哮喘患儿血清Eotaxin水平与肺功能 Eos及sIgE的关系分析

唐 平，王登莲，梁 燕，罗晓斌

(1.四川省自贡市第一人民医院儿科，四川 自贡 643000 2.四川省遂宁市中心医院呼吸科，四川 遂宁 629000)

哮喘常发生于小儿，经流行病学调查，约有284万儿童患有哮喘，若得不到及时诊疗，可引发肺性脑病、肺心病，增加小儿病死率[1]。随着深入探索哮喘发作机制，发现该病发生、发展主要是因呼吸道黏膜受到刺激，引发炎症反应，从而加剧自身免疫、呼吸道黏膜、肺功能损伤，使得哮喘病情进展，故在判定疾病时，需注重肺功能检测，以便了解疾病发展进程[2]。同时有学者发现[3]，细胞因子波动在呼吸道疾病发生、发展中也具有一定要意义。嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)作为趋化因子，可促进呼吸道炎症细胞浸润，激活嗜酸性粒细胞，诱发呼吸道高反应[4]；嗜酸性粒细胞(Eosinophilic granuloeyte；Eos)是反映气道炎症重要因子，可释放炎性因子，介导炎症细胞聚集，引发气道炎症[5]。此外，有学者发现部分哮喘者吸入致敏原后，可因IgE介导，产生变态反应，因此需注重过敏原特异性IgE(specific IgE；sIgE)检测，从而尽早确定致病原，为疾病诊断提供重要依据，目前关于哮喘与sIgE、Eos、Eotaxin细胞因子关系已得到论证，但目前临床上关于哮喘患儿血清Eotaxin水平与肺功能、Eos、sIgE之间相关性研究较少。而本文进一步揭示了血清Eotaxin水平与肺功能各项指标以及Eos、sIgE相关性，从而提高对疾病认知，做到早诊断、早治疗。具体如下文。

1 资料与方法

1.1临床资料:回顾性分析的67例哮喘患儿(观察组)、65例健康体检者(对照组)基本资料，符合《赫尔辛基宣言》的伦理审查。观察组男38例，女29例，年龄2～14岁，平均(8.56±3.18)岁。对照组男39例，女26例，年龄2～14岁，平均(8.48±3.22)岁。两组小儿比较体重、年龄、性别无统计差异性(P>0.05)。此次试验在2018年2月至2020年9月期间开展。哮喘诊断标准：符合2020年《支气管哮喘防治指南》中关于哮喘临床诊断标准[6]，出现咳嗽、胸闷、气急、反复喘息等症状，发作时，以呼气相为主的哮鸣音，双肺可闻及弥漫性或散在性哮鸣音，经运动激发试验阳性。纳入标准：①临床资料齐全；②年龄≤15岁；③停用长效过敏药7d以上。排除标准：①咳嗽变异性、心源性哮喘者；②先天性心脏病、气道畸形、支气管异物者；③近三个月内使用过类固醇类药物、细胞膜稳定剂、白三烯调节剂治疗者。

1.2方法:Eotaxin检测：抽取受检者3mL外周静脉血，血清分离，离心20min，转速2000r/min，放于冰箱(-80℃)内待检。使用ELISA法检测Eotaxin，试剂盒由上海原叶生物科技公司提供，具体方式按照说明书进行。阳性判定标准：>5ng/L。Eos检测：抽取受检者3mL肘静脉血，室温下1000～1350g离心力，完成两次普通玻璃试管离心，每次10min，放于-20℃环境下备用，使用全血细胞分析仪(Sysmex XE-2100型号)检测Eos。sIgE检测：使用免疫印迹法检测过敏原，使用德国MEDISEISS医疗器械公司提供的Y-NICAP100系统。抽取3mL肘静脉血，离心10min，速率维持1500rpm，离心半径10cm，严格按照说明书进行sIgE检测。阳性判定标准：≥35IU/mL。肺功能检测：使用德国Jaeger公司提供的FA2004B型号肺功能仪检测肺通气功能，对所有受检者进行三次通气功能检测，取平均值，检测指标包括第1秒用力呼气容积(Forced expiratory volume in one second；FEV1)、用力肺活量(Forced vital capacity；FVC)、呼气峰流速值(Peak expiratory flow；PEF)。

2 结 果

2.1比较两组各项指标:观察组Eotaxin、Eos、sIgE高于对照组(P<0.05)，PEF、FEV1、FVC低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 对比两组各项指标

2.2Eotaxin与各项指标的相关性:经Pearson法分析，Eotaxin与Eos、sIgE呈正相关性(r=0.907、0.969；P<0.001)；与PEF、FEVI、FVC呈负相关性(r=-0.809、-0.935、-0.908；P<0.001)。

