蒙药混其勒-7的蓄积毒性实验研究

宝乐尔 白梅荣 胡伊力格其 那音台 巴达拉胡 美丽 田香

摘要：目的 本研究在急性毒性实验基础上对混其勒-7进行蓄积毒性试验，为混其勒-7的安全合理用药奠定实验依据。方法 将昆明种小鼠随机分为混其勒-7组和正常对照组。以4d为1个阶段，首次给药剂量为0.1LD50，其他阶段给药剂量依次递增为1.5倍，直至该组动物死亡一半为止。记录各阶段动物死亡情况并计算蓄积系数。同时计算脏器指数和相应生化指标。结果 蓄积毒性试验结果显示，混其勒-7的蓄积系数均为K>5，分级为弱蓄积。与正常对照组比较，混其勒-7组的肝脾指数明显升高，AST和CREP的含量明显升高，UREAL含量明显降低，均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 混其勒-7对肝肾有弱蓄积性毒性。

关键词：蒙药;混其勒-7;蓄积毒性;实验研究

中图分类号：R285.5   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2022）02-0080-03

据《通瓦嘎吉德》记载，高吉拉-7由制马钱子、诃子、木香、白云香、天竺黄、红花、沉香等七味药组成，具有活血、舒气、止痛的功能，主要用于胸胁、气急、胸胁刺痛、坏疽等，孕妇禁用[1-2]。该复方的主要药味马钱子是马钱科植物马钱（Strychnos nux-Vomica L.）或长籽马钱（Strychnos Sted.ex DC.）的干燥成熟的种子，为常用有毒蒙药之一[3-5]，从而使混其勒-7临床应用受到一定限制。临床上，当药物反复多次进入机体后，药物进入机体的速度或总量超过机体代谢转化的速度与排出机体的速度或总量时，药物或其代谢产物就可能在机体内逐渐增加并贮留某些部位。这种现象就称为药物的蓄积作用，大多数蓄积作用会产生蓄积毒性[6]。蒙药混其勒-7是多次口服的药物，且含有有毒药味马钱子，因此，该药在临床应用中产生蓄积毒性的可能性很大。本研究以混其勒-7为示例药物，以昆明种小鼠为研究对象，进行蓄积毒性研究，初步探讨混其勒-7毒性强度、中毒剂量、毒性靶器官，为混其勒-7临床安全合理应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，SPF级，雌雄各半，体质量（20±2）g，由辽宁长生生物技术股份有限公司提供（合格证号：SCXK（辽）2015-0001）。动物饲养于内蒙古民族大学蒙医药学院动物实验室（室内温度20℃～25 ℃，湿度40%～60%）。

1.1.2 实验药材 制马钱子（批号：20200634）、诃子（批号：20200801）、木香（批号：20200615）、白云香（批号：20171109）、天竺黄（批号：20170721）、红花（批号：20200622）、沉香（批号：20200641）均由内蒙古民族大学附属医院制剂室提供，由蒙医药学院包桂花教授鉴定。

1.1.3 实验试剂 丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒（ALT，批号 43546001）、天门冬氨酸氨基转移酶检测试剂盒（AST，批号44713101）、尿素/尿素氮检测试剂盒（UREAL，批号48268901）、肌酐检测试剂盒（CREP，批号 47756001）均购自罗氏诊断产品（上海）有限公司。

1.1.4 实验仪器 CobasC311罗氏全自动生化分析仪（日本）;TG16-WS台式高速离心机（长沙）;YP-5002电子天平;DE-200 g粉碎机（浙江）;BCH198K冰箱（青岛）。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 40只昆明小鼠（雌雄各半）按体重和性别随机分为正常对照组、混其勒-7组，每组20只。给药前12 h禁食不禁水。给药剂量以4 d为1个阶段，第1个阶段每只动物每天给药剂量为0.1 LD50，以后各阶段依次递增1.5倍，直至该组动物死亡一半。正常对照组每日給予与实验组相同体积的蒸馏水。

1.2.2 观察指标

1.2.2.1 日常状态观察 给药后每天称重并详细观察并记录给药组小鼠的外部表现（运动状态、毛发颜色、排泄物的形状及死亡率等）。实验最后一天处理小鼠后取五脏后生理盐水漂洗并用滤纸擦干称重，计算各脏器指数（公式：脏器指数=脏器重量/体重×100%）。

1.2.2.2 计算蓄积系数[6-8] 实验最后1 d计算混其勒和混其勒-7的蓄积系数。（公式：蓄积系数K=累积剂量/LD50值）。

1.2.2.3 混其勒-7对蓄积毒性小鼠肝、肾功能的影响 实验最后一天处理剩余小鼠，采血，3000 r/min离心10 min分离血清，检测生化指标丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、尿素（UREAL）、肌酐（CREP）。

1.2.2.4 统计学方法 用SPSS 22.0软件分析数据，进行组间t检验。

2 实验结果

2.1 蒙药混其勒-7小鼠蓄积毒性日常状态 实验头两个阶段混其勒-7组的小鼠没有明显的症状，给药第三阶段开始精神状态欠佳、活动变少、全身蜷缩，给药后出现颤抖甚至死亡现象。跟混其勒组基本相似。

2.2 蒙药混其勒-7蓄积系数、用药剂量、给药时间及死亡现象 给药后第三阶段开始出现小鼠死亡现象，第五阶段死亡小鼠的数量到达该组动物数量的一半，此时小鼠用药总量为8329.8 mg/kg。蓄积系数K>5，出现了弱蓄积性。见表1。

2.3 蒙药混其勒-7蓄积毒性对小鼠的脏器指数的影响 与正常对照组比较，混其勒-7组小鼠的肝脾指数明显升高（P<0.05）。由此可见混其勒-7对小鼠肝脾具有一定程度的影响。见表2。

2.4 蒙药混其勒-7蓄积毒性对小鼠的肝肾功能的影响 与正常对照组比较，混其勒-7组小鼠的血清中AST和CREP含量明显升高（P<0.05，P<0.01），UREAL含量显著降低（P<0.05）。由此进一步表明混其勒-7对小鼠肝肾具有一定程度的影响。见表3。

3 结论

蒙药混其勒-7蓄积系数K均大于5，具有弱蓄积毒性。

4 讨论

蓄积毒性实验是每日给药小于致死剂量的药物使其染毒，判断药物代谢过程中是否有蓄积现象[7-8]。实验结果表明，蒙药混其勒-7蓄积系数K均大于5，出现了弱蓄积毒性。实验前两阶段小鼠的日常状态无明显变化，第三阶段开始小鼠的动作变缓慢、蜷缩、毛发光泽度下降，给药后出现颤抖、甚至死亡现象。

与正常对照组比较，蒙药混其勒-7组的肝肾指数均明显升高且血清AST、ALT含量也明显升高，统计学都具有显著性差异。这可能由于开始阶段药物浓度较低，混其勒-7到达肝脏后，由肝脏解毒作用被初步解毒，接着药物浓度增加后肝脏解毒作用逐渐变弱而出现中毒现象。蒙药混其勒-7的UREAL含量明显下降，CREP含量明显升高。由此初步判定蒙药混其勒-7的蓄积毒性的靶向器官是    肝和肾脏。该研究为混其勒-7临床合理应用及慢性毒性研究奠定了实验基础。

参考文献：

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[8]胡滨，陈一资.亚硒酸钠的急性、蓄积性、亚急性毒性研究[J].食品科学，2011，32（5）：258-262.

（收稿日期：2021-08-27）