顶空气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中乙醇残留量

骆海春 陈高健 姚起艳 张雪梅

北海市食品药品检验所，广西 北海 536000

珍珠明目滴眼液是由珍珠液、冰片两味中药组成，具有清热泻火、养肝明目作用，用于肝虚火旺引起的视力疲劳症和慢性结膜炎，长期使用可以保护视力。该药为二十世纪80年代由江苏省卫生厅批准的中药滴眼液，目前收载于《中药成方制剂》第17册[1]，是基本药物品种[2]。珍珠明目滴眼液生产过程中运用到乙醇作为助溶剂，《中国药典》2020年版四部通则0861中规定，乙醇为第三类溶剂残留，不得超过0.5%[3]。虽然目前该滴眼液的检验标准中乙醇残留量并未做要求，鉴于《中国药典》2020年版相对于前版药典增加了许多药品的溶剂残留项目，可见控制溶剂残留会成为今后医药工业生产上的趋势。珍珠明目滴眼液作为眼药制剂，质量标准还需要完善，可将乙醇残留量作为标准提高项目。文献资料中，只有气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中乙醇残留量的记载[4]，此方法为直接进样法，直接进样法容易污染系统和检测器，而且样品基质也可能会干扰检测过程。因此，建立了顶空气相色谱法测定珍珠明目滴眼液中乙醇残留量，本方法采用气体进样，可专一性收集样品中的易挥发性成分，避免了不挥发成分对系统和检测器的污染以及对检测的干扰，具有更高灵敏度和分析速度，可以进一步有效控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 7890A气相色谱仪(含FID检测器)；DANI HSS86.50顶空进样器；AX205DU电子分析天平。

1.2 试药 乙醇纯度标准物质(批号：GBW06112 15002，中国计量科学研究院，标准值：99.8%)；叔丁醇(批号：0451905，标准值99.9% )，水为娃哈哈纯净水。珍珠明目滴眼液6批次(批号：190403，北海国发海洋生物产业股份有限公司制药厂；批号：191104，湖北潜江制药股份有限公司；批号：SC201115，苏州工业园区天龙制药有限公司；批号：191024，苏州太湖美药业有限公司；批号：20100402，武汉五景药业有限公司；批号：20080205，武汉五景药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：HP-INNOWAX石英毛细管柱(30 m×0.530 mm,1.00 μm)；载气为氮气，流速：4.0 mL/min；分流比2∶1，氢气 30 mL/min；空气400 mL/min。检测器温度：250 ℃；进样口温度：200 ℃；初始温度70 ℃，保持5 min，升温至180 ℃，保持8 min，顶空进样，平衡温度70 ℃，平衡时间15 min；进样量1 mL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 内标溶液的制备 精密称取叔丁醇 0.2206 g，置50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL置100 mL量瓶中，添加水至刻度，混匀，作为内标溶液。

2.2.2 对照品储备液的制备 精密称取乙醇纯度标准物质1.0017 g，至100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密量取对照品储备液2～25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液0.1 mL与内标溶液0.5 mL，置 20 mL 顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。

2.2.4 供试品溶液的制备 精密称取珍珠明目滴眼液1.0 g置5 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液0.1 mL与内标溶液 0.5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，作为供试品溶液。

2.3 系统适应性实验 取对照品溶液、供试品溶液 ，按“2.1”项下的色谱条件分别进行测定，供试品溶液中乙醇与内标溶液中叔丁醇峰完全分开，保留时间分别为2.07和1.89，分离度为4.17，理论塔板数乙醇为39154，叔丁醇为30302。供试品溶液如图1所示。

