一种简易改良细胞蜡块制作技术在胸腹腔积液患者诊断与治疗中的应用价值

白菊萍 张菊梅

【摘要】目的：探索细胞蜡块制作技术在胸腹腔积液细胞学诊断中的应用价值。方法：选取我院老年性胸腹腔积液标本129例作为研究对象，均进行常规涂片、液基细胞学制片、细胞蜡块制作石蜡切片，经染色后进行细胞学检查。结果：改良细胞蜡块制作技术操作流程简单，不需要特殊设备，且能够有效提升胸腹腔积液恶性细胞检出率及细胞学检查的应用范围，此次研究胸腹腔积液标本129例，经细胞学检查良性病变91例（70.5%），转移性肿瘤35例（27.2%），原发性肿瘤3例（2.3%）。结论：胸腹腔积液细胞蜡块技术避免了传统细胞学涂片检查的局限性，通过细胞蜡块制作技术的实施，使细胞蜡块成为细胞学检查通向组织病理及分子病理的桥梁，为临床疾病的诊断和治疗提供更多可靠依据。

【关键词】  胸腹腔积液  脱落细胞学  细胞蜡块制作 细胞免疫化学  靶向治疗

中图分类号：R561.3

胸腹腔积液是晚期或复发恶性肿瘤的严重并发症之一[1]，也是许多恶性肿瘤及一些良性病变的常见临床表现[2]，对于伴发胸腹腔积液的恶性肿瘤来说，胸腹腔积液细胞学检查关系到肿瘤的分型、分期、治疗方案的选择和预后判断等，同时对胸腹腔积液中检出的恶性肿瘤细胞可进行免疫细胞化学和药物敏感基因检测等[3]。胸腹腔积液细胞学检查，可以初步判定疾病的性质，具有简便易行，患者痛苦少，不需要特殊设备等优点，是胸腹腔积液患者诊断及鉴别诊断的重要手段之一。随着微创无创诊疗及免疫组化、分子生物学等精准施治技术的发展，细胞学检查在胸腹腔积液患者疾病诊断、鉴别诊断、判断转移性肿瘤的组织来源以及为患者提供靶向治疗依据等应用中越来越凸显其重要性[4]，但常规胸腹腔积液细胞涂片检查的阳性率普遍偏低，加之传统方法涂片因细胞堆积、分布不均、含红细胞多、恶性细胞量少[5]，且无法保存有效的诊断细胞成分，继而无法进行疾病诊断、鉴别诊断及免疫靶向治疗所需要的细胞免疫化学、特殊染色、分子基因检测等，给胸腹腔肿瘤性积液疾病的诊断及鉴别诊断带来了不少困扰，限制了胸腹腔积液细胞学检查在临床中的广泛应用。胸腹腔积液细胞蜡块制作技术就是将送检的胸腹腔积液，通過技术流程的处理，制作成细胞蜡块，将其细胞成分保存于蜡块中，从而将细胞蜡块进行常规石蜡切片、HE染色、细胞免疫化学染色、特殊染色，靶向药物敏感基因检测等检查，判断胸腹腔积液中细胞的性质、类型，达到对肿瘤细胞精确诊断的技术。经过大量临床病例的探索研究，分析总结了一种高效、快速、操作流程简单的细胞蜡块制作技术，现将技术要点及操作流程介绍如下：

1一般资料与方法

1.1一般资料

选取我院2019年9月—2020年8月送检的老年性胸腹腔积液细胞学检查的样本共129例作为研究对象。年龄55—85岁，男性患者73例，女性患者56例，男女之比约为1.3：1。

1.2主要技术流程及方法

1.2.1标本送检量

建议临床尽可能抽取100mL以上的胸腹腔积液送检，如果抽取的样本量少于100mL，则应全部送检。

1.2.2送检时间的要求

胸腹腔积液离体后半小时内送检到相关检查科室处理，如暂时不能送检应将标本冷藏于1-4℃冰箱内，但冷藏时间不应超过24 h。

1.2.3存放送检样本容器的要求

建议存放于硬质不吸水密闭洁净容器（推荐使用盐水瓶），不建议使用软质引流袋存放及送检。

1.2.4 抗凝与预固定

通常不需要抗凝和预固定处理，但若要长距离转送或隔日处理则建议使用10%0.106mol/L枸橼酸钠或肝素抗凝剂抗凝，并采用50% 酒精与浆膜腔积液1：1混合预固定。

1.2.5细胞蜡块制作流程与方法

（1）将送检的胸腹腔积液标本静止放置20～30 min待自然沉降后，倾去或吸除上清液，留底部液体约100mL进行离心处理，（每份样本用1～2支离心管），推荐使用具有自动平衡功能的垂直离心机。同时吸取沉淀物进行常规涂片及液基细胞学制片经巴氏染色或HE染色后做对照，如图1、图2所示。

