CDX2、HNF4α、SOX2蛋白联合检测对幽门螺杆菌感染相关高危胃癌的诊断价值

吴 丹， 曹 司， 黄 坤

(1.首都医科大学电力教学医院消化内科，北京市100073；2.民航总医院消化内科，北京市100123)

胃癌发病率呈逐年攀升的趋势[1]。幽门螺杆菌(helicobacter pylori，Hp)感染是导致胃黏膜上皮细胞炎性浸润的主要原因之一，胃部长期Hp定植能够诱导浅表性胃炎，引发萎缩性胃炎[2]。而萎缩性胃炎患者胃黏膜处于高危癌前病变阶段，如未采取有效措施进行干预，可能进入非典型增生期，最终导致胃癌发生[3]。Hp感染可能对机体多条肿瘤相关信号通路起到促进作用，并与宿主部分蛋白表达关系密切[4]。尾侧型同源转录因子2(caudal type homeobox transcription factor 2，CDX2)对胃癌及癌前病变具有一定指示作用[5]。肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α，HNF4a)对维持胃肠表型具有积极作用[6]。性别决定相关基因簇2(sex determining region Y-box 2，SOX2)在胚胎发育及恶性肿瘤的发生发展中扮演着重要角色[7]。本文探讨CDX2、HNF4a及SOX2蛋白对Hp感染相关高危胃癌的诊断效能，现报道如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2017年6月—2019年6月本院收治的87例胃癌患者(胃癌组)及136例萎缩性胃炎患者(胃炎组)为研究对象。胃癌组患者均为腺癌，其中男47例，女40例，年龄45～80岁，平均(61.17±10.88)岁；胃炎组男79例，女57例，年龄44～78岁，平均(60.44±11.15)岁；两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准，患者自愿参加并签署知情同意书。

1.2 病例选择标准

入组标准：①经过胃镜活检及术后组织病理确诊的胃癌或萎缩性胃炎患者；②年龄18～80岁；③临床资料完整。排除标准：①既往接受胃部手术者；②合并其他恶性肿瘤者；③合并其他消化系统疾病者；④接受过抗Hp治疗者；⑤服用非甾体抗炎药物者；⑥哺乳期、妊娠期妇女。

1.3 主要仪器及试剂

兔抗人CDX2单克隆抗体(货号：abx358005)购自北京博蕾德生物科技有限公司；兔抗人HNF4α单克隆抗体(货号：3121-100)购自艾美捷科技有限公司；兔抗人SOX2单克隆抗体(货号：abx031506)购自北京柏奥易思生物科技有限公司。通用型二步法检测试剂盒(PV-6000)购自北京欣兴唐生物科技有限公司；DAB显色试剂盒(货号：AR1022)购自武汉博士德生物工程有限公司。CDX2、HNF4α、SOX2阳性对照为已知染色阳性的胃癌/萎缩性胃炎组织切片，以PBS代替一抗为阴性对照。

1.4 免疫组化法测定CDX2、HNF4α、SOX2蛋白阳性表达

将手术切除的胃癌/萎缩性胃炎组织制备石蜡标本，制备成4 μm的组织切片；依次进行脱蜡、脱水、灭活内源性过氧化物酶、胰蛋白酶抗修复液修复；采用胎牛血清封闭30 min，加入一抗兔抗人单克隆抗体(1∶150)于4 ℃条件下孵育过夜；于次日复温后，加入标记生物素的通用性二抗PV-6000(1∶5 000)，于室温条件下孵育30 min，显色、充分冲洗后，采用苏木精染色、脱水、透明、中性树胶封固。结果判定：CDX2、HNF4α、SOX2阳性表达均为细胞核内出现棕黄色颗粒。染色强度：无着色记0分，浅黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分。阳性细胞计数：0%～5%记0分，5%～25%记1分，25%～50%记2分，50%～75%记3分，≥75%记4分。参照参考文献[8]以染色强度、阳性细胞比例乘积为判定标准：0分为阴性；1～3分为弱阳性，4～6分为中度阳性，7～9分为强阳性。

1.5 13C-尿素呼气试验检测Hp感染

患者空腹≥6 h，口服13C标记的尿素，搜集患者呼气100 mL，将待测气体与13C红外线能谱仪(德国，格纳分析技术有限公司)检测孔连接，仪器自动检测生成报告，以DOB≥2.5为Hp阳性(即Hp感染)[9]。