图1 供试品溶液色谱图

2.4 专属性试验 取阴性对照(水)按“2.1”项下的色谱条件进行测定。结果阴性对照(水)对乙醇测定无干扰。如图2所示。

图2 阴性对照图

2.5 线性关系考察 精密量取2.2.2项下的对照品储备液0.25、0.5、1、2、4、8 mL，分别置 25 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。制成0.1000、0.1999、0.3999,0.7998、1.5995、3.1990 mg/mL的系列对照品溶液。分别精密量取上述系列对照品溶液0.1 mL及内标0.5 mL置20 mL顶空进样瓶中，密封。按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。以乙醇峰面积与叔丁醇的峰面积比值Y为纵坐标，以对照品溶液的浓度X为横坐标，计算得到回归方程：Y=1.1164X-0.0176(r=0.9999)。结果表明乙醇在0.1000～3.19990 mg范围内，对照品与内标峰面积比与检测浓度呈良好的线性关系。

2.6 检出限 精密量取浓度为0.1000 mg/mL的对照品溶液逐步稀释，精密量取稀释后的对照品溶液0.1 mL和内标溶液0.5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以基线噪音的3倍计算，得到乙醇的最低检出量为0.0513 μg。

2.7 精密度实验 按2.2.3项下方法制备对照品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件进行，记录色谱图。计算待测组分乙醇峰面积与内标物质叔丁醇面积比值的RSD为0.78 %。实验结果表明，本方法的稳定性良好。

2.8 重复性实验 精密称取同一批珍珠明目滴眼液(批号：190403)按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件进行，记录色谱图。按内标法计算乙醇含量，其乙醇含量分别为：0.217%，0.214%，0.215%，0.212%，0.216%，0.218%。平均值为0.215%，RSD为0.92%。实验结果表明，本方法的重复性良好。

2.9 稳定性实验 精密称取同一批珍珠明目滴眼液(批号：190403)按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件，分别于0、2、4、8、12、16、20、24 h进样，记录色谱图。计算待测组分乙醇峰面积与内标物质叔丁醇面积比值的RSD为0.85%。实验结果表明，本方法 24 h 内稳定性良好。

2.10 加样回收率实验 精密称取已知乙醇残留量的珍珠明目滴眼液(批号：190403)约0.5 g，置5 mL量瓶中，精密加入“2.2.2”项下乙醇对照品储备液0.1、0.5、1.0 mL，加水稀释至刻度，摇匀。结果平均加样回收率为98.28 %，RSD为1.11 %。见表1。

表1 乙醇加样回收率实验结果

2.11 样品含量测定 精密称取6批样品按“2.2.4”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.1”项下色谱条件进行，记录色谱图。图谱如图3所示，测定结果见表2。

图3 6批样品图谱

表2 6批样品乙醇残留量

3 讨论

3.1 色谱柱的选择 在研究过程中[5-7]，进行了色谱柱的选择研究，经过比较FFAP、DB-1、HP-INNOWAX，最终选择HP-INNOWAX，待测物乙醇与内标叔丁醇可以达到较好的分离度和较高的理论塔板数，且无其他杂质峰干扰。

3.2 内标物质的选择 本实验考查了丙酮、异丙醇、正丙醇、二氧六环、N-N二甲基甲酰胺、叔丁醇、乙酸乙酯共7种内标物质[8-9]，结果表明叔丁醇出峰快、无干扰，与乙醇的分离度好，故选择叔丁醇为内标物质。

3.3 顶空条件的选择 本实验采用顶空平衡时间为15 min，比较了60、70、80、90、100 ℃的顶空平衡温度，结果表明70 ℃时已气化完全。故选择70 ℃作为顶空平衡温度。

3.4 测定结果讨论 从结果可以看出6批样品中乙醇残留量从0.2 %到0.5 %不等，变动幅度差别较大，虽然大部样品控制在0.5 %以内，但有两批样品超出了《中国药典》乙醇残留量0.5 %的限值，可见该滴眼液在生产过程中乙醇量的控制并不严格，建议明确乙醇的使用量，增加珍珠明目滴眼液的乙醇残留量的检查项，以进一步规范珍珠明目滴眼液的生产，保证药品的安全有效性。