复方金银花颗粒质量标准提高研究

卜晨琛，刘学良，刘亚蓉，宋 霞，韩晓萍

（青海省药品检验检测院/青海省中藏药现代研究重点实验室，青海西宁 810000）

复方金银花颗粒由金银花、连翘、黄芩等三味药材组成，具有清热解毒、凉血消肿的功效，用于风热感冒，咽炎，扁桃体炎，目痛，牙痛及痈肿疮疖[1]。

复方金银花颗粒质量标准最早收载于《卫生部中药成方制剂》第十册标准编号WS3-B-1985-95，收载项目简单，无法全面控制药品质量，大部分生产企业执行该标准。其他企业执行标准有《国家药品标准》WS3-B-1985-95-7，WS3-B-1985-95-6，WS3-B-1985-95-8，WS3-B-1985-95-4[1]。

国家食品药品监督管理局网站上显示复方金银花颗粒现有生产厂家为33家，批准文号33个，剂型为颗粒剂。该制剂现行标准较落后，不够全面，有必要加强其质量控制，提高现有标准，以保证其临床疗效和安全性。本研究依托国家药典委员会，提高和完善了复方金银花颗粒的标准，可全面控制其质量[2-6]。

1 材料

1.1 样品收集情况

此次研究共收集到15家生产企业的样品23批次，覆盖全国近50%的复方金银花颗粒的生产企业，15家生产企业均提供了处方中药材原料。经青海省药品检验检测院鉴定，所有原药材的基源与处方一致，均为《中国药典》2015年版一部中的收载品种。

1.2 仪器与试药

卡玛全自动点样仪(型号：LINOMAT 5)，超声波清洗器（型号：B2500s-MT），Agilent 1260高效液相色谱仪，Waters2695高效液相色谱仪，METTLER TOLEDO XS105DU 电子天平。高效硅胶G薄层板（默克化工），聚酰胺薄膜（路桥四甲生化塑料厂），乙睛为色谱纯，其余试剂均为分析纯。对照药材、对照品均购于中国食品药品检定研究院，连翘（120908-200914）、黄芩（120955-201008）、金银花（121060-201107）、连翘苷（110821-200610）、黄芩苷（715-200111）、绿原酸（110753-200413）。

2 实验方法

2.1 性状

按23批次复方金银花颗粒的实际情况进行描述：本品为浅黄色至黄棕色的颗粒；味甜，微苦。

2.2 复方金银花颗粒中金银花、连翘、黄芩的薄层色谱鉴别

2.2.1 金银花、绿原酸的薄层色谱 取样品约5g，研细，加甲醇20ml，超声20min，取滤液作为供试品溶液。取金银花对照药材约0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7:2.5:2.5）的上层溶液为展开剂，展开后，置紫外灯（365nm）下检视。

2.2.2 连翘、连翘苷的薄层色谱 取鉴别2.2.1项下的供试液，取滤液10ml，浓缩至2ml，作为供试品溶液。取连翘对照药材约0.5g，加甲醇10ml，同法制成对照药材溶液。取连翘苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸（10:1:0.5）为展开剂，展开后，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

2.2.3 黄芩、黄芩苷的薄层色谱 取鉴别2.2.2项下的供试液，作为供试品溶液。取黄芩对照药材约0.5g，加甲醇10ml，超声处理10min，取滤液作为对照药材溶液。取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液。吸取上述溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸为展开剂，展开后，喷以2%三氯化铁乙醇溶液，日光下检视。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件及系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.4%磷酸为流动相B，进行梯度洗脱（0～13min，A:10%,B:90%;13～15min，A:10%→29%，B:90%→71%；35～37min，A:29%，B:71%；37～42min，A:29%→25%，B：71%→75%）；流速为1.0ml/min；绿原酸检测波长为326nm，连翘苷、黄芩苷检测波长为278nm。理论塔板数数按黄芩苷计，不得低于6000。

2.3.2 对照品溶液的制备 取对照品适量，加50%甲醇配置成每1 ml含绿原酸0.04974 mg、含连翘苷0.01969 mg、含黄芩苷0.1233 mg的混合对照品。

