松茸多糖的提取及对小鼠降血糖的作用

2021-12-09叶兵兵杨什补李万辉

中国畜禽种业 2021年11期

叶兵兵杨什补李万辉

（四川民族学院农学院 626001）

松茸是一类稀有的野生食、药用真菌，在我国主要分布于东北地区、西藏地区、云南省及四川省。四川省的松茸又主要分布于甘孜藏族自治州的康定市、雅江县、稻城县、丹巴县、九龙县等，松茸的组成成分比较复杂，含有多糖物质、多肽类物质、油脂类物质、萜类物质及各种酶等活性物质，相关研究不断表明松茸多糖具有良好的药用价值及生物活性，同时还具有抗辐射、抗肿瘤、提高免疫力的作用[1]。为了更好地开发松茸的药用价值，了解松茸对其他病症的治疗效果，特选取甘孜州地区的松茸作为提取松茸多糖的原材料进行松茸多糖降血糖作用实验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

昆明系小鼠20 只(雌雄各半)，体重为18～22g。由成都达硕实验动物有限公司提供。

1.1.2 实验试剂

松茸采购于甘孜州地区；水浴恒温锅采购于群安实验仪器有限公司；离心机采购于群安实验仪器有限公司；血糖检测试纸条、血糖检测仪采购自江苏鱼跃医疗设备股份有限公司；四氧嘧啶（ALX）5g 购自上海伊卡生物技术有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 提取松茸多糖的方法

松茸粉碎并过筛备用，在水浴恒温锅中料液比1：15，温度90℃的条件下浸提3h。然后在4000r/min 的条件下离心10min，重复合并上层清澈的液体，沉淀的物质及液体再次按照正交表再加入15 倍蒸馏水，再重复2 次，然后合并上层清澈的液体以备用[2]。蛋白质的脱除采用Sevag 法，重复3 次后通过旋转蒸发的方式浓缩到原体积的1/3，待到浓缩液完全冷却后再往浓缩液中加入适量的无水乙醇，让浓缩液中的乙醇浓度达到预先设计的量。在4℃下低温静置24h 醇沉，然后4000r/min 离心10min，分离乙醇与沉淀。在醇沉结束后往水层中加入足量乙醇，乙醇的浓度达到75%时开始沉淀，除去水层然后再用丙酮进行洗涤除水。将已经用丙酮进行除水后的沉淀物放到温度为50℃的鼓风干燥箱内干燥5h，待到重量恒定不变后称量出的物质即为粗多糖提取物。

1.2.2 高血糖小鼠模型的建立

将实验小鼠分为2 组，分别为松茸高血糖组、喂水高血糖组，每组10 只，公母随机。并对每只小鼠进行编号与标记，同时记录下每只小鼠的血糖值。然后分别对松茸高血糖组及喂水高血糖组的小鼠腹腔注射3.6mg 四氧嘧啶，即浓度为18mg/ml 的四氧嘧啶（ALX）0.2ml，并在7d 后对每只小白鼠的血糖值进行测量[3]。

1.2.3 检测松茸多糖对小鼠降血糖的作用

先设计实验动物，以建立了的高血糖小鼠模型为基础，在22～25℃的条件下将20 只小鼠适应性饲养7d，并测定每只小鼠的血糖值，观察是否造模成功及每一组小鼠的血糖值变化情况。在第7 天造模成功后，松茸组的小白鼠只投喂松茸多糖提取液及每日定量的饲料；喂水组的小白鼠也只投喂水及每日定量的饲料。在持续饲喂7d 后(即实验的第14 天）开始测量每组小鼠的血糖值，并比较分析每组小鼠的血糖值变化。

连续灌喂14d，在1、7、14d 用血糖检测仪和血糖检测试纸条分别测定每组小鼠的血糖值并记录数据，保证小白鼠的生命活力，可以采用剪尾法对小白鼠进行采血检测，但需要注意每次剪尾不能超过1cm。

2 结果与分析

2.1 小鼠造模前和造模后血糖检测

血糖检测结果见表1 和表2，由表1 和表2 可知小鼠造模成功。

2.2 松茸多糖对小鼠降血糖作用的影响

3 讨论

表1 小白鼠血糖值均在7mmol/L 左右，该部分小鼠的血糖值属于正常区间，表明实验小鼠健康无不适合实验的个例；表2 中高血糖建模组中的大部分小鼠的血糖值均高于11.1mmol/L，表明建模成功，建模未成功的小白鼠不做重点观察；表3中在经过同等时间的松茸多糖投喂后，投喂松茸多糖的高血糖小鼠的血糖值下降幅度远大于喂水高血糖对照组的血糖下降值。