上海地区白细胞分类计数项目分析性能规范探索

缪颖波， 宋 颖， 赵 强， 诸佩超， 周 维， 王 青， 徐 翀

（上海市临床检验中心临床血液体液学研究室，上海 200126）

在检验医学领域，如何设定分析性能规范（简称性能规范）备受关注。设定性能规范的研究主要是针对定量测定项目，以数值形式表达的性能规范可以和室间质量评价及室内质量控制数据反映出的分析性能进行比较。2014年，欧洲临床化学和检验医学联合会（European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，EFLM）等机构在意大利米兰召开会议[1]，推荐基于临床需求、生物学变异或当前技术水平[2]设定性能规范。上海市临床检验中心自2015年起开始组织白细胞分类计数能力验证活动，因白细胞分类计数项目无明确的性能规范，故以美国临床实验室改进修正法规（the Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988 ，CLIA′88）推荐的靶值±3s为标准。本研究旨在探索适用于上海地区白细胞分类计数项目的性能规范，以进一步指导医学实验室科学、合理地进行白细胞分类计数项目的室内质量控制、性能验证和实验室管理，不断提高检验质量。

1 材料和方法

1.1 数据来源

收集2015—2020年上海市临床检验中心12次共60批次白细胞分类计数能力验证活动数据，包括中性粒细胞计数、嗜酸性粒细胞计数、嗜碱性粒细胞计数、淋巴细胞计数、单核细胞计数5个绝对值计数项目。白细胞分类计数项目能力验证物品均购自美国R&D公司。

1.2 方法

依据西班牙临床化学和分子病理学协会汇总全球各地健康人群检验项目个体内、个体间生物学变异数据库[3]，通过公式[4]计算出最佳、最适宜和最低性能规范。以2015—2020年上海市临床检验中心各年能力验证活动每个批次所有实验室回报数据“百分差值”的P10～P90计算该批次80%的“百分差值”的分布区间[5]，不同批次回报数据均取最大值。区间计算公式为：（P10，P90）=（中位数-TEa%当前，中位数+TEa%当前），即TEa%当前=1/2（P10，P90），式中TEa为允许总误差（allowable total error）。比较每次能力验证活动每个项目5个不同浓度水平样品能力验证结果基于生物学变异和基于当前技术水平设定的4种性能规范的最低通过率。各项目基于生物学变异和基于当前技术水平设定的性能规范见表1。

表1 各项目基于生物学变异和基于当前技术水平设定的性能规范 %

1.3 统计学方法

采用上海市临床检验中心室间质量评价评分系统和Medcalc 19.1软件进行统计分析。

2 结果

2.1 基于生物学变异导出的性能规范项目

2015—2020 年每年2次的白细胞分类计数能力验证活动回报结果中，中性粒细胞计数、嗜酸性粒细胞计数和嗜碱性粒细胞计数3个项目每次能力验证活动5个不同浓度水平样品能力验证结果基于生物学变异导出的最佳性能规范的最低通过率分别为80.3%、80.0%和80.5%。淋巴细胞计数项目所有批次基于生物学变异导出的最佳、适宜和最低性能规范的最低通过率分别为17.6%、36.2%和80.1%。

2.2 基于当前技术水平导出的性能规范项目

单核细胞计数项目所有批次基于生物学变异导出的最佳、适宜和最低性能规范的最低通过率分别为2.6%、13.9%和19.1%，而基于当前技术水平导出的性能规范最低通过率为81.2%。

3 讨论

在靶值±3s的可接受限规则下，离散程度越大，控制限就越宽；离散程度越小，控制限就越窄。若结果超出极窄的控制限，就会被评判为不合格；而在较大的控制限内，却可评判为合格。故不能客观、准确地评价参评实验室的检测水平。中国合格评定国家认可委员会建议能力验证或室间质量评价项目评价界限以固定百分比或数值作为可接受限[6]。相较于靶值±3s的可接受限规则，这个建议可以提供给医学实验室一个明确的、方便使用的性能规范，且可避免因传统s倍数评价方式中s的不同而导致的同一项目不同浓度水平能力验证结果的评价标准不同。

目前，我国尚未建立基于我国人群的生物学变异数据库，因此本研究利用国外学者基于全球健康人群建立的研究数据[3]导出相关标准（表1）。

本研究结果显示，2015—2020年上海地区白细胞分类计数能力验证活动中，中性粒细胞计数、嗜酸性粒细胞计数和嗜碱性粒细胞计数3个项目可达到基于生物学变异导出的最佳性能规范。可能与中性粒细胞计数是白细胞分类计数项目中数值最高、计数重复性高的项目有关；嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞虽然在白细胞中的含量较低，但由于细胞质中含有特殊颗粒，采用阻抗法、激光散射法和荧光染色法检测[7]可清晰辨别。本研究淋巴细胞计数项目只能达到最低性能规范，可能是其与单核细胞计数项目在采用荧光染色法检测时，侧向荧光和散色光散点图表现近似等有关[8-10]。另外，由于单核细胞计数项目在低浓度水平（＜1.0×109/L）时数值极低，基于当前技术水平导出的性能规范以百分数表示可能达到200%，如浓度为0.02×109/L时，TEa%当前为225%；浓度为0.1×109/L时，TEa%当前为75%，故采用CLIA′88推荐的低浓度检测项目以绝对值表示可接受限[11]。分析原因可能与目前无法对血液分析仪的分类计数结果进行常规校准有关，也可能与目前分类计数质控品是采用人红细胞添加其他物质组成的混悬液，且添加的数量较少，导致每次检测结果差异较大有关。

本研究建立的白细胞分类计数项目的性能规范可应用于室间质量评价（能力验证）结果的分析，医学实验室也可以将其作为白细胞分类计数项目的质量目标，评价该项目的实验室不精密度和偏移，计算西格玛值，选择合适的质控规则。整体质量较高的医学实验室也可以选择基于生物学变异导出的适宜或最佳性能规范作为质量目标。能力验证计划的质量目标不一定与医学实验室质量目标相一致。能力验证的要求是以监管为主，以大多数实验室通过为标准，但作为不同质量水平的医学实验室在达到此要求的同时，可设定更高的要求，以帮助其提高检测水平或判断哪种检测系统更为优秀（性能验证或方法学确认）。作为监管部门的临床检验中心，可将不同水平的可接受限用于不同场景，如在能力验证活动中，可使用范围较大的可接受限，以保证医学实验室达到基本要求；在正确度验证活动中，可使用范围较小的可接受限，以提高各检测系统的一致性。

综上所述，基于生物学变异导出的最佳性能规范和最低性能规范分别适用于上海地区临床实验室白细胞分类计数中中性粒细胞计数、嗜酸性粒细胞计数、嗜碱性粒细胞计数和淋巴细胞计数4个项目能力验证结果评价；而基于当前技术水平导出的性能规范适用于单核细胞计数项目的能力验证结果评价。这一标准可为医学实验室制定量化的质量目标提供依据，从而持续提高白细胞分类计数项目的检测水平。