一例罕见抗-Chido/Rodgers抗体的鉴定及特征分析*

王贞 魏玲 骆宏 廖志坚 莫春妍 姬艳丽 罗广平

Chido/Rodgers血型系统的抗原并不位于红细胞膜的固有结构上，而是携带于结合在红细胞膜表面的补体第四成分（C4）的C4d片段上；C4具有C4A和C4B两个同种型，分别由两个紧密连锁的基因C4A和C4B基因编码，大多数情况下，Ch抗原携带在C4B上，而Rg抗原携带在C4A上，共价结合在红细胞表面[1]。Chido/Rodgers抗原可以被经典的红细胞血型鉴定方法检测到，且在这些抗原和C4之间的关系被证实之前，已经被当作血型抗原，因此Chido/Rodgers被归纳为第17个人类血型系统[2]。目前，在Chido/Rodgers血型系统中已鉴定出9种抗原，其中8种为高频抗原，其中Ch1（CH/RG1）至Ch6（CH/RG6）、Rg1（CH/RG11）和Rg2（CH/RG1）抗原频率超过90%，个别抗原频率高达99%[2]。针对Chido/Rodgers抗原的抗体是IgG抗体，主要是IgG2和IgG4[3]，通常不会引起溶血性输血反应或新生儿溶血[2，4-5]。由于Chido/Rodgers抗原多为高频抗原，因此抗-Chido/Rodgers抗体极为罕见，本文对国内首例疑似抗-Chido/Rodgers抗体进行鉴定，并对鉴定方法报道如下：

材料与方法

1 研究对象 患者，汉族，女性，32岁。无输血史，曾有2次不良孕产史，此次诊断为双胎妊娠胚胎停育，需手术终止妊娠，在手术备血过程中发现交叉配血不合，标本送至本中心临床输血研究所进行检测。

2 主要试剂与仪器 单克隆抗-A、抗-B 试剂（上海血液生物医药有限责任公司，批号20190610），Rh血型分型卡（江苏力博医药生物技术股份有限公司，批号：202002006），反定型试剂红细胞、抗体筛选细胞及试剂谱细胞（本实验室自制），胰酶（sigma公司，批号：SLBS8956），菠萝酶（sigma公司，批号：BCCC9201），Coombs微柱凝胶卡（西班牙Grifols公司，批号：17071.01），离心机KA-2200（日本，KUBOTA 公司），恒温孵育箱及卡式离心机（西班牙Grifols公司）。

3 血型鉴定 试管法鉴定患者ABO血型，Rh血型分型卡鉴定患者Rh型，应用Coombs微柱凝胶卡进行间接抗人球实验（IAT）确证患者RhD血型。

4 抗体筛选试验 将患者血清与抗体筛选细胞分别在盐水介质与Coombs微柱凝胶卡中进行反应，观察凝集强度，同时将患者血清与患者自身红细胞进行反应作为对照。

5 血型单特异性抗体鉴定实验 将患者血清与试剂谱细胞在Coombs微柱凝胶卡中进行反应，观察凝集强度。

6 患者血清与酶处理谱细胞反应 分别将胰酶和菠萝酶与压积试剂谱细胞以4∶1体积比混合，37℃孵育30 min，用生理盐水洗涤3次后与患者血清在Coombs微柱凝胶卡中进行反应，观察凝集强度。

7 患者血清与新鲜血浆的中和抑制试验 将患者血清与3人份献血者新鲜血浆以4∶1体积比混匀，同时将患者血清与磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffered saline，PBS）以相同体积比混合做为稀释对照，于室温孵育30 min，然后将混合有新鲜血浆的患者血清与谱细胞在微柱凝胶卡中反应，对照组同样进行微柱凝胶卡反应，观察凝集强度。