2.3多元逐步回归分析:以哮喘患儿Eotaxin为因变量，以Eos、sIgE、PEF、FEVI、FVC为自变量进行多元逐步回归分析，结果表明，Eos、sIgE、FEVI进入分析模型(P<0.05)，R2=0.974(F=961.505，P<0.05)，其中回归方程Y=17.791+4.169×Eos+0.779×sIgE+(-5.711)×FEVI。见表2。

表2 多元逐步回归分析模型

3 讨 论

哮喘是由多种细胞参与的慢性炎症性疾病，具有反复发作特点，发病机制尚未明确，但有部分学者认为小儿是在遗传作用和生理结构影响下，出现喘息[7]。而近年来，趋化因子家族、细胞因子网络失衡在哮喘发病机制中引起人们重视。Eotaxin在肺组织中，主要来源于肺成纤维细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮细胞，最早是从致敏豚鼠支气管肺泡灌洗液中分离获得，可趋化嗜酸性粒细胞。韩君萍[8]学者通过大鼠实验发现，气道炎症高反应时，肺内Eotaxin基因可明显升高，由此说明，Eotaxin在气道炎症中对炎症细胞活化、聚集起到一定意义。在本次研究结果中，哮喘患儿Eotaxin水平表达高于对照组，进而佐证Eotaxin对趋化嗜酸粒细胞具有一定作用性，对此可从阻断或抑制Eotaxin对嗜酸性粒细胞趋化作用作为防治哮喘患儿的新突破口[9]。

Eos最早是外国学者在1879年从动物血液中发现，参与了对寄生虫天然防御，在气道炎症中发挥着重要意义，不仅具有吞噬作用，也是目前引起变态反应、气道高反应性、气道炎症的关键细胞[10]。在正常情况下，Eos在凋亡后可从组织中清除掉，因此在人体含量较低，但当机体出现免疫性炎症反应时，机体Eos的黏附分子表达可明显增强，强化了对血管内皮粘附作用。本次结果中，哮喘者体内Eos含量高于对照组，推测原因是Eos内含有基础蛋白质大的次级颗粒，一旦被刺激，便可激活，同时释放嗜酸性粒细胞衍生神经毒素、嗜酸性粒细胞过氧化物酶、阳离子蛋白、碱性蛋白，此类蛋白对气道上皮有毒性作用，进而诱发气道炎症，介导气道上皮细胞[11]。经相关性分析，Eotaxin水平与Eos呈正相关性，推测原因是Eotaxin化学作用是吸引Eos在肺内募集，可使得嗜酸性粒细胞活化，黏附于血管内皮上，进而产生颗粒蛋白，损伤组织，两者相互作用着，可在嗜酸粒细胞活化、黏膜、趋化中发挥着重要作用。

sIgE最早是在1966年发现的，1967年学者开始对IgE检测进行报道，且在近代变态反应学中取得突破性进展。随着近年来，相关研究增多[12]，学着发现IgE是人体血清中含量较低的免疫球蛋白，是引起I型变态反应的主要抗体，且B淋巴细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞均参与了该蛋白合成。本次结果显示，观察组sIgE高于对照组，说明sIgE在哮喘小儿中存在异常表达。可能是因sIgE在进入人体后，可产生过敏因子，促使致敏的肥大细胞或嗜酸粒细胞的多种化学物质产生活性反应，并逸出细胞外，从而引起哮喘发作，对此需尽可能避免接触变应原，对于寻找变应原困难者，需通过测定IgE，明确是否存在变态反应性，以便后期治疗[13]。经相关性分析，sIgE与Eotaxin呈正相关性，说明Eotaxin与sIgE具有共同作用，能够预测哮喘患病率，而Eotaxin与sIgE两者细胞因子中，除了肥大细胞外，仍存在共同来源，可能是活化的上皮细胞。

肺功能检查需依借影像技术，是一种简便、安全的检查方式，PEF、FEV1、FVC是目前反映肺功能最常用的几类参数[14]。与健康体检小儿相比，哮喘患儿PEF、FEV1、FVC水平更低，说明哮喘小儿在发病期间，可累及肺功能。主要体现为小气道痉挛，再加上小气道通气功能受损、改变，可导致气道炎症反应加重，从而引起肺功能损伤。经相关性分析，PEF、FEV1、FVC与Eotaxin呈负相关性，说明肺功能与Eotaxin水平表达存在一定相关性，可通过检测Eotaxin水平变化，评判哮喘患儿肺功能严重程度，是一项客观性评价指标[15]。但本次经多元逐步回归分析，仅FEVI对Eotaxin水平表现出特异性，为此关于肺功能与Eotaxin之间的关系还有待进一步探索。

综上所述，哮喘患儿可出现明显肺功受损，血清Eotaxin、Eos、sIgE含量改变，同时血清Eotaxin水平含量与肺功能、Eos、sIgE含量存在一定相关性，共同测定，有助于尽早明确诊断。