瑶药皂布叶质量标准研究

张 婷 刘华东* 刘安韬 卢月妹

1.广西卫生职业技术学院，广西 南宁 530023；2.右江民族医学院，广西 百色 533000

瑶医药是我国民族医药的重要组成部分，具有理论简洁、简单实用、疗效确切、疗法别具一格等特点[1-2]。皂布叶是瑶医药常用药材之一，广泛分布于广西、广东、云南等西南各省及自治区，为鼠李科尼泊尔鼠李Rhamnusnapelensis(Wall.)Laws的全株，别名叶青、泡角等，民间用于祛风除湿，利水消胀，主治风湿关节痛、慢性肝炎、肝硬化腹水等病症[3-4]。在瑶医中具有祛风除湿、行气止痛的功效，用于崩闭闷(风湿痛、类风湿性关节炎)、播冲(跌打损伤)和碰脑(骨折)等病症。皂布叶中主要成分为黄酮和蒽醌等多酚类化合物[5]，刘安韬等[5]对皂布叶的研究表明，皂布叶有良好的抗痛风作用。为了更好地开发和利用其资源，研究建立了瑶药皂布叶药材的质量标准，分别对水分、总灰分和浸出物进行了测定，并采用紫外-可见分光光度法测定药材中总蒽醌的含量，研究结果为完善皂布叶药材质量标准提供技术依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 TU-1901紫外-可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)；赛多利斯分析天平BSA8201(赛多利斯上海贸易有限公司)；XS204电子天平(梅特勒-托利多国际贸易上海有限公司)；KQ2200E超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DFT-100高速粉碎机(大德药械有限公司)；SX2-8-16型马弗炉(上海力辰邦西仪器科技有限公司)；HH-S2数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)； DHG-9055A 型电热恒温鼓风干燥箱(上海吉众仪器有限公司)；98-I-b电热套(天津泰斯特仪器有限责任公司)。

1.2 药品与试剂 1,8-二羟基蒽醌(批号：110829-9702，中国食品药品检定研究院)；醋酸镁、95%乙醇、无水乙醇、甲醇和氯仿等均为分析纯。

12批次皂布叶样品采收于广西武鸣县，靖西县等地，干燥粉碎后备用。详见表1。

表1 皂布叶样品信息表

图1皂布叶植物图

图2 皂布叶植物墨线图(摘自《中国植物志》)

2 方法与结果

2.1 水分、总灰分和浸出物的测定

2.1.1 测定方法 水分测定照《中国药典》(2020年版)四部通则0832水分测定法“第二法”测定；总灰分测定照《中国药典》(2020年版)四部通则2302灰分测定法“总灰分测定法”测定。文献[4]表明，皂布叶中主要含有蒽醌和黄酮类化合物，极性相对较大，因此用水溶性浸出物和醇(95%乙醇)溶性浸出物来考察皂布叶中所含活性成分含量。照《中国药典》(2020年版)四部通则2201浸出物测定法中热浸法测定水溶性浸出物和醇溶性浸出物。

2.1.2 测定结果 12批样品的水分、总灰分和浸出物的测定结果见表2。根据测定结果，12批药材水分拟定为不得超过13%，总灰分拟为不得超过6.0%，水溶性浸出物拟不低于15.0%，醇溶性浸出物含量拟为不低于12.0%。

2.2 总蒽醌含量测定 皂布叶中主要成分为蒽醌类化合物[4]，采用紫外-可见分光光度法，醋酸镁-甲醇显色，测定皂布叶中总蒽醌含量。

2.2.1 蒽醌标准溶液的配制(0.1037 mg/mL) 精密称取10.37 mg 1,8-二羟基蒽醌，至100 mL量瓶，加甲醇适量溶解，用甲醇稀释至刻度。

2.2.2 醋酸镁-甲醇溶液的配制(质量分数为0.5%) 称取2.50 g醋酸镁溶于500 mL甲醇中，储于棕色瓶中保存备用。

表2 皂布叶样品水分、总灰分及浸出物测定结果 (n=3，%)

