利伐沙班片经鼻胃管给药方式的体外试验研究

唐 谦，郭艳超，周 璐，马雯霞

1 浙江省药品化妆品审评中心，杭州 310012；2 杭州朱养心药业有限公司，杭州 310018

口服固体仿制药一致性评价旨在仿制药的研究过程中，力求在质量和疗效上与参比制剂一致性，是一系统评价工程，其内容包含体外药学研究、体内生物等效性研究。对于临床吞咽困难的患者，采用鼻饲管给药可以解决口服给药存在的缺陷和困难，此类药物在体外药学研究中，除了常规的溶出曲线对比，还应进行仿制药与参比制剂在经鼻饲管给药时、各物理指标的一致性，确保仿制药质量与参比制剂相同。

利伐沙班片在“用法用量”项下标明对于不能吞咽的患者可将药品分散于水中，通过鼻管或胃管给药。借鉴2020 年8 月美国FDA 发布的个药指南《Draft Guidance on Rivaroxaban》[1]，提出了本品除体内生物等效性试验外，还包括体外鼻胃管给药的试验研究。本实验参考了相关文献[2]，结合药物特性，开发鼻饲管给药体外研究方法，分别开展了沉降试验、粒径分析试验和回收试验等，经对比研究，在模拟鼻饲管给药的情况下，所选研究指标稳定，药物损耗可控，自制制剂与参比制剂均一致。本研究除了证明本公司自制品与参比制剂在特殊给药方式下、具有相同的体外给药效果，还给予同样给药方式的其他药物体外研究提供了参考。

1 仪器与药材

仪器：高效液相色谱仪Agilent1260；马尔文激光粒度仪Mastersizer 3000；电子天平XSE205。

药材：16 Fr（Fr 为管径单位French 的简称，1French=0.33 mm）规格的鼻胃管，灌注器；利伐沙班片自制品（批号：180601，含量103.5%，杭州朱养心药业有限公司）；参比制剂（批号：BJ50488，含量100.9%，拜耳医药保健有限公司）；利伐沙班对照品（批号：20200310，含量：100.0%，浙江省食品药品检验研究院标化）；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 沉降试验

结合临床用药过程的时间，选0 min（代表刚配制完的时间，下同）和15 min 进行对比研究。

取12 片自制品压碎，倒入60 mL 注射器中，抽取50 mL 纯化水，剧烈振摇30 s 后，倒置注射器，静止15 min。记录0 min 和15 min 的沉降高度，重复以上操作，平行制备6 份供试品溶液。结果见表1。

从表1 可知，自制制剂与参比制剂的沉降情况无明显差异。

表1 沉降高度

2.2 粒径分析试验

《中国药典》收载的粒度及粒度分布测定法有3种，分别为显微镜法、筛分法、光散射法。其中光散射法更能准确对比自制品和参比制剂的粒度分布情况，结合临床用药过程，选择选0min 和15min 进行对比试验，两个时间点配制两组供试品溶液进行比较。

2.2.1 供试品溶液配制将自制品12 片压碎成小块状，全部投入60 mL 规格的灌注器内；吸取40 mL纯化水，上下剧烈振摇30 s，立即将灌注器与16 Fr规格的鼻胃管连接，将颗粒分散液收集到烧杯中；吸取分散介质5 mL，纯化水冲洗灌注器和鼻管，冲洗2 次，并收集到同一份烧杯中，即得0 min 供试品混悬液；剧烈振摇灌注器30 s，倒置灌注器15 min后再进行操作，得15 min 供试品混悬液。每个试验制备6 份样品，每份样品测3 次，取平均值。

2.2.2 粒径检测方法验证 样品折光率1.63，吸收率0.01，转速1000 r·min-1，遮光率10%～15%，内置超声关闭，分散介质为纯化水。按照“2.2.1”制备6份0 min 供试品溶液进行精密度试验。结果见表2。