结 果

1 血型鉴定 患者血型为O型，Ccdee。

2 抗体筛选试验 患者血清与Ⅰ号筛选细胞反应呈2+凝集，与Ⅲ号筛选细胞反应呈弱阳性，与Ⅱ号筛选细胞及自身细胞反应阴性，结果提示患者血清中存在不规则抗体。

3 血型单特异性抗体鉴定实验 患者血清仅与9号和11号谱细胞反应阴性，与6号及10号谱细胞反应呈弱阳性，与其余细胞反应均呈2+凝集（结果见表1），对照谱细胞格局表无法判断抗体的特异性，需进一步进行鉴定。

4 患者血清与酶处理谱细胞反应 分别采用胰酶和菠萝酶处理谱细胞后，患者血清与酶处理细胞反应均为阴性（结果见表1），根据此结果结合与常规谱细胞反应强度不一致的特性，推测该患者血清中可能存在抗-Chido/Rodgers抗体。

5 患者血清与新鲜血浆的中和抑制试验 应用新鲜血浆吸收后的患者血清与谱细胞在微柱凝胶卡中反应，结果均为阴性，PBS稀释对照组结果与未吸收的患者血清的谱细胞反应格局一致（结果见表1），说明该患者血清中的抗体可被新鲜血浆中和，符合抗-Chido/Rodgers抗体可被新鲜血浆中的补体成分中和的关键特性，证实为抗-Chido/Rodgers抗体。

表1 谱细胞反应格局表

讨 论

高频抗体通常会与所有谱细胞凝集或仅有极个别的细胞呈阴性反应，无法直接通过谱细胞反应格局进行抗体判定，同时还需要与自身抗体导致的谱细胞全凝集以及混合抗体导致的谱细胞全凝集进行区别。高频抗体通常直抗阴性，可与自身抗体导致的谱细胞全凝集进行区分，而与混合抗体的鉴别则需要与酶处理细胞进行反应加以区分，根据不同的酶对于不同抗原的作用不同，通过酶处理谱细胞反应格局进行抗体的鉴定。

在进行抗体筛查及抗体鉴定时应同时采用自身红细胞与血浆反应作为自身对照，如果自身对照无凝集，则可排除自身抗体。在本案例中，患者血浆与自身细胞反应呈阴性，首先排除了自身抗体。患者血清与11个谱细胞中的9个谱细胞均发生凝集反应，并且凝集强度不一致，与其余2个谱细胞反应阴性，此反应格局首先怀疑存在混合抗体，因此我们进一步采用了胰酶、菠萝酶处理的谱细胞分别进行抗体鉴定，结果发现患者血清与胰酶和菠萝酶处理后的谱细胞反应均为阴性，不符合常规混和抗体特征。初步判断为高频抗体，但通常高频抗体会导致谱细胞全凝集且凝集强度均一，如本实验室曾鉴定出的抗-JMH抗体及Cromer血型系统的抗-IFC抗体等，而本案例抗体与谱细胞反应凝集强度不一致，因此提示患者血清中可能存在抗-Chido/Rodgers抗体。

Chido/Rodgers同样是高频抗原，但由于Chido/Rodgers抗原不表达于红细胞固有结构上，而是位于来自血浆结合在红细胞表面的补体C4上，不同个体间的补体水平差异较大，结合于红细胞膜上的补体C4也有很大的差异，对应的不同个体间Chido/Rodgers抗原变化很大，而且很难将弱阳性的红细胞与阴性的红细胞区分开来，因此尽管抗-Chido/Rodgers抗体是高频抗体，但其与不同的细胞反应强度不一致，甚至会出现反应为阴性的情况[2，6-8]，这是抗-Chido/Rodgers抗体的重要特点，本实验结果与此相符；同时红细胞膜上的Chido/Rodgers抗原可被多种酶破坏[8]，经多种酶处理后的红细胞与抗-Chido/Rodgers抗体反应阴性，本案例抗体鉴定结果与这些特性均相符合。但其他血型系统的一些抗体，如JMH血型系统抗体、Inb血型抗体也与多种酶处理后的谱细胞反应阴性，因此需要进一步的实验加以甄别。

