三重四极杆质谱测定玉米中的3种呕吐毒素和玉米赤霉烯酮

□ 王烽凡 路 峰

（本溪市检验检测服务中心（本溪市国家粮油质量监测站），辽宁 本溪 117000）

玉米赤霉烯酮又被称为F-2毒素，用ZON简写，且有雌激素样的作用，不仅能使动物中毒，还可以让动物的繁殖机能出现异常，甚至死亡。2017年，我国颁布的《食品中真菌毒素限量》国家标准，规定谷物及其制品限量指标为60μg/kg。呕吐毒素是属于单端孢霉烯族的化合物，又被称为脱氧雪腐镰刀菌烯醇，用DON简写。由于它们具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质，因此，对人类及动物的健康构成了威胁，特别是对免疫功能具有明显的影响。1998年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为三类致癌物。欧盟要求呕吐毒素含量要小于0.75mg/kg，中国饲料卫生标准要求饲料原料低于5mg/kg。本文通过建立了一种将超高效的液相色谱仪与三重四极杆质谱仪联合使用的方法，实现了玉米中玉米赤霉烯酮及三呕吐毒素的同时测定。

一、实验部分

（一）实验仪器

本实验使用岛津型号LC-30A的超高效液相色谱仪与型号LCMS-8045的三重四极杆质谱仪的联用系统。详细配置：CBM-20A系统控制器，DGU-20A5在线脱气机，SIL-30AC自动进样器，CTO-30AC柱温箱，LC-30AD×2输液泵，Lab Solutions Ver.5.93色谱工作站，LCMS-8045三重四极杆质谱仪。

（二）分析条件

液相条件：色谱柱：ShimadzuShim-packXRODSIII2.0mmI.D.×75mmL.，1.6μm；流动相：A－10mMNH4Ac水溶液，B－乙腈；进样体积：10μL；柱温：40℃；流速：0.3mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，B相的初始浓度10%，梯度洗脱的时间程序：2.00min，B相60%；4.00min，B相95%；4.50min，B相100%；5.50min，B相100%；5.70min，B相10%；8.00min，STOP。质谱条件：雾化气氮气3.0L/min，碰撞气氩气，干燥气氮气15L/min，离子源ESI，负离子扫描；扫描模式：MRM；离子源接口电压-3.5kV；脱溶剂管温度250℃；加热模块温度400℃；延迟时间：3ms；驻留时间：20ms。

（三）样品的制备

1.配制标准溶液

用乙腈将单标储备液制成密度为1000ng/mL的混标溶液，然后用水将其稀释为浓度5、10、25、50、75、100（单位：ng/mL）的标准工作液。

2.样品的前处理

将2.5g玉米样品置于40mL离心管中，然后加入乙腈-水（86+14）溶液10mL。在超声波下超声60min，15000rpm下离心15min。吸取上层清液5mL过自制新型混合柱，用5mL甲醇洗脱混合柱，抽干后合并洗脱液于10mL小试管中，用氮气在40℃下吹干。用乙腈/水（10mL的醋酸铵水溶液）（=50/50），定容至1mL，涡旋30s，用0.22μm微孔滤膜过滤，进样测试。

（四）梯度洗脱时间程序

0～4.00minB相60%；4.00～4.50minB相95%；4.50～5.70minB相100%；5.70～8.00minB相60%.

二、实验结果

（一）混合标准样品MRM色谱图（见图1）

（二）线性关系

4种毒素校准曲线的参数：ZON，Y=（0.0141913）X+（-0.0141720），0.9998；DON，Y=（0.0206871）X+（-0.0430373），0.9987；3-ADON，Y=（0.0223806）X+（-0.00177429），0.9995；15-ADON，Y=（0.0116655）X+（-0.0280959），0.9987。

（三）检出限及定量限

检出限（ng/mL）：ZON，0.29；DON，0.31；3-ADON，0.02；15-ADON，0.51。

定量限（ng/mL）：ZON，0.88；DON，0.94；3-ADON，0.06；15-ADON，1.53。

（四）精密度

（五）回收率

以空白玉米样配制加标浓度为10ng/mL的加标溶液，得到色谱图。4种毒素ZON、DON、3-ADON及15-ADON的加标回收率分别为116.41%、114.71%、104.38%、117.71%。

名称 RSD%（5ng/mL） RSD%（10ng/mL） RSD%（100ng/mL）R.T Area R.T Area R.T Area ZON 0.38 2.09 0.08 3.49 0.15 2.17 DON 1.20 1.83 0.71 0.67 0.27 2.27 3-ADON 0.50 4.85 0.36 1.45 0.16 2.94 15-ADON 0.41 4.89 0.44 2.10 0.10 1.47

三、实验结论

本文通过建立了一种将超高效的液相色谱仪与三重四极杆质谱仪联合使用同时测定玉米中玉米赤霉烯酮及3种呕吐毒素的方法。在浓度为5～150ng/mL的范围内，4种毒素的线性均良好，浓度为10ng/mL毒素加标的回收率良好；通过不同浓度的相对标准偏差数据可以判断仪器具有良好的精密度；满足ZON、DON、3-ADON及15-ADON的分析要求。