益生菌对结直肠癌患者放化疗期肠道菌群及肠屏障功能的影响

罗晓斌，黄定鹏

（1.广州市黄埔区云埔社区医院门诊部，广东广州 510760；2.中国人民解放军南部战区总医院消化科，广东广州 510030）

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年1月至2020年12月中国人民解放军南部战区总医院收治的100例结直肠癌患者纳入研究，按随机数字表法将患者分为观察组和对照组，各50例。观察组患者中男性30例，女性20例；年龄46~77岁，平均年龄（67.16±8.11）岁；Dukes肿瘤分期：B期32例，C期18例。对照组患者中男性29例，女性21例；年龄47~78岁，平均年龄（67.23±8.04）岁；Dukes肿瘤分期：B期34例，C期16例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。本研究经中国人民解放军南部战区总医院医学伦理委员会审批通过，所有患者及家属均对研究知情并签署知情同意书。纳入标准：①符合《中国结直肠癌诊疗规范（2017年版）》[4]中结直肠癌的诊断标准，且经过病理学诊断证实；②治疗前1个月内未使用微生态活菌制剂。排除标准：①存在胃肠道手术史；②合并胃肠道炎症或肠梗阻；③对益生菌过敏；④同时患有其他癌症。

1.2 治疗方法 两组患者均行氟尿嘧啶注射液（华仁药业股份有限公司，国药准字H20030565，规格：100 mL：氟尿嘧啶0.25 g与氯化钠0.9 g）+奥沙利铂甘露醇注射液（辰欣药业股份有限公司，国药准字H20052531，规格：100 mL:奥沙利铂50 mg与甘露醇5.1 g）化疗方案治疗，氟尿嘧啶注射液静脉滴注350 mg/m2，连续静脉滴注5 d，奥沙利铂甘露醇注射液静脉滴注130 mg/m2，静脉滴注1 d，同时行常规盆腔放射治疗，照射剂量50 Gy，5次/周，2 Gy/次，放疗开始第1、5周均予以同步化疗。两组患者在放化疗治疗后5 d左右给予营养支持，以短肽型肠内营养剂（Milupa GmbH，国药准字H20100287，规格：125 g/袋）为主要肠胃营养能源，前3 d按照125 g/d，以120 mL/h速度滴注，后2 d按照250 g/d，以120 mL/h速度滴注。放化疗当天对照组患者口服：奥美拉唑肠溶胶囊（海南普利制药股份有限公司，国药准字H20113282，规格：20 mg/粒），40 mg/d；头孢呋辛酯片（苏州中化药品工业有限公司，国药准字H19990342，规格：0.25 g/片）4.5 g/d，进行治疗。观察组患者在对照组基础上加用双歧杆菌四联活菌（杭州远大生物制药有限公司，国药准字S20060010，规格：0.5 g/片），1.5 g/次，3次/d，连续服用7 d。

1.3 观察指标 ①疗效评价：按照WHO实体瘤疗效评测标准[5]，分为完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、疾病稳定（SD）、疾病进展（PD），疾病控制率=（CR+PR+SD）/总例数×100%。②肠道菌群检测：放化疗结束后第7天取患者5 g新鲜粪便，取0.5 g粪便加入5 mL生理盐水稀释10倍，连续稀释法稀释，并将其滴注于不同培养基上，选择双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、粪肠球菌进行培养与计数。③肠道屏障功能检测：放化疗前及放化疗结束后第7天抽取患者5 mL静脉血，3 000 r/min转速离心处理10 min，通过酶联免疫吸附法利用二胺氧化酶/乳酸/细菌内毒素联检试剂盒（北京中生金域诊断技术股份有限公司）测定D-乳酸（D-LAC）、二胺氧化酶（DAO）；尿乳果糖/甘露醇比值（L/M）测定：放化疗前1晚禁食，放化疗开始前清晨使患者排空膀胱并口服含乳果糖5 g、甘露醇2.5 g的测试液25 mL，2 h后正常饮食，服用6 h后收集尿液，取20 mL尿液并加入0.2 mg硫柳汞，-20 ℃冷藏，3 000 r/min转速离心处理10 min，利用高效液相色谱仪[沃特世科技（上海）有限公司，型号：E2695]测定L/M，放化疗结束后第6天晚上禁食，放化疗结束后第7天早晨服用测试液并收集尿液，3 000 r/min离心处理后测定L/M。

1.4 统计学分析 采用SPSS 22.0统计学软件处理数据，计量资料以（）表示，组间对比采用独立样本t检验，组内对比采取配对样本t检验；计数资料以[例(%)]表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床疗效比较 两组患者疾病控制率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者临床疗效比较 [例(%)]

2.2 两组患者治疗后肠道菌群比较 观察组患者治疗后肠道双歧杆菌、乳酸杆菌数显著高于对照组，大肠杆菌、粪肠球菌数显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者治疗后肠道菌群比较 [log(CFU/g)， ]

