石菖蒲联合奥拉西坦对阿尔茨海默病大鼠神经相关蛋白和炎性因子的影响

王东辉 田小海 李冬梅

(1长春医学高等专科学校基础医学部，吉林 长春 130000；2长春大学特殊教育学院)

阿尔茨海默病(AD)又称老年性痴呆症，是隐匿的脑部神经退行性疾病，其特点是进行性发展趋势一旦出现，AD症状将无有效药物逆转。随着世界人口老龄化的趋势患病率逐年上升，患者临床表现多为记忆力、智力障碍，甚至出现行动困难、大小便失禁，严重影响患者和家属的生活质量〔1～4〕。目前AD患者尚无有效治疗药物，本研究旨在探讨石菖蒲联合奥拉西坦对AD大鼠的治疗效果。

1 材料与方法

1.1实验动物与分组 SPF级Wistar雄性大鼠60只，体重(230±20)g，购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。随机分为空白对照组(10只)和实验组(50只)；实验组均为通过Morris水迷宫筛选的造模成功的AD大鼠，分为模型组、单纯奥拉西坦组、低剂量联合组、中剂量联合组和高剂量联合组，每组10只。

1.2实验药品、试剂与设备 中药石菖蒲购于毫州市佰林堂药业有限公司，自行研磨细粉使用；奥拉西坦胶囊由石药集团欧意药业有限公司提供(国药准字H20031033)；D-半乳糖购于长春市南关区金莱博生物实验服务部(美国，invitrogen)；大鼠β-淀粉样蛋白(Aβ)、微管相关蛋白(tau)、磷酸化管tau(P-tau)及炎性因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6蛋白含量检测试剂盒均购于南京建成生物工程公司。Morris水迷宫和Epoch酶标仪由吉林大学基础医学院提供。

1.3模型制备和给药方法 实验组50只大鼠每日腹腔注射D-半乳糖(100 mg/kg)，连续6 w。空白对照组和实验组同时在造模成功后每日灌胃给药5 w，其中空白对照组每日生理盐水灌胃5 ml/kg，实验组分别给予奥拉西坦40 mg/kg、石菖蒲0.5 g/kg+奥拉西坦40 mg/kg、石菖蒲1.0 g/kg+奥拉西坦40 mg/kg和石菖蒲高剂量2.0 g/kg+奥拉西坦40 mg/kg。

1.4样本制备 实验结束次日10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，眼球取血，3 000 r/min离心10 min，留血清4℃待检测，分离脑组织海马区-80℃保存待检测。

1.5各组血清和脑组织海马区神经相关蛋白Aβ、tau、P-tau的检测 操作严格遵守酶联免疫吸附试验试剂盒步骤，脑组织海马区需要4℃超声匀浆为0.01%的组织悬液。

1.6各组血清和脑组织海马区炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6的检测 操作严格遵守酶联免疫吸附试验试剂盒步骤，脑组织海马区需要4℃超声匀浆为0.01%的组织悬液。

1.7统计学分析 应用SPSS20.0统计学软件进行t检验。

2 结 果

2.1各组血清和脑组织海马区Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比较 与空白对照组比较，实验组各组血清和脑组织海马区Aβ、tau、P-tau的蛋白含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组血清和脑组织海马区aβ、tau、P-tau的蛋白含量均下降且石菖蒲呈剂量依赖性，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表1。

表1 各组血清和脑组织海马区Aβ、tau、P-tau的蛋白含量比较

2.2各组血清和脑组织海马区炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比较 与空白对照组比较，实验组各组血清和脑组织海马区炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，各给药组血清和脑组织海马区炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量均下降且石菖蒲呈剂量依赖性，差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 各组血清和脑组织海马区炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6蛋白含量比较

3 讨 论

AD发病隐匿，是世界老年人的第三大死因；随着世界人口老龄化的趋势发病日益增多，探究AD的治疗方案势在必行〔5〕。以往研究发现〔6〕，AD发病与Aβ、tau和P-tau的大量沉积有关，而这三者又能引发小胶质细胞表型的活化且促进炎性因子表达，因此提示AD发病与炎症密切相关〔7～9〕。

近年来临床用药发现西药治疗AD作用有限，靶点单一且容易导致肝肾功能损伤和出现耐药性，奥拉西坦作用于AD患者，能疏通血管、改善神经功能和认知功能，属于促智类药物对脑组织有很好的修复功能〔10～13〕。在中药治疗AD的众多方剂中石菖蒲的使用率较高，石菖蒲明确能入心肾经，是芳香开窍代表药物，能轻身、不忘、不迷和延年，具有抗氧化、抗衰老、强心、降压、改善记忆及抑制炎性因子表达的作用〔14，15〕。

AD发病时由于Aβ、tau、P-tau蛋白大量聚集形成，他激活脑组织内星形胶质细胞释放大量炎性因子如TNF-α、IL-1β及IL-6等，这些炎性因子进一步产生炎症反应从而损伤机体神经细胞〔16，17〕。本研究基于奥拉西坦能提高患者认知能力，石菖蒲具有抗氧化、抗衰老、改善记忆及抑制炎性因子表达的作用将两者联合用药，探究联合用药的功效。

本研究结果提示，中药石菖蒲联合奥拉西坦治疗效果优于单纯奥拉西坦，可能与降低大鼠血清和脑组织海马区神经相关蛋白和炎性因子有关，其作用机制有待进一步探讨。