党参多糖对环磷酰胺所致小鼠贫血的治疗效果观察

邢秀玲，赵海鹰，李丽君，高丽华,才蔚涛，王海燕，王 巍，田 菲，孙映雪，刘伟然，杜美容

肿瘤相关性贫血(CRA)是指肿瘤患者在疾病发展、治疗过程中出现的贫血，机体内血红蛋白(Hb)浓度降低或外周血单位容积内红细胞数量减少，机体无法对周围组织与细胞供氧，进而引发的恶性贫血[1-2]。CRA在采用放疗或多种化疗肿瘤患者中的发生率为70%～90%[3]，恶性肿瘤化疗所致贫血常导致患者无法继续化疗和出现一系列贫血症状。目前，随着中药在临床中的广泛应用，其在减轻化疗药物毒副作用等方面发挥了积极作用。党参性味甘平，归脾肺两经，具有养血生津、健脾益肺的功效[4]。本研究主要探讨党参多糖对环磷酰胺(CTX)所致小鼠贫血的治疗效果。

1 材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1实验动物：SPF级健康雄性BALB/c小鼠60只，10周龄，体质量18～22 g，购自百农实验动物繁育科技有限公司，饲养于天津中医药大学动物实验研究中心，实验动物许可证号SCXY(津)2015-0002。实验动物分笼饲养，饲养环境：温度(22±2)℃，相对湿度60%～70%，自由摄食饮水。适应性饲养7 d后备用。

1.1.2药物与试剂：党参多糖，纯度为98%，购自陕西慈缘生物技术有限公司，批号20190507；注射用CTX购自江苏盛迪医药公司，批号H32026196；生理盐水购自山东鲁抗医药公司，批号H20045154；生血宁片购自武汉联合药液有限责任公司，批号20150305。促红细胞生成素(EPO)酶联免疫吸附试验检测试剂盒购自美国RB公司，批号DRE30187；多能集落刺激因子(multi-CSF)检测试剂盒购自上海烜雅生物有限公司，批号XY-SJH-XS1176；CD71、Ter119购自美国BD公司，批号分别为554890及563998。

1.1.3实验仪器：F-800型全自动血球计数仪购自日本Sysmex公司，流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司，MK3型全自动酶标仪购自上海赛默飞世尔有限公司，ROTOFIX 32台式离心机购自德国HITTICH公司。

1.2实验方法

1.2.1动物造模和分组[5]：按照随机数字表法将60只小鼠均分为空白组、模型组[5]和党参多糖低、中、高剂量组及阳性对照组6组。模型组和低、中、高剂量组及阳性对照组分别于实验第1天，按100 mg/kg剂量腹腔注射CTX,每日1次；空白组给予等容积生理盐水腹腔注射，连续7 d。实验第2天开始，于注射CTX后2 h，低、中、高剂量组分别给予党参多糖10、20、40 ml/kg灌胃；阳性对照组给予生血宁片，用前将药片研成细粉末，用生理盐水配制，按照400 mg/kg剂量灌胃，每日1次，连续7 d。每3日称体质量并检测小鼠血红细胞(RBC)和Hb。实验期间各组小鼠均自由摄食饮水。

1.2.2RBC、Hb及红细胞压积(HCT)测定：实验第9天，各组依次经鼠尾静脉取血0.5 ml，置入抗凝试管中，用全自动血球计数仪测定RBC、Hb及HCT水平。

1.2.3multi-CSF和EPO测定：实验第9天，各组依次经鼠尾静脉取血0.5 ml，血液样品置于室温自然凝固15 min，然后3000 r/min离心20 min，取血浆于-20 ℃环境中保存备用。严格按照ELISA试剂盒说明书检测血浆multi-CSF和EPO水平。

1.2.4外周血细胞CD71+和Ter119+测定[6]：同上取各组小鼠尾静脉血，置入抗凝试管中，红细胞裂解液裂解，离心，弃上清，加入PBS液洗涤2次，离心，弃上清，收集细胞。分别加入抗CD71和Ter119单克隆抗体各10 μl，震荡混匀，室温避光反应20 min，1000 r/min离心5 min，弃上清，再加入PBS液洗涤2次，1500 r/min离心10 min，用流式细胞仪检测CD71+和Ter119+水平。

2 结果

2.1各组小鼠RBC、Hb和HCT水平比较 与空白组比较，模型组外周血RBC、Hb和HCT均显著降低(P<0.05)；与模型组比较，低、中、高剂量组RBC、Hb和HCT均显著升高(P<0.05)；空白组与阳性对照组比较，RBC、Hb和HCT均无差异(P>0.05)。低剂量组、中剂量组RBC、Hb、HCT明显低于阳性对照组(P<0.01)，高剂量组RBC、Hb、HCT与阳性对照组比较无差异(P>0.05)。见表1。

