动物疫病监测的常用样品采集方法及注意事项

吴学青 王志远 李华林

1.宁夏吴忠市利通区扁担沟镇畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100；2.宁夏吴忠市利通区金积镇畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100；3.宁夏吴忠市利通区东塔寺乡畜牧兽医工作站，宁夏吴忠751100

1 监测采样的一般原则

1）应该遵循适时、典型、无菌、适量和生物统计的原则。

2）凡是急性死亡病例、发现有血液凝固不良、口鼻、肛门天然孔出血、尸僵不全等疑似炭疽症状表现的，应先采集耳尖血液制作血涂片染色镜检，发现呈竹节状排列的大杆菌确诊为炭疽病的，严禁解剖。

3）采样时应先采集无菌心、肺、肝等实质器官，再采集胃肠、粪便等容易污染的组织，避免交叉感染。

4）要根据不同的检验目的要求和对病例的初步判断分析采集样品。采集的病料样品应具有代表性，采集的组织器官病变要明显。病因不明时，可对组织器官、分泌物、排泄物等进行全面采集。

5）采集血液、O-P 液等样品应提前禁食4～6 h。采集血样应根据不同采样对象、检验项目及所需血量多少采取不同方法与部位。

6）采样时做好个人生物安全防护，穿好防护服，佩戴好口罩、帽子、胶套、手套等防护用品，避免人畜共患病感染或环境污染发生。

7）采样数量要求：诊断时，可采样1～3 只（头）病死动物的组织器官；疫苗免疫注射抗体效果主动监测时，免疫后21 d 每个场（户）采集30 份血样；种群疫病监测净化，制定方案确定采样次数和采样日期，逐头采样。疫情监测或流行病学调查时，采样数量要符合生物统计学的要求。

2 常用监测样品的采集方法及技术要求

1）抗凝血：即加抗凝剂的血液，常用来作细菌或病毒检验样品。采集的血液立即与抗凝剂充分混匀，防止凝固，密封贴上标签，冷藏。

2）非抗凝血：即不需要加抗凝剂的血液，待血液凝固后血清析出，常用来作血清学试验。血清制备方法：血样在室温下（不能冷藏）倾斜放置2～4 h（有利于血清析出），待血液凝固自然析出血清，再经离心机离心5 min，分离出血清，将血清移入2 mL 塑料离心管中，封口贴标，4 ℃冷藏。若需长期保存，将血清置于-20 ℃冷冻。

3）禽泄殖腔拭子：将灭菌的拭子插入泄殖腔大约深1.5～5.0 cm 旋转并刮取黏膜表层的组织或粪便，立即将样品端置于含有多种抗生素、15%以上甘油的PBS 液的2 mL 离心管中，做好标记，密封低温保存。主要用来监测高致病性禽流感等疫病。

4）禽喉气管拭子：将消毒灭菌的棉拭子从口腔插入至咽的后部直达喉气管，轻柔擦拭并缓慢旋转，将拭子置于保存缓冲液之中。主要用来监测高致病性禽流感等疫病。

5）鼻腔拭子：主要用来监测羊小反刍兽疫、非洲猪瘟等疫病。用灭菌的棉拭子伸入鼻腔采集分泌物，随即将拭子置于有双抗的PBS 保存液中，密封低温保存。

6）牛羊O-P 液（咽食道分泌物）：探杯在采样前经0.2%柠檬酸或1%～2%氢氧化钠溶液中浸泡3～5 min，再用与动物体温一致的清水冲洗探杯后使用，每采集完1 头后，探杯要进行消毒并反复清洗以防止酸碱灼伤动物食道。采样时要保定好动物，将探杯随吞咽动作小心插入食道5～10 cm 处，轻轻来回抽动2～3 次，然后将探杯拉出，取出5～10 mL O-P 液，倒入含有等量细胞培养液或磷酸缓冲液的灭菌瓶或离心管中，充分摇匀密封，冷藏送检。主要用于PCR试验，监测动物口蹄疫等疫病。

7）皮肤样品：活体动物的病变皮肤，如有新鲜的水泡皮、结节、痂皮等可直接剪取3～5 g，置于保存液中。疑似口蹄疫发病后期，采样直接取舌体皮肤检测效果好。

8）实质器官：动物心、肺、肝、脾、肾、淋巴结等实质器官，病料要求新鲜、无污染。必须采用无菌操作技术和已消毒的配套器械，若器械污染，在取组织样品之前，应用酒精灯火焰消毒手术刀、剪、镊等器械，所采样品分别放入灭菌袋中，密封贴标，注明动物、组织名称、日期，防止病料相互感染，冷藏送检。若运送时间较长，可作冰冻状态保存。

9）肠管的采集：在病变肠管两端用缝合线扎紧打结,从结扎线外侧端剪断，把该段肠管放置于灭菌袋或器皿中，冷藏送检。

10）牛、羊脑采集：主要用于海绵状脑病的监测。在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜，目的是便于插入采样勺。然后用食指伸入枕骨大孔中，沿着腔壁转1 圈，目的是分离切断脑髓与腔壁相连的神经和血管，以便于脑髓顺利挖出。紧贴枕骨大孔的腔壁插入采样勺，以免破坏脑髓。插入5～7 cm 深度（羊脑则为4 cm），然后扳住勺子手柄，往外挖出脑组织，延脑即可完整取出，注意脑组织采样需在动物死亡之后尽快采集并-70 ℃冷冻保存。

3 样品采集、保存、记录、运送环节注意事项

1）心、肝、肾等实质器官采样，必须包括病灶及临近正常组织，以便于对照。死亡动物要尽快采样，夏天高温不能超过6 h，冬天不得超过24 h。

2）血液、O-P 液等样品在采集前禁食8～12 h，可少量饮水，以免胃内容物反流污染O-P 液。

3）样品信息记录要填写完整：所有样品都要认真填写采样表，包括场户名、场址、畜种、年龄、联系人及电话、采样数量、名称、编号、养殖规模、免疫情况、临床表现、发病数量、死亡数量及时间、治疗用药记录、饲料类型等。不同样品应独立密封包装，样品标签用记号笔注明样品名称、编号、采样日期，采样人和被采样单位签字或盖章确认，应将采样表及所采样品一起送实验室。

4）样品保存：血清、咽-泄殖腔拭子等样品为便于保存，可加入青霉素、链霉素防止腐败、抑制杂菌繁殖。

5）样品运送：采集的样品以最快最直接的途径送实验室检验。样品24 h 内送达，可放在4 ℃冷藏箱内运送；24 h 内不能送达的可把样品进行冷冻，并以此状态运送。