2.3.3 供试品溶液的制备 取复方金银花颗粒约2 g，精密称定，置具塞锥瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，超声（功率250 w，频率35 kHz）处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.3.4 方法学验证 ⑴ 成分选择：由文献可知金银花中绿原酸含量最高，且为有效成分之一[7-8]；连翘中连翘苷为有效成分之一，且含量较高[9-10]；黄芩中黄芩苷含量最高，且为有效成分之一[11-12]。由《中国药典》2015年版中可知，金银花中含绿原酸（C16H18O9）不得少于1.5%，流动相为（乙腈-0.4%磷酸溶液）[13]；连翘含连翘苷（C27H34O11）不得少于 0.15%，流动相为（乙腈-水）[14]；黄芩饮片含黄芩苷（C21H18O11）不得少于8.0%，流动相为（甲醇-0.2%磷酸）[15]。三种药材在极性差不多的流动相条件下，含量限度大小分别为黄芩苷＞绿原酸＞连翘苷。⑵色谱柱及仪器的考察：选用 Agilent ZORBAX SB色谱柱（4.6 mm×250 mm）、BOS Chrom ODS色谱柱（4.6 mm×250 mm），分别在 Agilent1260高效液相色谱仪、Waters2695高效液相色谱仪均能得到很好的分离。⑶ 线性关系考察：取2.3.2项下混合对照品溶液2、4、8、12、20μl，按上述条件分别注入色谱仪测定，以进样量对峰面积进行回归。绿原酸在0.09948～0.9948μg的范围内线性关系良好；连翘苷在0.0398～0.3938μg的范围内线性关系良好；黄芩苷在0.2466～2.466μg的范围内线性关系良好。⑷ 精密度考察：取2.3.2项下混合对照品溶液重复进样5次，进样量10μl，RSD值均小于2%，表明本方法精密度良好。⑸ 稳定性试验：取2.3.3项下供试品溶液（批号20160316），分别在0、4、8、12、24小时进样，进样量10μl，绿原酸、连翘苷、黄芩苷的 RSD（relative standard deviation，相对标准偏差）值均小于2%，表明供试品溶液在24小时内稳定性良好。⑹ 重现性试验：取2.3.3项下供试品溶液（批号151102）5份，进样量10μl，并分别计算出绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含量，RSD值均小于2%，表明本方法重现性良好。⑺ 加样回收率试验：取样品（批号151102）6份，每份取1g，精密称定，精密加入一定量的绿原酸、连翘苷、黄芩苷对照品，按2.3.3项下的制备方法制备，依法测定，计算加样加收率，平均回收率在101%～103%之间。

3 实验结果

本实验建立的TLC法，可鉴别出复方金银花颗粒中的金银花、黄芩、连翘，各展开系统对样品的分离度良好，特征斑点明显，阴性无干扰。

23批样品中，绿原酸测定结果在0.2～19.5mg/袋之间，平均值为5.6mg/袋，按平均值的60%暂定限度为本品每袋含绿原酸不得少于3.3mg，7批样品低于限度值。黄芩苷测定结果在0.3～85.4 mg/袋之间，平均值为14.2 mg/袋，按平均值的60%暂定限度为本品每袋含黄芩苷不得少于8.0 mg/袋，5批样品低于限度值。连翘苷测定结果在0.7～13.1mg/袋之间，但由色谱图所示，黄芩苷的峰面积远远大于连翘苷，保留时间相近，且连翘苷的含量约为黄芩苷的含量的七分之一，所以不在标准中列出连翘苷的含量。23批样品中绿原酸、黄芩苷含量均合格的12批，合格率为52%。

4 原标准中的理化鉴别与薄层色谱鉴别验证

4.1 理化鉴别

原标准方法《卫生部中药成方制剂》第十册标准编号WS3-B-1985-95中鉴别（1）[1]。依据实际实验，样品虽加入活性炭处理，但本身的黄色干扰依旧严重，所以新标准中删除。

4.2 黄芩的薄层色谱

原标准方法《卫生部中药成方制剂》第十册标准编号WS3-B-1985-95中鉴别（2）[1]。因对照药材与样品处理方法不一致，操作较繁琐，且新的黄芩TLC方法可行性良好，所以删除。

5 讨论

复方金银花颗粒质量标准最早收载于《卫生部中药成方制剂》第十册标准编号WS3-B-1985-95。收载项目有【性状】、【鉴别】（理化鉴别，黄芩的TLC鉴别）、【检查】，无法全面控制药品质量。大部分生产企业执行该标准。

其他企业执行标准有，洛阳君山制药有限公司执行标准为《国家药品标准》WS3-B-1985-95-7，广州诺金制药有限公司执行标准为《国家药品标准》WS3-B-1985-95-6，哈尔滨大洋制药股份有限公司执行标准为《国家药品标准》WS3-B-1985-95-8，大庆华科股份有限公司药业分公司执行标准为《国家药品标准》WS3-B-1985-95-4，虽然各企业执行的标准在原有标准的基础上有一定的完善，但都不够全面。

此次研究对复方金银花颗粒的生产、市场流通情况和所用药材进行了调研，最终根据试验结果的可行性，对原标准进行规范和调整。首先依据实际情况，修改原标准中的性状项，使其更加符合实际生产出的产品性状。其次，增加或修改了金银花、黄芩苷和连翘的TLC鉴别项，使得TLC方法更加合理简便，可鉴别出其中的三味药材的真假。最后，增加或修改了含量鉴别项，可同时测定出绿原酸和黄芩苷的含量，可对其金银花和黄芩的投入量进行一个量的控制。

此次收集到的23批复方金银花颗粒样品，依据原标准检验，合格率为100%，用新的检验标准检验时，合格率仅为52%，分析原因，可能有部分厂家在生产时虽然加入了金银花、连翘、黄芩三味药材，但存在投料不足或者以次充好的现象，以致生产出的复方金银花颗粒含量不合格，至于临床疗效是否有影响，需进一步研究。本研究同时反映出原标准有所欠缺，此新的检验标准能够更好、更全面地控制复方金银花颗粒的质量，能够督促各个企业更加注重原料药材的品质，同时也可统一复方金银花颗粒的标准（现有标准共5个），为药品检验人员提供了便利，本研究的新的标准的不足是不能控制连翘的投入量，需要进一步研究。

建议今后药品质量标准的制定，能够全面科学地分析问题，从实际情况出发，严格制定。各企业要从严要求，良心投料，生产出质量和品质有保证的药品[15]。