气相色谱法测定胃蛋白酶中丙酮的残留量

张德伟 朱泽兵 郭娅 肖琦 袁林 唐小平

摘要：本文采用气相色谱法测定胃蛋白酶中丙酮的残留量。结果表明，样品中丙酮的分离度高，浓度在100～1000 μg/mL范围内，线性关系良好（r=0.9992），方法回收率为96.5%，相对标准偏差为1.4%，与定量分析要求相适应。采用气相色谱法测定胃蛋白酶中丙酮的含量，样品的处理简便、快捷，检测结果灵敏、准确、重现性好，为现有质量标准的提升提供科学依据。

关键词： 胃蛋白酶;丙酮;气相色谱法

【中图分类号】Q946.81+4 【文献标识码】A 【文章编号】1673-9026（2022）05--01

胃蛋白酶（Pepsin）具有助消化的生理功能，在工业上还广泛应用于方便食品、奶制品、助消化药和口香糖加工制造[1]。目前，国内外对胃蛋白酶的研究主要集中在临床疗效、药理领域，对质量状况的研究较少，现报道有采用单扫描极谱法测定胃蛋白酶中丙酮残留的报道[2]， 但该法所采用的检测设备普及率低，专属性不强。因此，本实验采用气相色谱法测定胃蛋白酶中丙酮的残留量，为该产品的质量安全提供技术支持。

1 材料与方法

1.1材料与试剂

胃蛋白酶样品，购于西南地区生产胃蛋白酶的主流厂家A、B、C、D，各2个批次。N-甲基吡咯烷酮 （分析纯，Honeywell公司生产）;丙酮（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）。

1.2 仪器与设备

CP224S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）;GC-2010Plus气相色谱仪（日本岛津科技有限公司）;HP-5毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，安捷伦科技有限公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 标准储备液的配制

精密称取丙酮对照试剂0.50g，置50 mL容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，摇匀，制成浓度分别为10 mg/mL的混合溶液，作为标准储备液。

1.3.2 标准工作液的配制

分别精密量上述储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置10 mL的容量瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮稀释至刻度，配成浓度分别为100、200、400、600、800、1000 μg/mL系列标准工作溶液。

1.3.3 样品的处理

精密称取胃蛋白酶0.5 g，置20 mL顶空进样瓶中，加50% N-甲基吡咯烷酮5 mL，密封，涡旋使溶解，作为供试品溶液。

2 结果与分析

2.1 色谱条件

顶空进样瓶汽化室温度80 ℃，汽化时间20 min;进样口温度200 ℃;分流-不分流进样（SSL）：进样量1 mL，分流比25：1;色谱柱采用程序升温模式：初始温度40 ℃，保留时间7 min，以10℃/min速率升温至80 ℃，再以25 ℃/min速率升温至200 ℃，保持5 min;FID检测器，温度250 ℃[3-5]。

2.2 线性关系

分别精密量取“1.3.2”项下的系列标准工作溶液各5 mL，置20 mL顶空进样瓶中，按拟定的色谱条件进行测定。以质量浓度（X）为横坐标，测得的峰面积（Y）为纵坐标，绘制线性回归方程为Y=2866Х-8289， 相关系数r=0.9992，结果见图1。

2.3 回收率与精密度实验

通过对3个平行样进行加标回收试验，结果见表2。丙酮回收率在96.5%，相对标准偏差RSD是1.4%，该方法的回收率和精密度良好。

2.4 方法检出限

按S/N=3， 取对照试剂溶液逐级进行稀释， 按拟定气相色谱条件进行测定， 测得丙酮在该方法中的检出限为0.1μg/mL。

2.5 样品中丙酮的测定

取A、 B、 C、 D四个生产厂家的胃蛋白酶样品进行测定，结果见表3。实验结果表明， 不同厂家生产的胃蛋白酶原料中丙酮残留量水平存在较大差异。

3 结论

胃蛋白酶生产过程中主要使用丙酮进行沉淀结晶[6-8]，分离干燥后易形成微小的泡状微粒，锁住了残留的有机溶剂，很难完全散发出来。本研究以50%N-甲基吡咯烷酮为溶剂，将样品置于顶空瓶中加热溶解，让有机相全部释放出来，形成饱和的蒸汽，保证各组分不流失，顶空进样对气相色谱仪污染较小，测定更加科学、准确，检测灵敏度高，实验操作简单、快速度，可作为胃蛋白酶中丙酮留量测定方法进行推广。

参考文献：

[1] 喻东. 生物碱对胃蛋白酶的酶学性质及光谱性质的影响[D]. 成都： 四川大学， 2005.

[2] 田玉琼，汤晓勤，向仕学.胃蛋白酶中丙酮残留量的单扫描极谱法测定[J].预防医学情报杂志，2006（06）：756-757.

[3] 林瑛，杨学灵，杨雪珠.气相色谱法测定胰酶中的丙酮溶剂残留量[J].广州化学，2013，38（02）：34-36.

[4] 周绪云，马晓茜.气相色谱法测定洛索洛芬钠中7种残留溶剂的含量[J].中南药学，2021，19（07）：1450-1453.

[5]  田洁，丁红雨，赵丽元，郝爱鱼，王戈.顶空毛细管气相色谱法测定阿托伐他汀钙原料药中残留溶剂[J].中国药物评价，2015，32（03）：135-138.

[6] 王莹. 猪胃蛋白酶分离纯化新工艺建立及技术参数研究[D].黑龙江八一农垦大学，2009.

[7] 辛秀兰.生物分离与纯化技术 [ M] ， 科学出版社， 2005， 8： 64-65.

[8] 王莹， 张丽萍.胃蛋白酶分离纯化技术研究进展[J].中国食品添加剂， 2008（01）： 110-113.

作者简介：张德伟， 副主任中药师， 主要研究方向为食品药品质量检测分析。

基金项目： 重庆市万州区2020年度科技创新项目（wzstc-2020059）， 重庆市科学技术局2021年度重庆市药品科研项目

*通信作者： 朱泽兵， 主管中藥师， 主要研究方向为食品药品质量检测分析。

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