血清人类可溶性程序性死亡配体-1、血管内皮细胞生长因子对食管鳞癌的预后评估价值

朱曼，郭晓锋，魏昕，周福有

［安阳市肿瘤医院（河南科技大学第四附属医院）1.检验科；2.胸外科，河南 安阳455000］

食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一，河南省安阳地区是食管鳞癌的高发区［1］，食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）严重威胁着当地人民的生命健康。近年来，食管鳞癌的诊疗手段不断革新，胃镜和病理检查能为肿瘤的诊断提供强有力的依据，但是仍有相当一部分患者抵触胃镜检查，延误病情，就诊时已错过最佳诊疗时机。血液肿瘤标志物作为一种补充手段，创伤小，更容易被患者接受，可以为临床医生诊断肿瘤和治疗疗效、预后判断提供依据。因此，发现新的肿瘤标志物和挖掘其新用途势在必行。本文将现阶段研究热点人类可溶性程序性死亡配体-1（soluble programmed death ligand-1，sPD-L1）和血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）相结合，探究其对ESCC 预后的评估价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2016 年11 月至2017 年2 月安阳市肿瘤医院经术后病理确诊为ESCC 的患者105 例，其中男71 例，女34 例；年龄60～70，平均（64.50±5.57）岁。另选健康体检者35 例作为对照，其中男31 例，女4 例；年龄60～70，平均（65.77±5.58）岁。ESCC 组患者TNM 分期参照UICC/AJCC 2017 年第八版食管癌TNM 分期标准［2］，其中Ⅰ+Ⅱ期49 例，Ⅲ+Ⅳ期56 例；有家族史者49例，无家族史者56 例；有淋巴结转移者53 例，无淋巴结转移者52 例；肿瘤直径＜3.5 cm 者42例，肿瘤直径≥3.5 cm 者63 例。所有研究对象均排除内分泌、免疫及代谢疾病。

对所有患者采用电话和门诊的方式随访，所有患者术后1 个月、3 个月、半年各随访一次，之后半年随访一次，随访截止日期2020 年4 月，生存时间按“个月”计算。

本实验经安阳市肿瘤医院伦理学委员会批准，所有研究对象知晓实验内容，并签署受试者知情同意书。

1.2 方法

采集受试者治疗前空腹静脉血3 mL，室温静置30 min，离心分离血清后检测。sPD-L1 和VEGF 均采用酶标测定仪（LabSystems Multiskan MS-352，芬兰雷勃公司）检测。sPD-L1 试剂由上海乔羽生物科技有限公司提供，VEGF 试剂由北京健平金星生物科技有限公司提供。所有操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行数据分析及图表制作。符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，两两比较采用t检验；计数资料以百分率（%）表示，比较采用χ2检验。采用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析三指标对ESCC 患者长期死亡率的预测价值。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ESCC 组、正常对照两组血清sPD-L1、VEGF 水平比较

ESCC 组血清sPD-L1、VEGF 的水平与正常对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 ESCC 组、正常对照两组血清sPD-L1、VEGF 水平比较（±s，pg/mL）

表1 ESCC 组、正常对照两组血清sPD-L1、VEGF 水平比较（±s，pg/mL）

2.2 患者临床病理学特征与血清sPD-L1、VEGF水平的关系

按性别、年龄、TNM 分期及肿瘤直径分组，患者血清sPD-L1、VEGF 水平的比较差异无统计学意义（P＞0.05）。有家族史的患者的血清VEGF的水平高于没有家族史的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。有淋巴结转移与无淋巴结转移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 血清sPD-L1、VEGF 水平与患者生存时间的关系

生存时间＜3 年的患者有46 例，生存时间＞3 年的患者有59 例，三年生存率为56.19%。生存时间＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存时间＞3 年的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

2.4 血清sPD-L1、VEGF 预测ESCC 患者3 年内死亡的ROC 曲线

ROC 曲线结果显示，血清sPD-L1、VEGF 预测ESCC 患者3 年内死亡的AUC 分别为0.820、0.733，两者联合预测3 年内死亡的曲线下面积（AUC）为0.842。其敏感性为84.7%，特异性为78.3%。见图1。

