肺癌组织中半乳糖凝集素1表达与临床病理特征的关系及其预后评估价值分析

2022-01-27高波波唐晓雅李艳燕苏旋郭艮艮

东南大学学报（医学版） 2021年6期

高波波，唐晓雅，李艳燕，苏旋，郭艮艮

(空军军医大学第二附属医院呼吸与危重症医学科，陕西西安 710038)

肺癌在全球恶性肿瘤中患病率、死亡率位居首位，据报道，全球每年肺癌新增病例超过180万，以男性患者居多，5年生存率约为16.1%，预后不理想[1-2]。目前，手术切除、靶向治疗、放疗、化疗等在肺癌治疗中均有应用，具有一定效果，但肿瘤复发风险仍较高，对预后影响非常大[3-4]。因此，临床必须进一步掌握肺癌的发病、进展机制，寻求新的抗癌思路，为改善预后提供依据。近年来，医学研究发现在肺癌进展过程中存在多种基因改变，其参与了肿瘤细胞的转移、复发，分析这些基因作用机制可能对制定针对性治疗方案有帮助[5-6]。研究表明，半乳糖凝集素1(galectin-1，Gal-1)是半乳凝素家族的一员，它能与β-半乳糖苷相结合，参与细胞增殖、凋亡、新生血管形成等过程[7]。Chetry等[8]发现，Gal-1参与了宫颈癌的进展，与该病的恶性程度以及癌细胞转移密切相关。另有研究提示，Gal-1基因沉默会影响肿瘤细胞的迁移、凋亡能力，在肝细胞癌进展过程中发挥了重要作用[9]。现阶段临床尚未知晓Gal-1是否参与了肺癌的进展，关于其在肺癌中的作用机制也尚不明确。基于上述背景，本研究纳入130例肺癌患者为研究对象，分析Gal-1表达与肺癌病理特征、预后的关系，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2018年1月至2020年1月收治的130例肺癌患者进行研究。纳入标准：行手术治疗，经病理诊断证实为肺癌，年龄≥18岁者；能获取癌组织以及癌旁组织者；临床病理资料完整者；术前未采用新辅助治疗者；认知功能正常者；对研究内容知情同意者。排除标准：患有其他部位的原发性肿瘤者；既往有肺部手术史者；患血液系统疾病、传染性疾病者；患其他危及生命的疾病，如心、脑等重要脏器损害者。研究方案获本院伦理委员会批准。

1.2 Gal- 1表达水平检测

采用免疫组化法检测癌组织、癌旁组织中Gal-1表达水平。获取组织后经10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片(厚4 μm)，在60 ℃下烤片30 min。将切片放置在松节油Ⅰ、Ⅱ内分别浸泡10 min；分别置于95%、80%、75%乙醇内浸泡5 min；放置在蒸馏水Ⅰ、Ⅱ内分别浸泡5 min；室温下反应30 min，经蒸馏水进行2次清洗，5 min·次-1；取切片置于切片架，放置微波盒内加热至沸腾；将微波盒取出，冷却至室温，再次加热到沸腾，将玻片取出；蒸馏水清洗2次，5 min·次-1；PBS液清洗2次，5 min·次-1；加入10%山羊血清封闭液50 μl，在37 ℃下反应30 min；弃血清，加入一抗50 μl，37 ℃下反应30 min，在4 ℃下过夜；PBS液清洗2次，5 min·次-1；加入辣根过氧化酶标记链亲和素50 μl，37 ℃下反应30 min；PBS液清洗2次，5 min·次-1；经DAB显色3～5 min，观察着色程度，自来水冲洗使染色终止；蒸馏水清洗5 min，行苏木素复染，自来水清洗2 min；蒸馏水清洗5 min，利用1%盐酸分化1～2 s，自来水清洗2 min；蒸馏水清洗5 min，封片。

1.3 免疫组化结果判定

判定标准[10]：Gal-1主要在细胞浆中表达，若胞浆中呈棕黄色染色，则提示为阳性，经光镜对切片进行观察，利用高倍镜(×400)随机选择5个视野，分析染色强度、阳性细胞占比。以阳性细胞占比进行评分：阳性细胞占比≤20%、21%～75%、76%～90%、>90%分别计0、1、2、3分；染色程度计分：无染色、淡黄色、中度黄色、棕黄色分别计0、1、2、3分。两项分值乘积即为表达分值，分值≤4分为阴性，>4分为阳性。

1.4 随访分析

以患者术后第1天作为起始日，随访期为术后12个月。在患者出院后通过电话、微信等方式进行随访，记录生存情况，每3个月进行1次随访，本次研究无失访病例。

1.5 统计学处理

经SPSS 20.0软件行数据分析，计数资料用百分比表示，组间比较行配对χ2检验。利用Cox多元回归模型分析肺癌患者预后的危险因素，采用log-rank检验进行生存率分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基线资料分析

在130例患者中，男71例，女59例，年龄(40～74)岁，平均(60.39±12.45)岁；吸烟史：有38例，无92例；饮酒史：有34例，无96例；临床分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期51例，Ⅲ期47例；组织学分型：腺癌61例，鳞癌42例，大细胞癌27例；淋巴结转移：有49例，无81例；分化程度：低/中分化68例，高分化62例；肿瘤最大径1～6 cm，平均(3.11±1.35)cm；胸膜浸润：有31例，无99例；脉管侵犯：有35例，无95例。

