PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和灭活疫苗联合免疫母猪应用试验
2021-12-11王芳蕊袁雪涛
王芳蕊，袁雪涛，王 镇，杨 颖，崔 捷
（1.天津市动物疫病预防控制中心，天津 300402；2.天津市农业发展服务中心，天津 300402）
猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗称猪蓝耳病，按其病原致病力不同，分为经典PRRS 和高致病性PRRS[1]，是当前造成养猪业严重损失的重要疫病之一。因此，猪场应加强PRRS 监测，随时关注猪群感染情况，科学选择疫苗，做好PRRS 防控。而猪场选择哪种PRRS 防控方案及疫苗种类，要根据猪场自身定位来决定。种猪场、育肥场以及PRRS阴性场、阳性稳定场或不稳定场，在疫苗方案选择上都有一定的区别。本研究在天津市某PRRS 阳性猪场开展了PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）[2]和灭活疫苗联合免疫母猪试验，以验证该免疫方案的防控效果。
1 材料与方法
1.1 试验猪场背景
2021 年3 月，天津市蓟州区某猪场发生PRRS疫情并伴有气喘病、流行性腹泻等疾病。该猪场现存栏母猪200 余头、保育900 头；采取自繁自养模式，无购入史，曾免疫猪伪狂犬病活疫苗、猪瘟活疫苗、口蹄疫灭活疫苗，近期免疫流行性腹泻疫苗，抗体均在正常范围内，未实施PRRS 疫苗免疫。
病死猪临床表现为整体瘦弱，头部有略微浮肿，全身出现蓝紫色瘀斑，耳廓边缘有明显出血斑。肺脏表现为间质性肺炎，呈现花斑肺（图1），心尖叶有对称性虾肉样变化，肺脏实质有个别不规则分布的紫红色实变区，肠道内充满稀薄的内容物。采集病死猪颌下、肠系膜、腹股沟淋巴结以及肺脏、脾脏，使用高致病性PRRS 实时荧光检测试剂盒进行检测，结果为核酸阴性，即非高致病性PRRS 疫情；使用类NADC-30 毒株核酸检测试剂盒进行检测，结果为核酸阳性。随机采集30 份血液样本进行PRRSV 抗原和抗体检测，结果抗原检测均为阴性，抗体检测9 份阳性，抗体阳性率为30%。结合上述临床、剖检及抗原检测结果，判定该养殖场为PRRS 阳性场。
图1 剖检所见病猪肺部病变
1.2 试验材料
1.2.1 试验猪 妊娠40 d 左右的健康母猪和有呼吸道症状的母猪[1]，试验前应用ELISA 抗体检测试剂盒检测其PRRSV 抗体水平。
1.2.2 疫苗 PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株），以下称“疫苗A”，由杭州某动物疫苗有限公司提供，疫苗批号为 201205；PRRS 灭活疫苗，以下称“疫苗B”，由杭州某动物疫苗有限公司提供，疫苗批号为201258。
1.2.3 试剂盒 PRRSV 间接ELISA 抗体检测试剂盒，购自北京天之泰生物科技有限公司，批号为CPA.43X3。
1.3 试验方法
1.3.1 疫苗安全性试验 因疫苗B 为灭活疫苗，安全性相对较高，因此正式试验前仅对疫苗A 开展安全性试验（预试验）。随机选取妊娠40 d 和80 d 的母猪各5 头，每头母猪肌内注射1 头份疫苗A，观察其体温、精神状态及采食量变化。
1.3.2 免疫效果评价试验
1.3.2.1 分组 选取生产性能及生产时间相近的妊娠40 d 左右的健康母猪20 头，随机分成2 组（试验1 组和对照组），每组10 头；另选取妊娠40 d左右有呼吸道症状的母猪6 头作为试验2 组，进行耳标登记。
1.3.2.2 免疫方案 试验预饲期为15 d，试验猪只临床无异常。试验1 组10 头母猪和试验2 组6头母猪均于妊娠42 d 每头同时接种1 头份疫苗A和2 mL 疫苗B，于颈部两侧肌肉分开注射，对照组10 头母猪于妊娠42 d 同时注射同等剂量疫苗稀释液。所有试验猪群均在隔离状态下饲养，饲养环境和管理方式相同。
1.3.2.3 安全性观察 观察并记录接种后1～7 d母猪每天上午和下午体温以及精神状态和采食量变化，持续观察60 d，并于免疫后不同时间采集肛拭子、猪舍粪土与水样进行疫苗毒RT-PCR 检测。
1.3.2.4 免疫抗体检测 在疫苗免疫后0、14、28、42、70 d，各采集5 mL 血液（对照组28 d 后不再采集），分离血清，测定PRRSV 抗体水平，并进行抗体IRPC 值及其变异系数（CV）比较分析。CV=标准偏差/平均值×100%。
1.3.2.5 母猪生产成绩观察 记录每头试验猪的分娩时间、产仔总数、健仔数，以及产木乃伊胎和死胎数等。
2 结果与分析
2.1 安全性
接种疫苗A 后7 d 内，妊娠40 d 和80 d 母猪均未表现精神异常、采食下降等不良反应[3]。体温测定结果（图2）显示：妊娠40 d 母猪注射疫苗A后，全程7 d 最高体温为38.7 ℃，最低为38.2 ℃；妊娠80 d 母猪全程7 d 最高体温为38.7 ℃，最低为38.3℃。两个妊娠阶段的试验母猪体温均未见异常，符合健康母猪的正常体温标准（38.0～39.5 ℃），表明疫苗A 具有良好的安全性。
