足跟血干血斑毛细管电泳技术在新生儿期静止型α-珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的应用价值

王瑾琳

河南省人民医院/郑州大学人民医院检验科，河南郑州 450000

α-珠蛋白生成障碍性贫血(以下简称“地贫”)为最常见的常染色体隐性遗传病之一。其致病机制是α-珠蛋白基因缺失或非缺失突变，造成α-珠蛋白链合成受到抑制，引发遗传性溶血性贫血[1-2]。α-地贫在地中海和东南亚发病率较高，我国发病人群多集中在南方地区[3]。α-地贫若未被及时发现、治疗，随着病情进展，后期可引发较严重的慢性溶血性贫血，继发溶血危象、骨骼变化、生长发育障碍、重度贫血等，最终患者只能通过输血以维持生命[4]。因此，及时、有效的诊断对α-地贫患者的预后尤为重要。新生儿期，患儿血液血红蛋白(Hb) Bart′s水平为α-地贫筛查的敏感指标[5]。鉴于此，本研究将足跟血干血斑毛细管电泳检测用于新生儿期α-地贫筛查，以探讨其应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2018年5月至2021年2月于本院治疗的182例静止型α-地贫患儿临床资料。纳入研究的患儿：男99例，女83例；出生时胎龄37～42周，平均(39.68±1.02)周。纳入标准：(1)新生儿出生后3～5 d内有采集足跟血进行检测；(2)家属对本研究知情，并签署知情同意书；(3)血斑直径>8 mm且有良好渗透性。排除标准：(1)伴有其他血液疾病；(2)有免疫功能障碍；(3)合并传染性疾病。

1.2方法

1.2.1足跟血血斑标本采集 采集新生儿出生3～5 d时的足跟内或外侧血，血液滴于采血滤纸上，注意每个血斑要求大于8 mm，均由正面渗透至背面，共采集3个血斑。晾干后置入塑料袋内，放入4 ℃冰箱密封保存。将标本送至筛查中心进行检测。

1.2.2干血斑毛细管电泳技术 采用全自动干血片毛细管电泳仪(型号：Capillarys 2 Neeonat FAST)以及配套电泳试剂盒开展检测工作；采用专用打孔钳取直径3.8 mm血斑标本置入样品孔中，每孔加50 μL蒸馏水，置于4 ℃冰箱存放2～72 h；进行血红蛋白(Hb)电泳，测定Hb各成分的水平。

1.3观察指标 (1)分析新生儿期静止型α-地贫筛查的检出率。(2)分析新生儿期各种静止型α-地贫患儿Hb Bart′s水平。

1.4统计学处理 采用SPSS22.0统计软件对数据进行分析；经正态性检验，Hb Bart′s水平呈偏态分布，计量资料用[M(P25，P75)]表示，多组间比较采用多个独立样本非参数检验(Kruskal-Wallis检验)，并进行各组间两两比较；计数资料以百分率表示，率的比较采用χ2检验并进行两两比较；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1静止型α-地贫筛查的检出率 新生儿期静止型α-地贫检出率为58.24%(106/182)。5种静止型α-地贫中：αWSα/αα型的检出率为0.00%；-α3.7α/αα型的检出率为38.71%(24/62)；-α4.2α/αα型的检出率为44.00%(11/25)；αQSα/αα型的检出率为80.00%(8/10)；αCSα/αα型的检出率为95.45%(63/66)，其检出率最高。

2.2新生儿期4种静止型α-地贫患儿的Hb Bart′s水平 -α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型患儿Hb Bart′s水平分别为0.30(0.30，0.40)%、0.36(0.30，0.49)%、0.89(0.68，1.11)%、0.63(0.47，0.78)%。以上4种静止型α-地贫患儿的Hb Bart′s水平比较差异有统计学意义(H=71.29，P<0.001)。两两比较：αCSα/αα型患儿Hb Bart′s水平高于αQSα/αα、-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患儿；αQSα/αα型患儿Hb Bart′s水平高于-α4.2α/αα、-α3.7α/αα型患儿(P<0.05)；-α4.2α/αα型患儿Hb Bart′s水平与-α3.7α/αα型患儿比较差异无统计学意义(P>0.05)。新生儿期4种静止型α-地贫患儿Hb Bart′s水平分布见表1。

表1 新生儿期4种静止型α-地贫患儿Hb Bart′s水平分布[n(%)]

3 讨 论

地贫是全球病例数量最多、分布最广的一种单基因病[6-7]。α-地贫临床表现具有高度遗传异质性，诊断金标准为基因检测，但该方法烦琐，且对设备的要求较高，故临床还需寻找更为简便且准确的α-地贫筛查方法。

现阶段，临床诊断地贫的常用筛查手段包括血常规检测结合红细胞脆性检测、Hb电泳法、高效液相色谱法等[8]。经临床实践证实，血常规检测结合红细胞脆性检测应用于地贫筛查诊断，准确性不高，漏检现象时常发生，临床应用相对较少；高效液相色谱法筛查地贫易受到其他因素干扰，对操作要求较高，且检测花费昂贵，临床适用范围较小；毛细管电泳技术常用于Hb检测，具备普适性，在地贫筛查中应用较为广泛，为目前较适合用于新生儿地贫筛查的技术，通过检测新生儿Hb中区带，可辅助临床判断地贫[9]。有研究报道，地贫患者Hb Bart′s区带增高，但也存在未见Hb Bart′s区带增高的α-地贫患者[10]。调查显示，新生儿期应用脐带血进行Hb电泳分析Hb Bart′s水平对α-地贫的筛查结果与基因检测结果的符合率可达90%，但对成人或儿童α-地贫的诊断符合率较低，故该项检测应选择在新生儿时期进行[11]。与以往研究中采用脐带血为筛查标本不同，本研究采用足跟血干血斑标本进行检测，与脐带血相比，具有标本保存简便、运输方便的优势，在新生儿出生3～5 d内即实施α-地贫筛查，有助于临床及早发现患者，对早期治疗、改善预后有重要意义。

静止型α-地贫包括缺失型、非缺失型(又称突变型)，常见缺失型有-α3.7、-α4.2，主要为α1或α2珠蛋白基因片段缺失；常见非缺失型突变有αCS、αQS、αWS[12]。本研究显示，新生儿期静止型α-地贫中的缺失型(除αWS外)患儿Hb Bart′s水平比突变型低，位于α1珠蛋白基因右侧的缺失型(-α3.7)患儿的Hb Bart′s水平低于位于α2珠蛋白基因左侧缺失型(-α4.2)患儿的Hb Bart′s水平。这说明Hb Bart′s水平与α珠蛋白基因缺失突变类型有关。本研究显示，缺失型(除αWS外)Hb Bart′s水平中位数低于突变型α-地贫。干血斑毛细管电泳结果显示，新生儿期静止型α-地贫中-α3.7α/αα、-α4.2α/αα、αCSα/αα、αQSα/αα型的检出率分别为38.71%、44.00%、95.45%、80.00%，较为理想；但αWSα/αα型的检出率为0，导致新生儿期静止型α-地贫总体检出率较低(58.24%)。这与αWS未造成严重的珠蛋白链不平衡有关，临床还需采用基因检测的方法进行确诊。

综上所述，足跟血干血斑毛细管电泳技术用于新生儿α-地贫筛查有一定价值，有助于临床区分缺失与突变的静止型α-地贫；但对于αWSα/αα型α-地贫难以有效检出。