市售甲氧苄啶快检试剂盒绝对灵敏度的分析

叶雅真 骆和东

摘 要：为了解导致市售甲氧苄啶快检试剂盒产品实际检测灵敏度不够的原因，本研究对检出限符合要求且适用于动物源性食品中甲氧苄啶检测的胶体金快检产品进行绝对灵敏度研究。结果显示，试剂盒的绝对灵敏度和实际检测灵敏度不成正比。因此，有必要进行甲氧苄啶快检方法研究，提高试剂盒产品实际检测灵敏度，并进一步优化试剂盒产品中胶体金标记的抗原抗体，提高产品对0.5倍检测限和1倍检测限的识别差异，以提高快检准确度，确保试剂盒产品的快检监管效果。

关键词：甲氧苄啶;胶体金免疫层析;食品安全快速检测

Analysis of Absolute Sensitivity of Commercial Kits for Rapid Detection of Trimethoprim

YE Yazhen1， LUO Hedong1，2*

（1.Xiamen Institute for Food and Drug Quality Control， Xiamen 361012， China; 2.RayKol Group （Xiamen） Co.， Ltd.， Xiamen 361015， China）

Abstract： In order to master the reasons for the insufficient sensitivity of the commercial trimethoprim rapid test kit， a unifiable absolute sensitivity analysis was conducted on kits for rapid detection of trimethoprim in foods of animal origin. By researching the absolute sensitivity of kits and comparing the results with the evaluation results， it was found that the absolute sensitivity of kits were not directly proportional to the actual detection sensitivity. Therefore， it was necessary to study the rapid detection method of trimethoprim to improve the actual detection sensitivity of kits， and optimize the material of colloidal gold to deepen the distinguish between the half detection limit and the detection limit， as to improve the accuracy of rapid detection and ensure the rapid detection supervision effect of the kit products.

Keywords： trimethoprim; principle of colloidal gold immunochromatography; rapid detection for food safety

甲氧苄啶（Trimethoprim，TMP）是一种磺胺增效剂，常与磺胺类药物或其他抗生素联合使用，被广泛用于畜、禽、鱼等动物的疾病治疗方面[1-6]。动物性食品中的甲氧苄啶药物残留危害人体健康。长期食用甲氧苄啶残留超标的食品，可能会引起恶心、呕吐等反应，还可能引起人体的过敏反应、毒性反应，产生抗药性，引起“三致”（致畸、致癌和致突变）作用[7]。为有效开展甲氧苄啶残留的监管工作，确保食品安全，我国2002年开始对各种动物性食品中甲氧苄啶的最大残留限量作出规定。动物源性食品中甲氧苄啶相关残留限量标准已发布实施约20年，但对动物源性食品中甲氧苄啶残留的监控效果仍不理想。原因是食品检测周期较长，市场监管部门虽在食品上市时及时进行抽检，并筛查出问题食品，但问题食品已流入市民的餐桌，无法达到应有的监管效果[8-16]。

甲氧苄啶快检试剂盒20 min内就可出具快检结果，为监管部门对食品安全的监管提供了便利的技术手段，能有效解决食用农产品的监管难题。但在对市售试剂盒产品的质量评价中发现，目前市售甲氧苄啶试剂盒产品的检测灵敏度均不符合监管要求，各品牌产品都存在不同程度的漏检风险。为了解导致市售甲氧苄啶快检试剂盒产品实际检测灵敏度低的原因，本研究对检出限符合要求且适用于畜、禽、鱼等动物源性食品中甲氧苄啶检测的胶体金快检产品进行绝对灵敏度研究，为动物源性食品中甲氧苄啶快速检测方法的研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

甲醇中甲氧苄啶溶液标准物质（BePure-26347YM，1 000 μg/mL，BePure）;乙腈（色譜纯，德国MERCK）;磷酸氢二钠（分析纯，国药）;磷酸二氢钾（分析纯，国药）;甲氧苄啶快速检测试剂盒从市场上购买。

1.2 仪器与设备

Milli-Q超纯水处理系统（美国Millipore）;电子天平（德国Sartorius）;移液枪（德国Eppendorf）;pH计（瑞士METTLER TOLEDO）。

1.3 绝对灵敏度测试方案

在市场调研中，检出限符合要求且适用于畜、禽、鱼等动物源性食品中甲氧苄啶检测的胶体金快检产品有5种。根据《化学试剂 pH值测定通则》（GB/T 9724—2007）中4.2.4方法配制pH=7.0的磷酸盐标准缓冲溶液。将甲氧苄啶乙腈标准储备液