表2 粒径检测精密度试验结果（μm，n=6）

12 份自制品的D50 的RSD%不大于10%，D10、D90 的RSD%不大于15%，中间精密度符合要求。

2.2.3 粒径分析对比试验取自制品与参比制剂按照“2.2.1”方法制备0 min 和15 min 样品进行粒径检测，粒径对比结果见表3。

表3 自制品与参比制剂粒径测试结果（μm，n=6）

从表3 可知，自制品与参比制剂0 min 与15 min结果均无明显差异，说明经鼻胃管给药的粒径一致。

2.3 回收试验

利伐沙班属于难溶性药物，故在设计回收试验时，同时对比了直接加水混悬（模拟临床鼻胃管给药）和加稀释剂助溶后自制制剂与参比制剂的回收情况。

2.3.1 检测方法验证按照高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Purospher Star RP endcapped，55 mm×4.0 mm，3 μm），乙腈-水（30∶70）为流动相，检测波长为250 nm，柱温为40 ℃，进样量10 μL。对检测方法进行方法验证，结果为：浓度在2.03～12.18 μg·mL-1，r 为0.999 9；回收率在99.71%～102.71%，RSD 为1.2%；6 份供试品重复性的RSD 为0.3%，12 份供试品中间精密度的RSD 为0.6%。从验证结果可知，方法准确可靠。

2.3.2 自制品与参比制剂回收对比试验精密称取利伐沙班对照品约10 mg，置20 mL 量瓶中，加稀释剂（乙腈-0.01 mol·L-1磷酸溶液，3∶2）超声溶解，冷却至室温，稀释至刻度，摇匀，吸取1 mL 置50 mL量瓶中，加入纯化水稀释至刻度，摇匀即得。

供试品溶液的制备：取自制品1 片压碎，全部投入60 mL 规格的灌注器内，吸取40 mL 纯化水，上下剧烈振摇30 s，立即将灌注器与16 Fr 规格的鼻胃管连接，然后使颗粒分散液经由灌注器和鼻胃管推入50 mL 量瓶内。吸取5 mL 的稀释剂后轻轻摇晃灌注器，使液体经由鼻饲管推入量瓶，对系统进行冲洗，重复两次，加入稀释剂稀释定容至刻度线。摇匀后过滤，取续滤液即得0 min 供试品溶液；振摇30 s，将灌注器倒置15 min 再行同法操作，即得15 min 供试品溶液。平行制备12 份样品。计算自制制剂（T）与参比制剂（R）的初始剂量回收率，并报告T/R 回收率比以及T/R 回收率比的可信区间，结果见表4、表5。

由表4、表5 回收试验结果可知，自制制剂在难溶的情况下（纯化水作为溶剂，模拟临床给药）和完全溶解情况下（纯化水作为溶剂，并加入助溶剂），主成分回收情况均与参比制剂一致。

表4 供试品溶液1（稀释剂为水）回收试验结果（%）

表5 供试品溶液2（稀释剂为乙腈）回收试验结果（%）

3 讨论

本实验样品属于普通口服固体制剂，且无pH依赖性，故在研究过程中未考察不同来源纯化水pH 值的影响，如为肠溶制剂可参考相关文献[2]进行不同类型的水及耐酸性进行对比考察。

在临床给药过程中，样品处于混悬状态，考察自制品与参比制剂的混悬液的粒度是否一致显得尤为重要；检测粒度的方法虽然比较多，但筛分法和显微镜法都存在明显的局限性，而光散射法可以充分对比，说明自制品与参比制剂混悬液状态是否一致。同时，对于试验中的难溶类药物，有必要进行两种溶剂的回收试验：一种模拟临床实际用药，采用50mL 水作为溶剂，经鼻胃管给药；另一种以50mL水作为溶剂，经鼻胃管后加助溶剂使药品主成分完全溶解，这样可以更充分表明鼻胃管对药品有无吸附，以及吸附情况是否一致。

本实验就特殊给药途径的药物作了体外对比研究，包括沉降试验、粒径分析试验及回收试验，为自制品与参比制剂具有相同的给药效果提供了数据支持，也希望对同仁提供借鉴。