（2）离心管建议用50～100 mL一次性尖底离心管进行离心处理，初次离心用2500～3000转/分转速离心5min（高转速，短时间）;如果沉淀物少可重复离心（2000转/分转速），离心5 min;如果沉淀物血液含量大于沉淀物的1/2时，建议使用清洗步骤，（即使用1%冰醋酸酒精液处理，并进行第二次离心沉淀，如图3所示。

（3）离心沉淀完成后，用吸管将上清液吸除，只留沉淀物于离心管底部，然后向离心管沉淀物中加入10%中性福尔马林液30～50mL，放置振荡器上轻轻振荡混匀。

（4）然后将混匀后的沉淀物低速离心（800～1000转/分）15～20min后，取出离心管放样本架上静止固定2 h以上。

（5）待常规取材时用长把小勺从离心管中取出细胞团块（如果体积较小，需用滤纸包裹），放入包埋盒，如图4所示，与当日取材后的组织标本进行常规脱水后制片、阅片。

（6）对阅片中细胞学检出恶性细胞或可疑恶性细胞的切片，用相应的细胞蜡块切片做细胞免疫化学染色、特殊染色或切取细胞蜡块组织进行分子病理或靶向基因检测。细胞蜡块切片HE染色效果如图5所示，细胞免疫化学染色效果如图6所示，（各种染色及分子、靶向基因检测具体操作方法不在此叙述）。

3研究结果

（1） 129例老年性胸腹腔积液经细胞学检查良性病变91例（70.5%），转移性肿瘤35例（27.2%）原发性肿瘤3例（2.3%），检查结果统计见表1。

（2） 35例恶性胸腹腔积液经免疫组化染色肿瘤分型结果统计见表2。

4讨论

细胞蜡块是进行免疫细胞化学，特殊染色，分子病理及未来研究等检查的有效检材，与传统涂片联合使用可以提高检测的敏感性和特异性[6]，此项技术制作细胞蜡块流程简单，方法可靠，不需要特殊设备就能有效提高胸腹腔积液细胞学检查的阳性率和准确性，对检出的恶性肿瘤细胞不但能够做到准确分型，而且能够为患者个体化治疗提供精准的检测依据。

与传统细胞涂片检查相比具有以下重要临床意义：（1）增加了目标细胞的数量、密度，并能使目标细胞得到有效保存，既能重复多次切片检查，又能辅助肿瘤性积液免疫细胞化学，特殊染色等检测，有效提高了胸腹腔积液患者肿瘤性疾病诊断的阳性率。（2）对检出的肿瘤性积液通过免疫细胞化学、特殊染色等检查对肿瘤细胞类型能够做到准确分型，为肿瘤患者精准化治疗提供更多参考依据。目前胸腹腔积液细胞学的制片方法有传统手工涂片、液基细胞学制片、细胞学印片等技术[7]，都存在阳性率低和无法进行后续的辅助诊断检查等诸多弊端，通过此方法将胸腹腔积液标本制作成细胞蜡块，有效弥补了细胞学检查的不足，大大提高了胸腹腔积液细胞学检查的阳性率和应用范围，为恶性肿瘤患者提供更为准确，有效的诊断及治疗依据，值得在癌症防治工作及临床医疗机构中大力推广使用。

参考文献

[1]隋燕霞，柳雨，蒋娜，等.142例恶性胸水细胞蜡块的免疫组化检测及分子病理检测[J].临床与实验病理学杂志，2017，33（3）：292-296.

[2] 严俊，江莺，许惠利.恩度治疗恶性胸腹腔积液的研究进展[J].实用癌症学杂志，2012，27（5）：538-539，5.

[3]罗阔，陈晓品.肿瘤靶向治疗的新型细胞载体分析[J].检验医学与临床，2014，11（4）：524-525.

[4]梁飛，姜敏，德真一等.胸腹腔积液细胞蜡块在肿瘤来源诊断及肺腺癌基因检测中的应用价值[J].中国实用医刊，2019，46（1）：10-13.

[5]刘华军，郑奎海.胸腹水脱落细胞学检查涂片方法的改进[J].中国社区医师（医学专业），2012，14（12）：263.

[6] 黄榕芳，何诚，朱伟峰.细胞蜡块技术与传统涂片技术在胸腔积液病理诊断中的应用效果比较[J].福建医药杂志，2016，38（02）：94-96.

[7]范红芸，韩烨，王贝，等.细胞蜡块对恶性胸腹水的诊断价值[J].中外医疗，2019，38（21）：34-36.