大午褐蛋鸡1日龄胎粪禽白血病检测关键点

代占辉，李 茜，郝 丹，王红连，郑利杰，赵晓钰

（1.河北大午农牧集团种禽有限公司 072550；2.河北省畜牧兽医研究所 071000；3.河北省畜牧兽医学会 050000）

禽白血病主要以垂直传播方式进行传播，也可水平传播，能够造成多种类型肿瘤,给家禽业带来重大经济损失。禽白血病目前没有疫苗，对其防控只能进行彻底净化。

河北大午农牧集团种禽有限公司经过多年的探索与实践，形成了蛋鸡核心育种群（纯系）的禽白血病净化程序：1日龄全群胎粪检测，6～8周龄全群血浆病毒分离，开产初期母鸡蛋清普检2枚、公鸡血浆和精液病毒分离，继代选育留种前母鸡蛋清普检2枚、公鸡血浆和精液病毒分离。而1日龄全群胎粪检测对禽白血病净化非常重要，既能评估蛋鸡核心育种群上一世代的净化进展，又能为新世代的持续净化打下良好基础，及早淘汰阳性鸡只，从根本上避免鸡群早期可能发生水平感染，因为鸡群日龄越小，禽白血病发生水平感染的几率越大[1]。

大午褐蛋鸡核心育种群由E、F、C、D四个纯系组成，每年继代

选育出雏时，需要留下母鸡12000只、公鸡2500只，因此大午褐蛋鸡核心育种群1日龄胎粪检测样品至少在24000份以上，为了保证出雏后24h内完成检测[2]，应做好以下几方面：

1 组织保障

1日龄胎粪禽白血病检测是一项系统工程，需要育种部、生产部、技术部、兽医室等多部门共同参加。育种部负责胎粪采集相关工作，包括纯系出雏记录2人、雌雄鉴别与胎粪采集1人、胎粪样品做标记2人、分发翅号与记录1人、带翅号2人，以上8人为一组，本环节需要安排五个小组（每名翻肛雌雄鉴别员要鉴别5000只雏鸡左右同时要采集胎粪）；技术部负责胎粪样品的处理工作，包括样品震荡混匀3人、样品冷冻1人、样品速溶4人、样品离心4人，样品记录2人、记录输入电脑1人、统计结果1人；兽医室负责胎粪ALVp27 抗原实验室检测工作，分成两组，每组5人；生产部负责胎粪检测的后续工作，包括阳性鸡只挑选2人、阳性鸡只记录1人。高质量完成大午褐蛋鸡1日龄胎粪禽白血病检测，需69人的齐心合作，因此做好有效的组织保障是基础。

2 胎粪的有效处理

胎粪进行禽白血病检测前，必须对胎粪进行快速冻融处理，使细胞裂解，让可能存在的禽白血病病毒从细胞中游离出来[3]，利于准确检测。

对胎粪的处理措施为“两冻、三摇、两融、一离心”，具体流程：胎粪采集→第一次震荡混匀（时间60s）→第一次冷冻（时间10s）→第一次溶解（水温37℃、时间60s）→第二次震荡混匀（时间60s）→第二次冷冻（时间10s）→第二次溶解（水温37℃、时间60s）→第三次震荡混匀（时间60s）→高速离心（转速10000rpm/m）。

3 胎粪实验室检测

离心后的胎粪送到实验室进行ALVp27抗原检测，一般流程：

样品加入反应板孵育1h→第一次洗板→加入酶标二抗孵育1h→第二次洗板，加入底物液孵育15min→加入终止液→应用酶标仪读取结果→将结果反馈到孵化室追溯阳性鸡只、予以淘汰。

特别注意不同厂家的试剂盒，检测要求不同，以A、B、C三个不同厂家为例：①胎粪检测用稀释液不同：A、B厂家稀释液为专用，C厂家稀释液为盐水或PBS；②胎粪检测孵育温度不同：A、B厂家孵育温度为常温，C厂家孵育温度为37℃；③胎粪检测用洗液不同：A厂家洗液为蒸馏水，B、C厂家洗液为浓缩液，需要稀释；④胎粪检测用酶标二抗不同：A、C厂家酶标二抗可以直接使用，B厂家酶标二抗需要配制后使用；⑤胎粪检测用底物液不同：A、B厂家底物液可以直接使用，C厂家底物液分开加入。

经过持续进行大午褐蛋鸡核心育种群1日龄胎粪检测，效果显著（见下表）。

不同年度1日龄胎粪ALVp27检测图表

4 精准追溯

每只纯系雏鸡的胎粪检测后，为做到精准追溯，也就是能够及时、准确找到阳性鸡只并予以淘汰，经过近年来不断改进1日龄胎粪检测系统工程相关方法、措施，建立了可精准追溯关键控制点：①每只留种纯系母鸡的每枚种蛋在孵化至18胚龄时转移到单个孵化纸盒，同时在纸盒上做好标记，再进行孵化出雏；21胚龄出雏后，再转移至新的单个孵化纸盒、做标记，这样从源头上就避免了可能出现的混淆，为此我们申请了一项实用新型专利（一种防止交叉感染的便于单个雏鸡检测的孵化纸盒，申请号：202121182419.5）；②选用高质量的1.5mL离心管，用于胎粪的采集，主要是离心管盖能够封闭严密、离心管壁韧性大，防止在样品处理过程中离心管盖子松动、管壁破损；③在离心管上做的标记清晰、易辨认；④使用液氮冷冻胎粪样品时，为防止装有胎粪的离心管在液氮中漂出、遗落在液氮罐里，对液氮罐配套的提筒做一个盖子（开关便捷），盖上留有若干个直径3mm小孔，便于液氮淹没提筒。

通过对大午褐蛋鸡核心育种群持续进行1日龄全群胎粪科学检测，及早淘汰阳性鸡只，避免可能的水平感染，为该品种禽白血病的彻底净化打下坚实基础，同时能够为其他家禽的净化具有借鉴意义。