表1 各组小鼠外周血RBC、Hb和HCT水平比较

2.2各组小鼠multi-CSF和EPO水平比较 与空白组比较，模型组外周血multi-CSF和EPO水平均显著降低(P<0.05)；与模型组比较，低、中、高剂量组multi-CSF和EPO水平均显著升高(P<0.05); 空白组与阳性对照组比较，multi-CSF和EPO均无差异(P>0.05)。低、中、高剂量组multi-CSF均低于阳性对照组(P<0.01)，且随着干预剂量的增加multi-CSF呈升高趋势；低、中剂量组EPO明显低于阳性对照组(P<0.01)，高剂量组EPO与阳性对照组比较无差异(P>0.05)。见表2。

表2 各组小鼠multi-CSF和EPO水平比较

2.3各组小鼠外周血CD71+和Ter119+水平比较 模型组CD71+和Ter119+水平显著低于空白组(P<0.01)；与模型组比较，低、中、高剂量组CD71+和Ter119+水平均显著升高(P<0.01)；空白组与阳性对照组比较，CD71+和Ter119+水平无差异(P>0.05)。低、中剂量组CD71+和Ter119+水平均低于阳性对照组(P<0.01)，高剂量组CD71+和Ter119+水平与阳性对照组比较无差异(P>0.05)。见表3。

表3 各组小鼠外周血CD71+和Ter119+水平比较

3 讨论

CRA是指因肿瘤因素或在肿瘤治疗过程中发生的贫血，是恶性肿瘤常见并发症。严重贫血可增强恶性肿瘤的侵袭性，还能促进肿瘤细胞转移，进而影响肿瘤的治疗效果及患者预后，降低患者生存质量[7-8]。目前临床针对CRA主要采用输血或多种生血药物联合治疗。输血常用于严重贫血患者，可迅速纠正贫血症状，短期内升高Hb，但如果不予病因治疗，输血的疗效是短暂的。此外，若患者多次输血，体内可能产生抗体，从而缩短Hb的维持时间，且输血后出现的免疫抑制反应可促进肿瘤生长[9]。

随着近些年中医药在肿瘤治疗中的广泛应用，其在改善患者临床症状、减轻放化疗毒副作用等方面发挥了积极作用。CRA属中医“虚劳”“血虚”“血枯”等范畴，多采用补益类中药治疗，党参是临床常用的补益类中药，也是药食两用的保健食材，具有养血生津、健脾益肺的功效。我们从中国知网中国学术期刊网络出版总库以党参为主题词共检索到2007—2019年发表的中文期刊4204篇[10]。以党参为主药的益中生血胶囊[11]、健脾益肾颗粒[12]、复方阿胶浆[13]、健脾生血颗粒[14]、圣愈汤[15]等中成药及中药古方治疗CRA的研究屡见报道。

现代药理学研究发现，党参含有多糖、党参昔、甾醇类、三萜类、生物碱、内酯类、香豆素类等多种成分，具有提高免疫力、抗炎、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、保护神经、增强造血功能、调节胃肠道功能等多种药理活性，而党参多糖是其主要有效成分[16-17]。张晓君等[18]报道，党参多糖能促进溶血性贫血模型小鼠外周血Hb，增加脾脏结节个数，对脾脏代偿造血功能有促进作用。本研究结果表明，党参多糖各剂量组较模型组均可增加外周血RBC、Hb和HCT水平，说明党参多糖对CTX所致贫血具有显著的疗效。

EPO是由肾皮质肾小管周围间质细胞分泌的一种激素样物质，作用于骨髓红系造血祖细胞并促进其增殖分化。部分CRA发生原因为EPO含量相对不足[19-20]。multi-CSF是造血干细胞增殖分化的正性调节因子，通过与靶细胞表面的受体结合传递生长、分化信号，调控造血干细胞增殖及向各系血细胞分化、成熟，是造血功能调节的重要因子。本研究结果显示，党参多糖低、中、高剂量组较模型组外周血EPO均显著升高，表明党参多糖能促进造血因子分泌，从而提高造血功能。

CD71是早期红系祖细胞向晚期幼稚红细胞过渡的一个特异性抗原标志物，CD71和Ter119常被用以标记红系细胞在体内的动态成熟过程[21]。本研究结果表明，党参多糖各剂量组外周血CD71+及Ter119+水平较模型组显著升高，表明外周血幼稚红细胞逐步向成熟红细胞转化。

综上，党参多糖能有效改善CTX致小鼠贫血。