抗-Chido/Rodgers抗体有一个区别于其他血型抗体的最关键特性，即可以被新鲜血浆中的补体成分中和，抑制其与红细胞的凝集反应[9-10]，为了进一步确证，在本案例中，我们采用了新鲜混合血浆对患者血清进行中和抑制试验，中和后的患者血清与谱细胞反应均为阴性，说明其抗体可被新鲜血浆中和，符合抗-Chido/Rodgers抗体的关键特征，证实患者血清中的抗体为抗-Chido/Rodgers抗体。吴梅筠曾报道一例欧美病例产生抗-Chido抗体，应用谱细胞进行鉴定，发现患者血浆与其中一个谱细胞反应为阴性，与其他谱细胞反应强度为1+或2+，再应用另一套不同的谱细胞鉴定时，同样出现反应强度不一致（1+或2+），也有一个谱细胞反应阴性，最后应用血浆中和抑制试验及胰蛋白酶处理红细胞与患者血浆反应，最终鉴定为抗-Chido抗体[7]，与本文案例结果一致。

本文首次在国内对一例疑似针对高频抗原的罕见抗-Chido/Rodgers抗体进行鉴定，该抗体属于IgG抗体，目前报道的抗-Chido/Rodgers抗体绝大多数来自于反复输血的患者，本文案例没有输血史，但是有2次不良孕产史，因此该类抗体可能经免疫刺激产生。由于国内市场商业化抗-Ch和抗-Rg抗体的缺乏，无法鉴定患者红细胞Chido/Rodgers抗原；同时Chido、Rodgers抗原的编码基因（C4B和C4A基因）高度同源（同源性高达99%）且紧密连锁，均含有41个外显子，其基因型及其复杂，不同的氨基酸序列编码不同的同种型，但Ch和Rg表型与特定的同种异型体之间并无直接关联[2]，对C4B和C4A基因进行分子检测仍然无法准确判定其表型，因此在临床鉴定时进行基因测序分析的意义不大。应用不同种酶处理谱细胞与患者血浆反应，以及应用新鲜混合血浆对患者血清进行中和抑制试验，是目前临床上用以鉴定抗-Chido/Rodgers抗体最适合的实验手段，而其中最关键的是新鲜混合血浆的中和抑制实验，在初步判断抗体可能为抗-Chido/Rodgers抗体时，必须进行该实验进行最终鉴别诊断及确证。由于血浆中的补体活性在室温存放2小时后开始下降，因此在进行补体中和抑制试验时应尽可能采用新鲜采集的外周血样本血浆，以确保中和抑制试验的顺利进行。

抗-Chido/Rodgers抗体在红细胞输注中目前被认为没有临床意义，没有造成明显的溶血性输血反应的报道，而且用放射性标记Chido阳性红细胞输注给有抗-Chido抗体的患者，患者无免疫性输血反应[11-12]，因此临床检出抗-Chido/Rodgers抗体的患者需要输注红细胞治疗时可以选择配血中不凝集或凝集强度最弱的血液输注；在极少数的个例中，曾发现抗-Chido/Rodgers抗体与一些输入新鲜冰冻血浆、血浆因子及含有血浆的浓缩血小板后引发的严重过敏反应有关[13-15]，有此类抗体的患者在输注血浆类血液成分时需引起临床注意。

在临床输血工作中，常常会遇到抗体筛查或抗体鉴定全凝集反应，通常为混合抗体或者高频抗体，酶处理红细胞在此类抗体的鉴定中具有重要作用，在临床进行输血前检查发现谱细胞全凝集时，需应用酶处理谱细胞进行鉴定，应用不同的酶处理谱细胞进行实验，再根据反应格局结合不同血型系统抗体的特性进一步判断，必要时增加相关特异性实验加以确证，进而保障临床输血安全。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突