1.6 统计学分析

2 结 果

2.1 两组CDX2、HNF4α、SOX2蛋白阳性表达的比较

胃癌组CDX2、SOX2阳性表达率低于胃炎组(P<0.05)，HNF4α阳性表达率高于胃炎组(P<0.05；表1)。免疫组化结果显示：CDX2、HNF4α、SOX2蛋白均定位于细胞核，其强阳性表达见图1。

表1 两组CDX2、HNF4α、SOX2蛋白阳性表达的比较 单位：例(%)

图1 两组CDX2、HNF4α、SOX2蛋白免疫组化结果(SP，400×)

2.2 两组不同Hp感染状况CDX2、HNF4α、SOX2蛋白阳性表达的比较

胃癌组Hp阳性率(78.16%)高于胃炎组(38.97%；P<0.05)。

两组Hp阳性者CDX2及HNF4α阳性表达率均高于Hp阴性者(P<0.05)，SOX2阳性表达率均低于Hp阴性者(P<0.05；表2)。

表2 两组不同Hp感染状况CDX2、HNF4α、SOX2蛋白阳性表达的比较 单位：例(%)

2.3 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表达及其联合对Hp相关高危胃癌的诊断效能

以染色评分为变量绘制ROC曲线，各指标的AUC分别为0.781、0.829、0.788，三者联合的灵敏度最高(表3、图2)。

表3 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白表达及其联合对Hp相关高危胃癌的诊断效能

图2 CDX2、HNF4α、SOX2蛋白诊断Hp相关高危胃癌的ROC曲线

3 讨 论

胃癌患者发病初期缺乏典型症状，首次确诊时通常已进展为中晚期，预后欠佳，因此早期诊断尤为重要[10]。CDX2是一种与尾侧相关的同源盒转录因子，参与正常和异常部位的肠道分化，Saito等[11]指出，CDX2的调节可能通过miR-181b参与IL-6/STAT3信号通路，进而参与microRNA相关的炎症癌变过程。SOX2通过调节PTEN抑制胃癌细胞增殖和转移，与CDX2之间存在相反的表达模式[12]。HNF4a作为消化道早期发育的关键因子之一，被认为与肿瘤细胞侵袭、转移和上皮间质转化相关，可作为早期胃癌的潜在治疗靶点[13]。本文胃癌组CDX2及SOX2阳性表达率低于胃炎组、HNF4α阳性表达率高于胃炎组(均P<0.05)，提示上述三种蛋白参与了萎缩性胃炎向胃癌进展的过程。

除遗传因素以外，胃癌的发生还受吸烟、饮酒、不良饮食、缺乏体力活动、病毒感染和压力增加等非遗传因素的影响[14]。Hp感染在胃癌中的作用已被证实[15]。本文胃癌患者Hp阳性率高于萎缩性胃炎患者，与罗伟等[16]结果一致。胃癌患者Hp阳性组织中CDX2及HNF4α阳性表达率高于Hp阴性者，SOX2阳性表达率低于Hp阴性者(P<0.05)，原因可能包括以下方面：①Hp强毒性基因型可能通过对核因子-κB等信号途径进行激活，以影响CDX2表达水平，促进癌前病变或胃癌发生；②HNF4α可能通过对Hp感染所引起的炎症反应进一步放大，从而发挥促癌作用；③当机体发生Hp感染后引起的炎症反应可能导致炎症因子释放量增加，进而诱发SOX2甲基化，最终下调SOX2表达水平。杨琴等[8]指出，相较于Hp阴性胃癌患者，Hp感染者具有更高的CDX2及HNF4α阳性表达率；沈玲等[17]发现，Hp感染的胃癌患者癌组织中SOX2阳性表达率明显低于Hp阴性者，与本研究结果一致。本文CDX2、HNF4α、SOX2染色评分用于诊断Hp相关高危胃癌均具有较高的灵敏度及特异度，且三者联合灵敏度更高，提示临床中上述3种蛋白的联合检测作为Hp相关高危胃癌的辅助诊断，对胃癌的防治具有积极意义。

胃癌组织中CDX2、HNF4α、SOX2蛋白对Hp相关高危胃癌具有较高的诊断效能，且三者联合可进一步提高灵敏度。