2.2 肺癌组织、癌旁组织中Gal- 1表达比较

肺癌组织中Gal-1阳性表达率为48.46%(63/130)，高于癌旁组织的15.38%(20/130)(χ2=32.723，P<0.05)。Gal-1在肺癌组织中阳性表达较明显，细胞着色以黄色、棕黄色为主，而癌旁组织中无明显着色，或着色强度不深，见图1。

图1 肺癌组织、癌旁组织中Gal-1表达的免疫组化染色图 ×400

2.3 肺癌组织中Gal- 1表达与临床病理特征的关系

Gal-1阳性组临床分期Ⅲ期、淋巴结转移、脉管侵犯占比高于Gal-1阴性组(P<0.05)，见表1。

2.4 影响肺癌患者预后的Cox多因素分析

以表1中相关变量为自变量X，以预后(总生存期、无瘤生存期)为因变量Y(生存=0，死亡=1；无瘤生存=0，带瘤生存=1)进行Cox回归分析，结果显示，年龄≥60岁、临床分期Ⅲ期、淋巴结转移、胸膜浸润、脉管侵犯、Gal-1阳性表达是影响患者总生存期、无瘤生存期的危险因素(P<0.05)，见表2、3。

表1 肺癌组织中Gal-1表达与临床病理特征的关系例

表2 Gal-1表达与总生存期的关系

2.5 肺癌组织中Gal- 1表达对患者术后预后的评估分析

Gal-1阳性组术后12个月的总生存率为66.67%(42/63)，无瘤生存率为63.49%(40/63)。Gal-1阴性组术后12个月的总生存率为88.06%(59/67)，无瘤生存率为83.58%(56/67)。Gal-1阳性组术后12个月的总生存率、无瘤生存率低于Gal-1阴性组(log-rankχ2=8.574、6.785，均P<0.05)。见图2、3。

图2 肺癌患者术后12个月的累积生存曲线

3 讨论

肺癌是发病率、死亡率最高的一种恶性肿瘤，既往常通过TNM分期对患者预后进行预判，但存在较多局限，无法精准反映预后情况，即便是临床分期为Ⅰ期的患者，经手术以及辅助治疗后，仍存在复发、病灶转移的可能性，导致预后欠佳[11-12]。肿瘤侵袭、复发、转移机制非常复杂，涉及一系列多因素、多步骤的作用过程，该过程涉及较多的蛋白分子参与[13]。临床可以考虑从关键蛋白分子入手，进一步了解肺癌的进展机制。研究表明半乳凝素家族由亲和力较高的动物凝集素蛋白组成，生物功能多样，在细胞分化、生长、黏附以及RNA转运过程中有重要作用，在癌症组织中存在表达[14]。Gal-1是半乳凝素家族的成员之一，它参与了细胞之间的相互作用，将细胞凋亡途径阻断[15-16]。褚静等[17]发现，Gal-1蛋白与神经母细胞瘤的恶化过程密切相关，Gal-1沉默基因能对肿瘤细胞迁移、增殖进行抑制。本研究分析Gal-1是否参与了肺癌进展，以便寻求新的治疗靶点。

本研究结果显示肺癌组织中Gal-1阳性表达率明显高于癌旁组织。Gal-1具有调节免疫、调节炎症、抗黏附或促进黏附等作用，其在多种恶性肿瘤中呈高表达，例如乳腺癌、甲状腺癌等[18-19]。Gal-1促进肿瘤发生、进展的机制比较复杂，有学者发现，Gal-1可与癌基因H-Ras产生作用，使其信号介导过程增强，促使细胞转化成肿瘤细胞表型，它还能促进ERK、RAF1信号通路持续活化，将转录因子激活，诱导基因出现异常表达，致细胞转化成肿瘤细胞[20-21]。另有研究指出Gal-1对新生血管生成有重要作用，当其表达水平降低时能抑制肿瘤生长[22]。这提示Gal-1在肿瘤疾病中发挥了促癌作用，可致病情恶化。本研究提示Gal-1阳性表达可能与临床分期、淋巴结转移、脉管侵犯有关。张凯恋等[23]认为肿瘤新生血管生成是促进肿瘤侵袭、转移与进展的基础条件。肿瘤分期越高以及伴有淋巴结转移的患者新生血管生成越明显，Gal-1则具有促进新生血管生成的作用，可通过该机制增加肿瘤进展风险，此外，Gal-1还可将T细胞应答作用削弱，使肿瘤细胞逃逸，促进肿瘤侵袭、复发与转移。伴有脉管侵犯表明肿瘤已生长到一定程度，有远处转移征兆，这类患者通常临床分期较高，有新生血管生成。Gal-1对β半乳糖存在高度亲合性，能对细胞信号传导、细胞生存进行调节，在细胞与基质、细胞与细胞之间发挥黏附作用，参与肿瘤细胞的黏附、浸润、侵袭，增加脉管侵犯风险[24]。本研究证实Gal-1阳性表达是肺癌预后的危险因素，且肺癌组织中Gal-1表达对患者的总生存率、无瘤生存率具有一定评估价值。一方面，Gal-1可能通过与癌基因H-Ras产生协同作用，诱导Gal-1基因表达异常，促进肿瘤细胞侵袭，另一方面，Gal-1可能通过促进新生血管生成，导致肿瘤进展。这两者可能是Gal-1作用于肺癌的重要机制，也是影响预后的关键因素。吴银霞等[25]以膀胱癌患者为研究对象，发现Gal-1在癌组织中呈高表达，且能促进癌症浸润转移与进展。鉴于Gal-1在肺癌进展中发挥了重要作用，临床可考虑将下调Gal-1表达作为日后肺癌治疗的新靶点。