痰沉渣细胞蜡块在肺癌早期诊断中的价值

潘成娜，杨小苗，怀建国

(芜湖市第一人民医院病理科，安徽 芜湖 241000)

根据国际权威组织的报告，肺癌的发病率呈现逐年上升趋势，病死率也是高居不下，严重威胁着人类的健康[1-2]。最重要的原因是大多数患者在确诊时已经是晚期，5年生存率较低，仅为10%左右[3]，如果能早发现、早诊断并行手术治疗，可将患者的5年生存率明显提高，达到50%以上[4]。目前，临床上最常用、最便捷的肺癌早期诊断技术是痰脱落细胞学涂片检查，但痰涂片中所能收集的肿瘤细胞较少，且易发生重叠、退变、血液覆盖等，导致较高的漏诊率[5]。因此，研究一种更有效且便捷的早期诊断技术对其预后有着重要的临床价值。近年来，痰沉渣细胞蜡块技术在病理科慢慢推广开来，该方法可收集到标本中的几乎全部的细胞，也能去除痰液中杂质对结果的影响，并且可以加做特殊染色及免疫组化，进一步提高了肺癌的检出率[6]，但其缺点是检查时间较长、费用高。本研究旨在将细胞蜡块技术用于痰液细胞沉渣检验中，通过分析痰沉渣细胞蜡块与痰涂片在肺癌早期诊断中检出率与准确率的差异，进而探讨痰沉渣细胞蜡块技术对肺癌早期诊断的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年1月至2019年12月本院就诊的共251例影像学检查提示肺占位的患者进行回顾性分析。其中男152例，女99例，男女比例1.54∶1；年龄31～79岁，平均(59.7±9.8)岁。对上述251例疑似肺癌患者同时进行痰涂片及痰沉渣细胞石蜡切片进行病理检查并记录结果。251例疑似患者经支气管镜活检、穿刺活检、手术病理进行确诊，最终有212例患者诊断为肺癌，39例患者诊断为肺良性疾病。

1.2标本的收集 临床医生指导患者晨起吐掉第一口痰并漱口，再用力咳出深处的痰液，收集于病理科专门的无菌容器中，每例患者取2份，每份痰量3～5 mL，1 h内送至病理科，连送3 d。

1.3标本的制作

1.3.1痰涂片法 随机取患者痰液中的1份，选取标本中带有血丝、脓样物或丝状物的痰液涂于载玻片上，自然风干后再用95%乙醇固定，时间15～30 min，再行苏木精-伊红(HE)染色及中性树胶封片。

1.3.2痰沉渣细胞石蜡切片法 取患者另一份送检痰液，向其中加入0.3～0.5 mL的二硫苏糖醇，充分混合后置于振荡器上振荡10 min，将液体倒入离心管中，以3 000 r/min离心10 min，弃去上清液后加入细胞清洗剂，再次以3 000 r/min离心10 min，弃去上清液后加入10%中性福尔马林溶液20 mL，固定1 h后再次以上述方法离心10 min，加入95%乙醇再次离心，静置1 h后去除上清液，取细胞块置于包埋纸中依次置于75%、85%、95%、100%乙醇中行脱水处理，二甲苯处理45 min，应用液体石蜡浸透后包埋成蜡块，4 μm连续切片，切片置于85 ℃烤箱中烤片20 min，脱蜡后再进行HE染色及中性树胶封片。

1.4细胞学诊断 将涂片与切片扫描后采用双盲法进行读片，读片医师由2位以上高年资病理诊断医师组成，采用3级分类诊断法将诊断结果分为阳性、可疑、阴性。同一患者的3次标本中若有1次以上为阳性则诊断为阳性，若3次均为可疑也划入阳性组。

1.5统计学处理 运用SPSS17.0统计学软件对数据结果进行分析，计数资料以率或构成比表示，进行χ2检验，计算两种诊断方法的Youden指数，并运用ROC曲线评价2种方法对初诊肺癌的诊断价值，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1两种诊断方法的诊断结果 251例患者的组织病理学诊断结果与痰涂片及痰沉渣细胞蜡块法诊断结果见表1、图1～2。

