乳粉中泛酸检测

2022-01-05方芳

食品安全导刊 2021年32期

方芳

（爱优诺营养品有限公司，江西九江 332000）

泛酸也称作维生素B5、遍多酸，是人体必需的13 种维生素之一，是一种水溶性维生素，其性质偏酸性并广泛存于多种食物中，故而得名[1]。其功能是在体内转变成辅酶A 或酰基载体蛋白的形式参与能量代谢和一些生物合成[2]。《食品安全国家标准食品中泛酸的测定》（GB 5009.210—2016）[3]中泛酸的测定，其中将微生物法作为泛酸检测的第一法，微生物法由于具有较高灵敏度和可靠性得到国际权威机构的认可。本研究中采用第二法-高效液相色谱法，同时参考AOAC[4]的方法，使用泛酸检测试剂盒[5]进行婴幼儿配方乳粉及原料中泛酸的测定，分析婴幼儿配方羊奶粉及原料的检测数据，并考察原料与成品之间的关联性。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

泛酸试剂盒；泛酸钙标准品；盐酸（AR）；磷酸（AR）；磷酸二氢钾（AR）；七水合硫酸锌（AR）；乙腈（HPLC）；一级水。

1.2 仪器设备

培养箱（37±1）℃；恒温水浴锅；酶标仪（620 nm）；超净工作台；微量可调移液器；LC-20AT 高效液相色谱仪（配SPD 检测器）；BSA224S 分析天平（感量0.1 mg）；PHS-3C 雷磁pH 计；QYYS-10A 纯水仪；TG16-WS 离心机；KQ5200DB 超声波清洗器。

1.3 试验方法

1.3.1 液相法

液相色谱法的参数如下。色谱柱：C18色谱柱（Welch，粒径5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：0.02 mol/L 磷酸二氢钾溶液+乙腈=95+5；流速：1.0 mL/min；紫外检测波长：210 nm；柱温：（28 ±0.5）℃；进样量：10 µL。

准确称取适量试样，精确至0.001 g，一般固体试样约5 g，置于100 mL 锥形瓶中，加入40～50 ℃温水至30 mL。直接超声提取20 min。取出试样液，冷却至室温，用0.1 mol/L 盐酸调节pH 值至5.0±0.1，加入5 mL 0.5 mol/L 硫酸锌溶液，充分混合。转入50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度并充分混匀后，转入离心管3 000 r/min 离心5～10 min，取上清液过0.45 µm 滤膜，滤液待上机测定。

1.3.2 微生物法

称取1 g（精确至0.000 1 g）均质样品至50 mL 无菌离心管中，加入约30 mL 无菌蒸馏水，摇匀，加蒸馏水至40 mL。在95 ℃水浴中提取30 min，期间振荡至少5 次，确保离心管紧闭。迅速冷却至30 ℃以下。然后离心（转速≥8 000 r/min），根据样品标示浓度对样品进行稀释。

取出需要数量的微孔板条并在板架上固定，移取150 µL 培养基至微孔中，然后移取150 µL 标准品或稀释的样品至指定的微孔中。取出粘合箔并除去上面的保护层，将其平放在微孔板条上，用手将粘合箔平压，使其充分封闭微孔板条。在（37±1）℃黑暗条件下孵育20～24 h。将微孔板旋涡混匀，用酶标仪于波长620 nm 条件下读取浊度。使用软件RIDA SOFT Win_NET Version1.98 进行计算（4P 法）。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的建立

由图1、图2 可知，泛酸微生物法标准曲线的相关系数为0.999 5，满足《实验室质量控制规范食品理化检测》（GB/T 27404—2008）附录F F.2 校准曲线不低于0.99 的要求，线性良好。高效液相色谱法相关系数r=0.999 9，表明在1.0～32.0 µg/mL 范围内，无基质干扰法线性良好。

图1 泛酸微生物法标准曲线

图2 泛酸高效液相色谱法标准曲线

2.2 重复性与回收率

取同一批样品，按1.3.2 项下方法制备6 批待测样品进行重复性试验，同时进行低、中、高3 种浓度的加标回收率试验，结果见表1、表2。由表1 和表2可知，测得样品中泛酸平均含量为3 303 µg/100 g，RSD为0.5%，回收率在93.9%～101.9%，平均回收率为98.2%，回收率较高，相对标准偏差较小，重复性较好，此方法适用性较好。

表1 重复性试验结果

表2 回收率试验结果

2.3 液相色谱法与微生物法数据比对

2.3.1 配方羊奶粉数据统计

取配方羊奶粉样品，分别按1.3.1、1.3.2 项方法制备6 批待测样品进行重复性试验，高效液相色谱法、微生物法两种方法的检测数值的标准偏差、RSD值、CV值统计结果如表3 所示。由表3可知，婴幼儿配方羊奶粉的微生物法与高效液相色谱法数值相比，计算CV值均超出10%，存在明显差异。

表3 婴幼儿配方羊奶粉泛酸的统计数值

2.3.2 羊乳清粉数据统计

选取羊乳清粉，分别按1.3.1、1.3.2 项方法制备6 批待测样品进行重复性试验，将高效液相色谱法、微生物法两种方法的检测数值进行汇总比较。标准偏差、RSD值、CV值统计结果如表4 所示。由表4可知，高油脱盐羊乳清粉的高效液相色谱法数值与微生物法数值相比，计算CV值在均超出10%，存在明显的差异。