表2 两组患者治疗后肠道菌群比较 [log(CFU/g)， ]

组别 例数 双歧杆菌 乳酸杆菌 大肠杆菌 粪肠球菌观察组 50 9.55±0.69 9.49±0.67 7.92±0.59 8.61±0.61对照组 50 7.85±0.62 8.47±0.66 8.93±0.61 9.07±0.63 t值 12.959 7.669 8.415 3.709 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 两组患者治疗后肠道屏障功能比较 两组患者治疗前D-LAC、DAO、L/M比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组治疗后D-LAC、DAO、L/M水平较治疗前显著降低，且观察组显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者治疗后肠道屏障功能比较（ ）

表3 两组患者治疗后肠道屏障功能比较（ ）

注：与同组治疗前比较，*P＜0.05。D-LAC：D-乳酸；DAO：二胺氧化酶；L/M：乳果糖/甘露醇比值。

组别 例数D-LAC（ng/mL） DAO（ng/mL） L/M治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后观察组 50 12.37±1.88 9.76±1.52* 109.37±17.88 88.92±13.18* 2.14±0.27 1.17±0.18*对照组 50 12.41±1.89 10.83±1.53* 110.48±17.76 98.77±14.36* 2.15±0.36 1.33±0.27*t值 0.007 3.808 0.311 3.573 0.157 3.487 P值 0.994 0.001 0.756 0.000 0.876 0.001

3 讨论

正常生理环境下的肠道菌群有着黏膜免疫功能，肠道菌群中的厌氧菌占比较多，且可以与肠道黏膜受体结合，形成生物屏障，减少病菌对机体的侵袭[6]。相当一部分结直肠癌患者在治疗前就已存在肠道菌群失衡与肠屏障功能减弱情况[7]，另外，结直肠癌患者在进行放化疗时所使用的药物除了具有杀死肿瘤细胞的功效外，药物本身的毒性也会对患者体内正常细胞造成不良影响[8]，如破坏患者肠道细胞，致肠道菌群紊乱，侵袭诸如粒细胞等免疫细胞[9]，降低患者免疫力[10]，使革兰阳性球菌、阴性杆菌等病原菌增殖，肠道菌群易位。同时，出于抗感染考虑，部分结直肠癌患者会服用庆大霉素等肠道抗菌药物，对肠道厌氧菌的生长产生抑制，损害肠功能，厌氧菌的大量减少与需氧菌的大幅增多也使肠道菌群平衡受到打击。另外，因放化疗而产生的应激状态也可引起肠道缺氧，引起内脏血管痉挛，炎性介质增多，对肠黏膜造成损伤。

本次研究显示，两组患者的疾病控制率比较差异无统计学意义，提示放化疗期间加用双歧杆菌四联活菌并不会影响结直肠癌的治疗效果。观察组患者治疗后肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌数显著高于对照组，大肠杆菌、粪肠球菌数显著低于对照组，这主要是双歧杆菌四联活菌中含有双歧杆菌和嗜酸乳杆菌，可有效与肠道上皮细胞结合，使肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌数量增多。同时，双歧杆菌产生的脂肪酸也对大肠杆菌与粪肠球菌与大肠杆菌的过度繁殖加以抑制，使肠道感染得以缓解。史新龙等[11]选取60例直肠癌患者，对其行益生菌酪酸梭菌胶囊干预，比较治疗前后的肠道菌群变化，发现干预后患者肠道菌群构成得到明显改善，且肠黏膜细胞间紧密性得以加强，肠道黏膜通透性降低，肠道免疫功能增强，与本次研究结果一致。

由于炎性介质的释放与内脏血管的痉挛，导致结直肠癌患者的肠黏膜缺血和再灌注损伤，进而使肠道通透性增强，肠屏障功能降低。相关研究表明，益生菌可通过免疫屏障对肿瘤进行抑制，加速肿瘤组织的凋亡[12]。D-LAC、DAO、L/M均为评价肠屏障功能的重要指标，DAO是一种活性细胞内酶，D-LAC则是菌群代谢产物，DAO与D-LAC水平越高，肠黏膜损伤度越高，L/M比值越高，患者肠道通透性越高，肠黏膜连接部位遭到破坏越多。本次研究中观察组患者治疗后D-LAC、DAO、L/M显著低于对照组，主要是由于益生菌的代谢产物可以形成机体抗原，机体抗原在进入体内淋巴细胞后，促进机体产生免疫应答，增强机体免疫功能，减少体内炎性介质的释放，增强抗炎细胞因子表达，从而达到减少患者肠黏膜损伤，提升肠屏障功能的目的。

综上所述，益生菌可对结直肠癌患者肠道菌群的紊乱起到纠正作用，对肠屏障功能起到修复作用，有一定推广价值。