表1 痰涂片和痰沉渣细胞蜡块切片诊断结果

图1 痰涂片(HE染色，10×)

图2 痰细胞蜡块(HE染色，10×)

2.2两种诊断方法的诊断价值对比 痰沉渣细胞蜡块切片的灵敏度(93.40%)、准确度(94.02%)、阳性预测值(99.50%)、阴性预测值(73.08%)均明显高于痰涂片的33.96%、43.03%、96.00%、20.45%，差异有统计学意义(P<0.05)；两者的特异度分别为97.44%、92.31%，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 两种诊断方法对肺癌的诊断价值(%)

2.3涂片与切片的ROC曲线分析 痰涂片诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣细胞蜡块诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.954(95%CI0.919～0.989)，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。

3 讨 论

肺癌有着较高的发病率与病死率，严重危害人类生命和健康[7]。早诊断、早治疗可明显延长肺癌的生存期，对降低其病死率有着重要的意义，但早期肺癌缺乏特异性临床表现，给确诊带来了困难，目前低剂量CT、肿瘤标志物、痰涂片是早期筛查肺癌的主要方法[8]，但肺癌的确诊仍然要依靠病理技术。病理学细胞蜡块技术已经开展数十年，是肿瘤诊断的“金标准”，在细胞学领域也有着较高的地位，但目前开展痰液细胞蜡块技术的医院少之又少。本研究对痰涂片与痰沉渣细胞蜡块切片在肺癌诊断的临床价值进行了对比。

据文献报道，连续3次痰涂片检查对周围型肺癌的诊断率为50%，对中央型肺癌的诊断率高达80%[9-10]，但本研究中Youden指数仅为26.27%，总结原因为在标本收集、处理过程、制作过程中易受到外界因素影响，会出现黏液成分过多、癌细胞未被涂片、坏死物较多、厚薄不均、癌细胞未经固定处理而变性、其他杂质掩盖癌细胞从而影响检测阳性率[6，11]。痰沉渣细胞蜡块技术可很好地弥补痰涂片的相关不足，对标本的采集、制片、染色等阶段进行改进，使得病变细胞的收集率、诊断的阳性率、准确率均得到了显著地提高，国内外也有类似的文献报道[12-13]。本研究中痰沉渣细胞蜡块切片诊断肺癌的准确度、灵敏度分别为94.02%、93.40%，显著高于痰涂片的43.03%、33.96%。此外，本研究分析了两种技术的ROC曲线，痰涂片诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.631(95%CI0.548～0.715)，痰沉渣细胞蜡块诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.954(95%CI0.919～0.989)，不难看出痰沉渣细胞蜡块法在肺癌早期诊断的效能较痰涂片法明显提升。

痰液细胞蜡块是在普通细胞学技术的基础上，把痰液中有形细胞成分通过离心浓缩制作成蜡块，可以进一步行HE染色，镜下细胞比较集中，类似于组织切片且背景干净，易于读片，且可以连续切片进行免疫组化染色及其他特殊检查等，以微小的创伤代价获得较明确的病理诊断，对于那些难以取得活检组织及复发的中晚期肿瘤患者优点更为突出[14]。与传统痰涂片相比，能明显提高肺癌的检出率，并能对肺癌进行进一步的定性分类及分子水平检测，优点为无明显禁忌证及不良反应，诊断费用低，为临床开展微创性诊疗技术提供最权威的病理诊断保证。在董志广[15]、HEYMANN 等[16]的研究中表明细胞蜡块切片检查与免疫组化染色联合诊断恶性肿瘤的最佳组合，说明细胞蜡块切片比细胞涂片有较大的诊断优势。

痰液标本易于收集，有着无创、对标本量要求不高的特点，为制作蜡块提供了坚实的现实基础。痰沉渣细胞蜡块技术在肺癌的早期诊断中有着较高的灵敏度、准确度及较高的诊断效能，随着肺癌治疗方式的不断更新，痰沉渣细胞蜡块可为后期进行特殊染色、基因检测提供可行性，随着病理技术的不断进展，肺癌的治疗方式也呈现出多元化，为肺癌患者在不断进步的医疗进程中增加生存机会，为肺癌的防治奠定了坚实的基础，是值得推广的技术之一。