VITEK2Compact微生物自动鉴定仪对布鲁氏菌误鉴定的原因及局限性

梅小燕　黄静　温小云

[中图分类号]R446.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）19-0205-02

布鲁菌病（Brucellosis）是由布鲁菌Bru.ceZ入侵人体所诱发的一种多宿主感染的世界性人兽共患传染病，常见与人类共同感染的动物类别包括牛、羊、猪等，其中，我国以羊感染为主。随着布鲁菌病人畜感染疫情在世界范围内发生率的提高，对于该疾病的检测和控制也逐渐引起了广泛的关注。国家疾病监测系统的病例统计结果证实，我国人与人之间布鲁菌病传染病例有增加趋势，其中以内蒙古、东北和西北等地区流行趋势最为严重，部分其他区域的布鲁菌病报告病例也有所增加，同时，布鲁菌病的临床表现负责程度较高，临床特征复杂多变，且病情轻重不一，会对感染主体多个系统造成直接的损害。总体来看，特征性布鲁菌病病例已经较为少见，因而该疾病的临床诊断难度也逐渐增加，早期确诊可能性逐渐降低。现阶段，布鲁菌病的防控形势逐渐严峻，以往的布鲁菌或生物型鉴定的主要基础是单项特异性血清（A、M和R血清）凝集试验、碱性复红染料抑菌试验、噬菌体裂解、HS、CO的生长要求等，这也是布鲁菌病鉴定诊断的金标准，但这些检验方法操作时间较长且较为复杂。随着PCR检测方法应用率的提高，其在BCSP31属基因与AMOS种/型基因检测中的应用率也有所提升，但过程较为复杂，容易受到操作条件的限制，因而应用价值较低。本研究对VITEK2Compact微生物自动鉴定仪对布鲁氏菌误鉴定的原因及局限性进行了分析。

1资料和方法

1.1菌株来源 本研究回顾分析2例无确切原因体温异常升高患者的临床资料，对其实施血培养菌株分离检查。

1.2仪器与试剂 检查设备：BD9240血培养仪和血培养瓶;480PCR扩增仪;VITEK2 Compact微生物鉴定仪;GN鉴定卡和试剂盒;TakaRa 16S rRNA Bacterial Identification PCR Kit 16S rRNA试剂盒。

1.3菌株分离鉴定 血培养检测结果为阳性的标本置于5%羊血琼脂平板上，通过恒温箱进行处理，动态监测其菌落生长形态和进度，通过革兰染色法用VITEK2 Compact微生物鉴定仪上机鉴定。

1.416SrRNA检测和测序 按流程实施16Sr RNA基因扩增，并对结果实施测序处理。

1.5统计学分析 文中数据借助版本为SPSS 22.0的软件包进行统计分析。

2结果

2.1菌株2次重复鉴定过程和结果比较 16SrRNA检测数据与细菌鉴定结果有所不同，完成首次菌株检测后可再次实施微生物检测和GN鉴定。数据差异比较无统计学意义（P>0.05）。如表1所示。

2.2菌株样本检测指标结果比较 对菌株样本分别使用国产机复合RBT、SAT和MRT抗原进行检测，检测结果符合率差异存在统计学意义（P<0.05）。如表2所示。

3讨论

布鲁菌病是一种牧区临床常见疾病类型，且广大城市和农村地区，该疾病的发生率也呈现出上升趋势，布鲁菌病的临床表现极为复杂，常见特征表现为间断性发热，而其他明显症状和特征则较为少见，因而临床上容易与其他发热特征疾病相混淆，只有在患者感染标本中确定分理处布鲁菌后才可以确诊，而疾病的误诊和漏诊也会给患者造成严重的不良后果。临床上针对于布鲁菌病，除了结合发热症状进行诊断外，还会实施骨髓、血液、脑脊液、乳汁、尿液等检查。从以往的临床研究结果来看，针对于布鲁菌病常见的误鉴定原因在于：血培养分离冻存传代菌株以及原代培养细菌生长速度等特性的差异，造成部分生化反应速度差异，最终造成误鉴定的结果，2次生化结果阳性数量存在差异能够为这一判断结果提供支持，另一方面，VITEK2鉴定仪GN卡使用的样品量较少，因而容易影响结果和加样读数。更加值得关注的是，自动细菌鉴定仪无法在固定的时间获得检验结果，这也是结果出现差异的一项主要影响因素，只要已检测到的生化反应组合模式与数据库中某种细菌编码一致就会自动终止鉴定，获得监测结果，对于生长较为缓慢及生化反应模式相近的的细菌种类，误鉴定概率较高。

医学报道证实，約有25%的实验室获得性细菌性感染是由布鲁氏菌所导致的，布鲁氏菌能够经气溶胶途径的感染剂量为10～100个蔺体。从以往的病例分析资料来看，未戴手套、口罩等不当操作是导致布鲁菌感染的主要原因，尽管布鲁菌病感染的具体作用机制尚未得到明确的分析，但从以往的研究结果来看，布鲁氏菌的培养等操作应按照3级生物安全实验操作的标志开展，首先对于疑似布鲁菌病的患者，需要严格执行这些操作规范，但是，从实际的临床运行结果来看，全部的布鲁菌病感染源都在于关节病变患者的培养物，外科医生只有在患者的关节修复手术过程中，确定存在关节腔内感染，并实施临床标本培养检查，才能够确定出类似革兰阴性菌的布鲁菌。以往的布鲁菌病患者的微生物实验室检验结果均为被动检验，因而临床上通常建议逐步完善细菌鉴系统生产厂家的系统数据库，在细菌鉴定过程中，对于人苍白杆菌、解脲寡源杆菌、苯丙酮酸莫拉菌、支气管败血鲍特菌、动物溃疡伯格菌、莫拉菌属或流感嗜血什菌生物等部分菌种做出系统完善的报道，并在鉴定仪器系统中提示需与行鲁氏菌鉴别，同时，在实施微生物实验室检验过程中，检验人员需要采取更加安全有效的防护措施，以降低布鲁氏菌感染所致的实验室获得性感染问题。

VITEK2 Compact微生物自动鉴定仪对布鲁氏菌误鉴定错误的原因分析：两次鉴定数据结果证实，检验鉴定为马耳他布鲁氏菌中，仅有1例出现阳性生化反应，共表现出9种生化反应，而这也是两次进行流程和方法完全相同鉴定为布鲁氏菌实验，但最红阳性反应项目数量不相同的主要原因。Panagopoulos（加拿大）等人对四年中收治的4例蒙特利尔儿童进行了血培养霍氏鲍特菌分离实验，结果亨氏，API20E、NE检验准确性不足，VITEK2 Compact微生物检测结果可以确定为洛菲不动杆菌。临床研究对VITEK2 CompactGN鉴定卡对1株玫瑰假单胞菌反复进行3次鉴定，结果证实，皮氏罗尔斯顿菌、支气管炎鲍特菌等低鉴定度细菌。本研究结果说明鉴定结果存在一定的误差，其原因在于：冻存传代菌株和血培养分离原代培养细菌生长速度不同，造成鉴定结果的差异。另一方面，VITEK2 Compact微生物自动鉴定仪以及GN鉴定卡所涉及的样品数量相对较少，因而样本和结果的读数也会会受到直接的影响。

综上所述，VITEK2Compact微生物自动鉴定仪对于布鲁氏菌鉴定存在一定的误鉴定风险，需要对相关影响因素进行控制，提高检测准确性。