血清lncRNA-ENST00000414355与原发性高血压病的关联性研究

周志衡， 黄志杰， 陈宝欣， 张雪姣， 陈文如

目前，我国居民原发性高血压病的发病率有逐年增高的趋势。流行病调查数据显示，我国18岁及以上居民原发性高血压病患病率从1980年的7.7%上升至2018年的25.2%，现存患者数超过2.7亿[1-2]。高血压病已经成为主要公共卫生问题之一[3]，国内外学者对高血压的发生、发展机制进行了广泛而深入的研究。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年来在慢性病领域研究的热点，其与许多疾病的发生、发展及预后具有关联。有研究显示，lncRNA TUG1、lncRNA H19、lncRNA AK098656和lncRNA MALAT1等在血管重构、诱发血管外周压力增大、调节血管生成和血管疾病神经网络方面具有重要的调节作用[4-7]。本课题组既往研究发现，lncRNA-ENST00000414355具有调控细胞的DNA损伤与修复的功能[8]，但其在高血压中的作用还未有报道。鉴此，本研究旨在探讨人血清lncRNA-ENST00000414355与原发性高血压病的关联性，现报道如下。

1 对象与方法

1.1研究对象 选择2019年7月至2019年11月深圳市福田区第二人民医院收治的原发性高血压患者360例(观察组)。根据观察组性别、年龄、籍贯、经济收入情况，按照1∶1配对原则选取同期于深圳市福田区第二人民医院接受体检的健康者360名(对照组)。两组一般情况比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。所有研究对象的血液标本及信息收集均获得患者的知情同意。

表1 两组一般情况比较

1.2纳入与排除标准

1.2.1 观察组纳入与排除标准 纳入标准：(1)符合《中国高血压防治指南(2018年修订版)》[9]中关于原发性高血压病的诊断标准；(2)新发高血压患者，未服用过降压药；(3)年龄≥18岁。排除标准：(1)继发性高血压患者；(2)未能完成问卷调查和本次体检相关项目者。

1.2.2 对照组纳入与排除标准 纳入标准：(1)年龄≥18岁；(2)既往无高血压病史，且经双臂3次测量血压值均符合收缩压<140 mmHg和舒张压<90 mmHg。排除标准：(1)合并恶性肿瘤、内分泌系统疾病或自身免疫性疾病者；(2)合并精神病史或有精神病家族史者；(3)合并严重的心、肝、肾脏疾病者；(4)近期有感染或其他重大疾病史者。

1.3资料收集及相关判断标准 通过问卷方式收集研究对象的年龄、性别、职业、既往病史、服药史、吸烟、饮酒等情况。测量研究对象的血压值、体质量指数(Body Mass Index,BMI)等一般指标。以截止至受调查当天，在调查前30 d内吸过烟，而且连续或累积吸烟6个月或以上者，则定义为有吸烟行为。以每周至少饮酒1次定义为有饮酒行为。以每周运动3次及以上，平均每次运动超过30 min定义为定期锻炼。

1.4生化指标检测 于清晨采集受试者空腹肘部静脉血约3 ml。采用全自动生化分析仪(型号：7600-020，ISE)，血脂生化检测试剂盒(博奥生物)检测总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血糖。

1.5lncRNA-ENST00000414355水平检测 采用含抗凝剂的紫色采血管采集5 ml静脉血，4 ℃静置30 min，室温下3 000 r/min离心15 min，取上层血清，-80 ℃保存备用。检测时，解冻样本，以Trizol法提取样本总RNA，应用逆转录试剂盒(Fermentas K1622,Thermo Scientific公司)将其逆转录为cDNA。应用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR)法检测lncRNA-ENST00000414355水平，操作方法严格按照RT-qPCR试剂盒(Promega，美国)说明书进行。所用引物由上海生工公司合成，序列见表2。以β-actin为内参，采用2-△△Ct法计算其相对表达水平。

表2 引物序列

2 结果

2.1两组生活行为及临床生化指标比较 两组饮酒、定期锻炼、糖尿病史情况，以及空腹血糖、TG、HDL水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组吸烟人数比例，以及BMI、TC、LDL水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组生活行为及临床生化指标比较

