高效液相色谱法测定面煨肉豆蔻中去氢二异丁香酚含量

董清，杜攀，李培

（山东省聊城市检验检测中心，山东 聊城 252000）

肉豆蔻作为药材使用始载于唐代王焘《外台秘要方》，具有温中行气、涩肠止泻之功效，用于脾胃虚寒、久泻不止、脘腹胀痛、食少呕吐［1］。其炮制方法最早见于南北朝刘宋《雷公炮炙论》的面煨法［2］，后又出现麸煨、湿纸煨、滑石粉炒、麸炒、蛤粉炒、制霜等法。2005年及以前版本《中国药典（一部）》中炮制方法均为面煨法，2010年版以后改为麸煨法［3］。《山东省中药饮片炮制规范》采用面煨法［4］，虽操作烦琐，面结不易除去，但该炮制工艺沿用已久，且面煨能除去部分油脂，免于滑肠，减轻刺激，增强固肠止泻功效，故有必要继续保留。肉豆蔻主要含有挥发性成分和非挥发性成分，非挥发性成分中去氢二异丁香酚具有较强的抑菌、抑制肝内脂质氧化作用，为肉豆蔻的活性成分［5］，且在煨制过程中不易挥发。本研究中建立了测定面煨肉豆蔻中去氢二异丁香酚含量的高效液相色谱法［6−7］，以提高面煨肉豆蔻的质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200sl型色谱工作站（美国安捷伦科技公司），配有G1314B型紫外检测器；BT 125D型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司，精度为0.1 mg）；KQ−500GVDV型双频恒温数控超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司，功率为500 W，频率为80 kHz）。

1.去氢二异丁香酚A.对照品溶液B.供试品溶液C.空白溶剂图1高效液相色谱图1.DehydrodiisoeugenolA.Reference solution B.Test solution C.Blank solventFig.1 HPLC chromatograms

1.2 试药

去氢二异丁香酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号为111838−201804，含量为98.6%）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯；肉豆蔻（安徽省毫州药材市场，共10批，产地为广西），经山东省聊城市检验检测中心李广华主管中药师鉴定为正品，均符合2020年版《中国药典（一部）》标准。

2 方法与结果

2.1 面煨肉豆蔻制备

取面粉，用清水和成面团，压成薄饼状，用面饼逐个包裹肉豆蔻，皮厚1.5～3.0 mm［8］，凉至半干，投入已炒热的滑石粉或沙中，煨炒至面皮呈焦黄色，透出芳香气味时取出，筛去滑石粉或沙子，剥去面皮，放凉；或趁热剥去面皮，及时切成厚片，放凉。共制备10批（分别编号为1−10号）。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：甲醇−水溶液（72∶28，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：274 nm；柱温：30℃；进样量：10 µL。理论板数以去氢二异丁香酚峰计不低于3 000，在此色谱条件下的色谱图见图1。

2.3 溶液制备

取去氢二异丁香酚对照品25 mg，精密称定，加甲醇溶解并定容至50 mL容量瓶中，摇匀，作为对照品贮备液；精密量取3 mL，加甲醇定容至50 mL容量瓶中，摇匀，即得对照品溶液。取样品粉末（过2号筛）0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz，温度为2～10℃）30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，即得供试品溶液。以甲醇作为空白溶剂。

2.4 方法学考察

线性关系考察：精密吸取2.3项下对照品贮备液1，2，3，4，5，6 mL，分别置20 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，按2.2项下色谱条件进样测定。以去氢二异丁香酚对照品的进样量（X，µg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=3 675.9X−4.921 3（r=1.000 0，n=6）。结果表明，去氢二异丁香酚对照品进样量在0.132 0～0.792 0µg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取2.3项下对照品溶液10µL，按2.2项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果的RSD为0.71%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取样品（编号为7号），按2.3项下方法制备供试品溶液，平行6份，按2.2项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果的RSD为0.78%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：吸取2.3项下供试品溶液10µL，分别于0，6，12，18，24，30，36 h时按2.2项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果的RSD为0.67%（n=7），表明供试品溶液在36 h内稳定性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（编号为7号，去氢二异丁香酚含量为0.228%）0.5 g，精密称定，共12份，置50 mL容量瓶中，分别加入去氢二异丁香酚对照品溶液（质量浓度为0.105 6 mg/mL）7.5，15.0 mL，各6份，加甲醇适量，超声处理（功率为250 W，频率为40 kHz，温度为2～10℃）30 min，加甲醇定容，滤过，取续滤液，即得待测溶液。按2.2项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果见表1。

2.5 样品含量测定

取10批样品（编号为1−10），依法制备供试品溶液，分别吸取上述溶液10µL，按2.2项下色谱条件进样测定。结果10批样品的含量分别为0.16%，0.21%，0.19%，0.40%，0.18%，0.39%，0.23%，0.24%，0.35%，0.36%，平均含量为0.27%。

3 讨论

肉豆蔻是种子类药材，含有大量脂肪类成分，且沸点极低，室温放置即可析出油脂，检测时易堵塞液相色谱仪。曾采用正己烷提取油脂，再用甲醇超声提取的方法处理样品，后改用直接超声提取、冰箱冷藏再过滤的方法及低温超声提取过滤的方法，测得含量差异不大，故最终选择低温超声提取方法。

本方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重复性和稳定性均良好，可用于测定面煨肉豆蔻中去氢二异丁香酚的含量。