳积液HMGB1、IL-6表达水平与患者病程呈正相关，进一步表明HMGB1、IL-6与患者病情严重程度相关。临床上可作为提示中耳炎发病程度的预测因子。

综上所述，HMGB1、IL-6在分泌性中耳炎患者耳积液中明显高表达，与分泌性中耳炎的发生发展密切相关，考虑到HMGBl刺激内皮细胞可诱导内皮细胞释放TNF-a、IL- 8和MCP-1，可以预测这些细胞因子产生了局部微环境的炎症反应，将这几类炎症因子在中耳炎积液中的表达程度纳入笔者后继研究中。