图2 妊娠母猪接种疫苗A 后平均体温变化规律
2.2 免疫效果
2.2.1 安全性 接种联合疫苗后7 d 内，妊娠42 d母猪均未表现精神异常和采食下降等不良反应。体温测定结果（图3）显示：对照组母猪全程7 d 最高体温为38.4 ℃，最低为38.0 ℃；试验1 组母猪全程7 d 最高体温为38.7 ℃，最低为38.2 ℃；试验2 组母猪全程7 d 最高体温为38.7 ℃，最低为38.1 ℃。免疫后7、14、21、28、35、42、49 和60 d 采集试验组猪肛拭子进行病毒检测，均未检测到病毒；对试验猪群饲养环境采集的猪舍粪土与水样进行RT-PCR 检测，结果均为阴性。综上，两个试验组猪体温均正常，符合健康母猪正常体温标准[4]（38.0～39.5 ℃），疫苗不存在通过粪便向外排毒的风险，表明疫苗A+疫苗B 具有良好的安全性。
图3 全部试验妊娠母猪接种疫苗A+疫苗B 后平均体温变化规律
2.2.2 抗体阳性率 采用PRRSV 间接ELISA 抗体检测试剂盒，对采集的血清样品进行检测发现：免疫前（妊娠42 d），试验1 组10 头母猪抗体全部为阴性，试验2 组有2 头母猪抗体为阳性，但抗原为阴性；免疫后14、28、42、70 d，2 个试验组母猪采集样品的PRRSV 抗体阳性率均为100%。对照组均为阴性。
2.2.3 抗体IRPC 值 统计结果（表1）显示：试验1 组在免疫后28 d（妊娠70 d）抗体IRPC 平均值达到高峰195.5，免疫后42 d（妊娠84 d）仍维持在较高水平；试验2 组虽然有2 头母猪在免疫前曾受野毒感染，但免疫后14 d（妊娠56 d）抗体IRPC 值也快速上升，免疫后28 d（妊娠70 d）达到高峰172.3，免疫后42 d（妊娠84 d）仍维持在较高水平。结果表明，试验母猪注射疫苗A+疫苗B 可以很好地诱导机体产生正常的免疫反应[5]。
表1 免疫前后不同时间各组母猪PRRSV 抗体IRPC 值
2.2.4 CV 统计结果（表2）显示：与免疫前相比，免疫后14 d，试验1 组和2 组CV 分别下降31 个和44 个百分点，表明免疫后血清抗体水平整齐度明显上升。随着免疫时间的延长，抗体IRPC值变异系数逐步升高；试验2 组CV 值较试验1 组CV 值变化更小。
表2 免疫前后不同时间各组母猪PRRSV 抗体CV 值 %
2.3 母猪生产成绩
统计结果（表3）显示：各组母猪分娩时间均正常，其中对照组各项生产指标均低于试验组；试验2 组平均窝产活仔数略低于试验1 组，但2 个试验组的死胎和木乃伊胎总数占产仔数比例明显低于对照组。试验组母猪所产仔猪的均匀度、活泼程度均高于对照组。
表3 各组母猪生产成绩汇总
3 讨论
PRRSV 在我国猪群中呈现遗传多样性特征，不同个体对同一毒株的易感性也不同[6]，变异毒株间异源保护性不足造成缺少“通用疫苗”。因此，诊断监测是防控PRRS 的重要前提[7]。猪场要确切了解PRRSV 本身及其感染状态的变化和对生产造成的影响，追踪后备母猪是否驯化成功以及母猪群的稳定性、生长育肥猪感染状况，这样才能科学合理地选择疫苗免疫方案，精准控制PRRS[8]。
PRRS 活疫苗（PC 株）是利用基因嵌合技术，通过反向遗传操作方法构建的PC 株制备的，（既含有经典株的部分基因，又含有高致病性变异株的部分基因），可同时预防经典和高致病性PRRS。PC 株活疫苗与灭活疫苗联合免疫母猪，能更好地产生中和抗体和细胞介导免疫，在预防两种类型PRRS 时，既能刺激机体产生体液免疫应答，又能激发较强的细胞免疫应答，实现更好的防控效果。
在本试验中，母猪同时免疫PC 株活疫苗与灭活疫苗，1 周内体温变化范围为0～0.6 ℃，对母猪分娩时间也没有影响；免疫后60 d 试验猪群肛拭子、猪舍粪土与水样中均没有检测到病毒，证明疫苗不存在通过粪便向外排毒的风险；在产仔性能方面，试验1 组成绩最好，成活率为100%；在仔猪初生重、均匀度和健壮活泼程度方面，试验组优于对照组。综上，初步证明联合免疫对母猪具有较好的安全性。母猪于妊娠42 d 同时接种PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和灭活疫苗，免疫后28 d抗体达到峰值，而CV 值明显降低，表明该疫苗免疫能够很好地激发机体建立免疫反应，并提高猪群抗体的整齐度。通过观察母猪生产情况，试验各组的生产成绩均优于对照组，证明临床应用PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和灭活疫苗联合免疫母猪效果良好。
本研究采用嵌合病毒活疫苗（PC 株）和灭活疫苗联合免疫方案，进行病原、应激相关指标以及免疫抗体检测[9]，为PRRS 阳性猪场科学制定免疫程序提供了依据。但本次试验受各方面条件限制，试验动物较少（26 头母猪），结论基于较少试验动物得出具有一定局限性。若要对生产实际起到指导作用还需要大数据的验证和支持[10]。下一步，将继续追踪观察该场仔猪生长情况及PRRS 防控效果，并向同类型猪场推广该项联合免疫技术方案。