（1.0 µg/mL）用磷酸盐标准缓冲溶液稀释并配制成标准系列溶液。无需样品前处理，以标准系列溶液作为待测液，按照各品牌试剂盒说明书进行检测。比较检测线（T线）与控制线（C线）颜色深浅，相邻浓度间定性结果有差异时确定为该品牌试剂盒的绝对灵敏度。

2 结果与分析

为避免对企业造成影响，对试剂盒品牌进行编号表示，分别为A品牌、B品牌、C品牌、D品牌和E品牌。根据各品牌试剂盒说明书设定绝对灵敏度初步测试的标准系列溶液浓度梯度。

使用0 ng/mL、0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL浓度梯度对A、B品牌试剂盒进行初步测试，A、B品牌试剂盒的定性结果均为阴性、阳性、阳性、阳性和阳性，在0～0.5 ng/mL定性结果差异明显。因此，再用0.1 ng/mL、0.2 ng/mL、

0.3 ng/mL和0.4 ng/mL浓度梯度对这2个品牌试剂盒进行试验，A品牌试剂盒定性结果分别为弱阴性、阳性、阳性、阳性，在0.1～0.2 ng/mL定性结果有差异，该品牌试剂盒的绝对灵敏度为0.1～0.2 ng/mL;B品牌试剂盒定性结果分别为阴性、弱阴性、阳性和阳性，在0.2～0.3 ng/mL定性结果有差异，该品牌试剂盒的绝对灵敏度为0.2～0.3 ng/mL。

使用0 ng/mL、2.5 ng/mL、5.0 ng/mL、7.5 ng/mL和10.0 ng/mL浓度梯度对C、D品牌试剂盒进行初步测试，C、D品牌试剂盒的定性结果均分别为阴性、阳性、阳性、阳性和阳性，在0～2.5 ng/mL定性结果有明显差异。因此，再用0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、1.5 ng/mL和2.0 ng/mL濃度梯度进行试验，C品牌试剂盒的定性结果分别为阴性、阴性、弱阳性和阳性，在1.0～1.5 ng/mL定性结果有差异，该品牌试剂盒的绝对灵敏度为1.0～1.5 ng/mL;D品牌试剂盒的定性结果分别为阳性、阳性、阳性和阳性，增加0.25 ng/mL浓度梯度试验，其在0.25 ng/mL浓度梯度的定性结果为弱阴性，在0.25～0.5 ng/mL定性结果有差异，该品牌试剂盒的绝对灵敏度为0.25～0.5 ng/mL。

使用0 ng/mL、10 ng/mL、15 ng/mL、20 ng/mL和25 ng/mL浓度梯度对E品牌试剂盒进行测试，定性结果分别为阴性、阴性、弱阴性、弱阳性和阳性，在15～20 ng/mL定性结果有差异，该品牌试剂盒的绝对灵敏度为15～20 ng/mL。

以上各品牌试纸条的稀释液各不相同，使用不同厂家配制的稀释液可能有不同表现。由定性结果可知，各品牌试剂盒的绝对灵敏度均不相同，A、B和D品牌试剂盒的绝对灵敏度较高，在0～0.5 ng/mL，C品牌试剂盒绝对灵敏度在1.0～1.5 ng/mL，E品牌试剂盒绝对灵敏度较低，在15～20 ng/mL。通过和厂家联系，各品牌所使用的原料金标抗原抗体各不相同，原料金标抗原抗体的差异导致了绝对灵敏度的差异。

3 结语

在对试剂盒产品的绝对灵敏度研究中，发现A品牌试剂盒产品的绝对灵敏度最高，与C品牌产品的绝对灵敏度相差近10倍。但在试剂盒质量评价中，A品牌试剂盒的假阴性率为19.0%，是C品牌试剂盒产品假阴性率的2倍，评价结果显示A品牌试剂盒产品实际检测灵敏度不够，漏检率明显高于C品牌试剂盒产品。

对比试剂盒质量评价结果和绝对灵敏度研究结果，试剂盒的绝对灵敏度和实际检测灵敏度不成正比，导致这种结果的原因可能在于样品的前处理。由于目前还没有发布动物源性食品中甲氧苄啶的快速检测方法，5个品牌试剂盒产品的前处理试剂配方和前处理方法均不一样，有的采用甲醇水溶液、有的采用三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液、有的采用磷酸盐缓冲液等，导致各品牌试剂盒产品对甲氧苄啶的提取效率、基质干扰不尽相同。

因此，有必要进行快检方法研究，对样品的前处理方法、测定过程、交叉反应情况等进行研究，对方法进行优化，提高试剂盒产品实际检测灵敏度，并进一步优化产品胶体金标记的抗原抗体，以提高产品对0.5倍检测限和1.0倍检测限的识别差异，降低检测假阳性风险，提高快检准确度，确保试剂盒产品的快检监管效果。

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