2.2.3 样品溶液的制备 取0.2 g样品粉末，精密称定，置100 mL锥形瓶中，精密量取50%甲醇50 mL，超声(常温)30 min，放冷，补足重量。过滤，精密量取25 mL滤液置蒸发皿中，水浴蒸干，加 3.0 mol/L 盐酸15 mL，水浴水解30 min，放冷，用乙酸乙酯10 mL分两次萃取，合并萃取液蒸干，加甲醇溶解，转移至25 mL量瓶，加甲醇至刻度。精密量取1 mL至50 mL量瓶，加4 mL醋酸镁-甲醇显色，用甲醇稀释至刻度。

2.2.4 标准曲线的绘制 分别精密量取蒽醌标准溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL置于 50 mL 容量瓶中，分别加入醋酸镁-甲醇溶液至 4 mL，摇匀显色，加甲醇至刻度，以试剂空白为参比，在230 nm 处测定吸光度(A)。以1,8-二羟基蒽醌浓度(C)为横坐标(mg/mL)，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线并拟合回归方程。如图3所示。从图3可知，得醋酸镁-甲醇法测定蒽醌的回归方程为：A=0.78C+0.0419，R2=0.9962，在0.002074～0.01037 mg/mL范围内线性关系良好。

图3 标准曲线与回归方程图

2.2.5 样品含量测定 对12个批次皂布叶样品(1～12号)进行干燥粉碎后，采用“2.2.3”进行供试品溶液的配制，照紫外-可见分光光度法，在230 nm波长下测定其吸光度，以标准曲线方程计算其含量。结果见表3。

由表3可知，皂布叶中总蒽醌的含量最高可达52.44 mg/g，最低为23.08 mg/g，平均含量为 37.64 mg/g；对照药材采收表，皂布叶药材在9～10月份含量达到较高值，随着植物开花结果，全株药材的蒽醌物质含量有下降趋势，一般在1～2月降到最低。皂布叶药材总蒽醌含量拟不低于20.0 mg/g。

表3 12个批次皂布叶样品总蒽醌含量

3 讨论

3.1 研究基础 作者前期对皂布叶药材进行了性状和显微鉴别研究[7]，研究表明皂布叶药材茎表面有大量皮孔，叶含色素类物质，干燥后呈灰黑色。皂布叶药材的茎髓薄壁细胞壁有念珠状增厚并有纹孔，药材粉末中含有丰富的石细胞和草酸钙簇晶，为药材性状和显微鉴别提供了依据，本研究进一步补充了药材质量研究数据。

3.2 药材检查数据的确定 皂布叶样品之间的水分、总灰分、浸出物和含量测定结果有一定的差异，与样品的采收时间有一定的关系。根据测定结果，12批样品的质量较稳定，考虑到广西气候较为湿润，故建议将药材水分拟定为不得过13.0%；总灰分不得高于6%，水浸出物和醇浸出物不得低于15%和12%。

3.3 含量测定方法考察 皂布叶中化学成分以多酚类为主，其中的蒽醌类成分显示出良好的抗炎，抑菌和抗氧化等[8-11]和抗痛风活性[6]。因此，针对药材中总蒽醌建立测定方法，并对样品制备方法进行考察，包括超声提取的温度，时间和提取溶剂及显色应用等，最终确定提取条件为常温超声50%甲醇提取30 min，药材取样0.2 g时，用醋酸镁显色剂4 mL。12个批次皂布叶药材的总蒽醌含量在23.08～52.44 mg范围内，建议皂布叶药材总蒽醌含量应不少于20.0 mg/g；

3.4 测定方法存在的问题 采用紫外-可见分光光度法进行含量测定具有较好的专属性和广泛的应用范围，在确定吸收波长条件下可以实现快速侦测。但由于光谱法本身的条件限制，测定样品的浓度过高会影响测定的准确度，另外会有同吸收峰的物质所干扰，影响准确度。高效液相色谱(HPLC)主要利用物质理化性质上的差异进行分离和定量测定。HPLC专属性强，准确度更高，但在含量测定中，对样品的组分的结构、性质的明确性要求较高，测定成分更明确，所需时间长。研究主要针对皂布叶药材中蒽醌类成分进行测定，而不是单体成分，测定方法便捷，结果稳定可靠，可以作为皂布叶药材质量控制的方法。在以后的研究中，课题组将进一步深入研究该药材的药效成分，建立专属性更强的测定方法。

综上所述，研究在前期研究基础上增加了皂布叶药材的水分、总灰分和浸出物等检查项，建立了测定药材总蒽醌含量的方法，完善了皂布叶质量标准，可为该药材的全面质量控制提供依据。