表2 患者临床病理学特征与血清sPD-L1、VEGF 水平的关系（±s，pg/mL）

表2 患者临床病理学特征与血清sPD-L1、VEGF 水平的关系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平与患者生存时间的关系（±s，pg/mL）

表3 血清sPD-L1、VEGF 水平与患者生存时间的关系（±s，pg/mL）

图1 血清sPD-L1、VEGF 预测ESCC 患者3 年内死亡的ROC 曲线

3 讨论

食管鳞癌是一种预后较差的恶性肿瘤，其5 年相对生存率为20.9%，1 年、3 年和5 年观察生存率分别为54.0%、25.5%和18.4%［3］。近些年由于生活水平的提高，食管鳞癌的发病率有下降趋势［4］，但依然是威胁人类健康的恶性因素。目前治疗食管鳞癌的方式以手术为主［5］，放化疗辅助。现阶段的研究仍未找到食管鳞癌的敏感靶点，免疫治疗举步维艰。

PD-1/PD-L1 通路是现阶段的研究热点，肿瘤细胞表面高表达PD-L1 与T 细胞表面表达的PD-1相结合，阻碍T 细胞的分化，使T 细胞停留在G0期，失去了杀伤肿瘤细胞的功效，从而导致肿瘤的免疫逃逸。PD-L1 在体内免疫系统中不光以细胞膜型（mPD-L1）的形式存在，还有可溶性（sPD-L1）的形式存在［6］。CHEN 等［7］研究发现，血清sPD-L1的水平与组织中mPD-L1 的表达强度正相关。施敏骅等［8］发现mPD-L1 和sPD-L1 有相似的生物学功能，并且都能与T 细胞表面PD-1 受体结合，负向调控免疫系统。sPD-L1 相较于mPD-L1 取材方便，更容易在临床作为一项肿瘤标志物开展。现阶段研究报道，sPD-L1 与多种肿瘤的发生发展、治疗疗效和预后相关［9-13］。

在实体肿瘤的生长和转移过程中，VEGF 发挥重要作用。VEGF 是垂体滤泡细胞分泌的糖蛋白［14］，能够促进内皮细胞增殖和新血管形成，同时还可以改变细胞外基质［15］，进一步促进肿瘤细胞的转移。近年来，血清VEGF 的检测在临床上广泛开展，其在肿瘤的疗效判断和预后方面具有举足轻重的作用。

本研究结果显示，ESCC 组血清sPD-L1、VEGF 的水平明显高于正常对照组，这和食管鳞癌的发生、发展相关，在肿瘤病灶的长期慢性刺激下，肿瘤细胞或宿主对肿瘤的刺激可合成和分泌特异性蛋白或相关的因子，这些蛋白或因子的水平检测在肿瘤的诊断、治疗和预后判断上提供辅助信息。有家族史的患者血清VEGF 的水平高于无家族史的患者（P＜0.05），说明VEGF 可能在ESCC 的基因学研究上有一定的价值。有淋巴结转移与无淋巴结转移的患者血清sPD-L1、VEGF 的水平比较差异有统计学意义（P＜0.05），说明两个指标参与了肿瘤的进展过程，是ESCC 潜在的治疗相关的生物标志物。生存时间＜3 年的患者为46例，生存时间＞3 年的患者为59 例，三年生存率为56.19%，和其他学者的研究报道［16-17］基本相符。生存时间＜3 年的患者的血清sPD-L1、VEGF 水平高于生存时间＞3 年的患者（P＜0.05）。ROC 曲线结果显示，血清sPD-L1、VEGF 联合预测3 年内死亡可能性的价值优于单一预测，表示这两项指标可以为临床医生判断预后提供参考依据。

综上所述，血清sPD-L1、VEGF 可以作为食管鳞癌预后判断的参考依据。但本研究仍旧存在不足之处，主要有以下三点：①本研究是单中心研究，其研究结果需要多中心验证；②样本量较少，需要进一步扩大样本量来证实实验结果；③现阶段这两项指标的检测方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）法，该方法的干扰因素较多，可能会使实验结果产生误差，随着研究深入和技术革新，发现更精确的检测方法可以进一步验证本研究的结果。