2.2两组血清lncRNA-ENST00000414355的表达水平比较 RT-qPCR检测结果显示，观察组血清lncRNA-ENST00000414355的相对表达量高于对照组，差异有统计学意义[(7.15±0.87) vs (1.15±0.45)；t=116.518，P=0.000]。

2.3影响原发性高血压发生的多因素logistic回归分析结果 以是否患有原发性高血压病为因变量(1=是，0=否)，将上述有统计学意义的指标[吸烟(1=有，0=无)、BMI、TC、LDL、lncRNA-ENST00000414355]作为自变量进行logistic回归分析，结果显示，有吸烟行为、较高水平的BMI、TC和lncRNA-ENST00000414355是促进原发性高血压发生的危险因素(P<0.05)。见表4。

表4 影响原发性高血压发生的多因素logistic回归分析结果

2.4血清lncRNA-ENST00000414355与相关指标的相关性分析结果 Pearson相关分析结果显示，血清lncRNA-ENST00000414355水平与收缩压、舒张压、BMI、TC及LDL呈正相关(P<0.05)。见表5。

表5 血清lncRNA-ENST00000414355与相关指标的相关性分析结果

3 讨论

3.1目前，高血压病已经成为我国最常见的慢性病之一，引起了各地医疗机构和学者的重点关注。“健康中国”心血管疾病防治行动明确提出，到2030年，我国30岁及以上居民的高血压知晓率应不低于65%，高血压患者的规范管理率不低于70%，高血压治疗率和控制率应持续提高[10]。并希望通过全社会的努力，做到人人知晓个人血压、控制高血压危险因素、自我血压管理、注重合理膳食和酌情量力运动等。而“健康中国”行动计划中，有11项行动与高血压的防治相关[11]。

3.2近年来，国内外学者对与高血压发生、发展及预后相关的生物标志物进行了广泛的研究。其中，lncRNA与高血压的关联性研究越来越受到重视[12]。lncRNA是一类转录本长度超过200 nt的RNA分子，可调控多种生物学过程，并与一些疾病的发生、发展具有关联，可作为疾病诊断、治疗和预测预后的标志物[13-14]。Bayoglu等[15]的研究利用微阵列方法对自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)和健康大鼠心脏组织的基因表达情况进行了比较，发现在991个lncRNA中有145个的表达具有显著差异，其中93个表达上调，52个表达下调；而基因富集分析显示lncRNA CD-KN2B-AS1多态性可能导致高血压患者的收缩压增高。lncRNA可能参与了高血压病的发生、发展，但其具体机制还有待阐明[4，16]。

3.3lncRNA-ENST00000414355是在第9号染色体上的非编码RNA，位于第44021071位点到第44021414位点，全长343 nt。本课题组既往研究发现，lncRNA-ENST00000414355在镉毒性中具有多种调控功能，参与了细胞的DNA损伤、增殖和凋亡等生物学过程，并具有调控DNA损伤基因(ATM、ATR、ATRIP)和修复基因(DDB1、DDB2、OGG1、ERCC1、MSH2、RAD50、XRCC1和BARD1)表达水平的功能，这在大鼠动物模型和职业人群中得到了进一步验证[8]。但其在高血压疾病中的作用仍未明确，鉴此，本研究对lncRNA-ENST00000414355与原发性高血压病的关联性进行了探讨。结果显示，较高水平的lncRNA-ENST00000414355是促进原发性高血压发生的危险因素，且血清lncRNA-ENST00000414355与收缩压、舒张压呈正相关。提示lncRNA-ENST00000414355参与了原发性高血压病的发生、发展过程。有研究显示，lncLSTR、lncRNA-DYNLRB2-2、lncRNA Lexis、lncRNA HULC和lnc-HC与血脂代谢相关[17-20]。本研究结果也显示，血清lncRNA-ENST00000414355与BMI、TC及LDL呈正相关。

综上所述，lncRNA-ENST00000414355与原发性高血压病的发生具有关联性。但其与原发性高血压病的发展、预后的关系，以及对高血压调控功能的具体机制有待进一步研究。