29个平菇菌株综合性状的比较分析*

胡晓强，李 峰，赵建选，靳荣线，马玮超

（河南省新乡市农业科学院，河南 新乡 453000）

平菇[Pleurotus ostreatus（Fr.）Kummer]适应性强、生长旺盛，栽培、管理相对容易，出菇快、产量高、营养价值高，是世界上主要栽培食用菌之一，也是我国各地广泛栽培的菌类之一。据中国食用菌协会统计（2017年），国内平菇2016年总产量约600万吨，在全国各地均有栽培，河南省是全国平菇重点产区，年产量约100万吨，栽培面积分布全省[1]。不同地区气候环境和栽培工艺的不同，同一品种会有不同的出菇表现，因此在规模化生产前应做适应性驯化。楚晓真等[2]对河南地区的12个平菇菌株进行了比较试验，筛选出2个在产量、抗病性、菇色、菇形等方面表现良好的菌株。刘芹等[3]在河南23个常规栽培品种中，筛选出7个品质优良的品种。河南平菇栽培面积大，主要分为熟料、发酵半熟料、发酵料3种栽培模式，为筛选适宜本地发酵料模式生产使用的平菇菌株，对收集、引进的29个平菇菌株进行了品种比较分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试菌株

供试平菇菌株共29个，菌株信息详见表1。

表1 供试平菇菌株Tab.1 The tested strains of Pleurotus ostreatus

1.1.2 供试培养基

CPDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂 20 g、KH2PO42 g、MgSO40.5 g，水 1 000 mL，pH自然。

液体培养基：马铃薯 200 g、葡萄糖 20 g、KH2PO42 g、MgSO40.5 g，水1 000 mL，pH自然。

原种培养基：麦粒78%、棉籽壳20%、石膏2%。

栽培种培养基：棉籽壳70%、玉米芯28%、石灰2%，含水量65%。

发酵料培养基：玉米芯92.5%、尿素1.5%、磷肥3%、石灰3%，含水量65%～70%。

1.1.3 主要试剂与仪器

三羟甲基甲烷 （C4H11NO3，Tris）、N，N，N’，N’-乙二胺（C6H16N2，TEMED）、丙烯酰胺 （C3H5NO，Acr）、甲叉双丙烯酰胺（C7H10N2O2，Bis）、甘氨酸（C2H5NO2）、过硫酸铵、核黄素、甘氨酸（C2H5NO2）、乙酸-1-萘酯（C12H10O2）、乙酸-2-萘酯（C12H10O2）、固蓝RR盐（C15H14ClN3O3，1/2 ZnCl2）等，均为分析纯，阿拉丁试剂（上海）有限公司。

DYCZ-24B型电泳仪，北京市六一仪器厂。

1.2 试验方法

1.2.1 酯酶同工酶法鉴定菌株

同工酶是蛋白质的一种特殊类型，是指来源相同，催化性质相同而酶蛋白的分子结构及理化性质不同，分别由不同等位基因或不同基因位点编码的蛋白质，具有组织、发育阶段及物种的特异性。作为一种遗传标记，同工酶已被广泛应用于动植物的遗传分析、生理生化研究，并且作为分类的重要指标广泛应用于真菌的分类鉴定中。参照农业行业标准NY/T 1097-2006食用菌菌种真实性鉴定 酯酶同工酶电泳法[4]的方法进行试验。供试菌株经试管活化后，接种于液体培养基，25℃恒温静止培养7 d。用滤纸过滤菌丝体，放入预冷的研钵中，冰浴条件下研磨至粉末状，然后转移至1.5 mL离心管中，加入Tris-HCl提取液，混匀，于4℃、10 000 r·min-1条件下离心10 min。取上清液，与40%蔗糖溶液和溴酚蓝指示剂以5∶1∶1的比例混合，即为电泳样品。

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离胶浓度7%，浓缩胶浓度2.5%，上样量20 μL，在室温条件下稳流电泳。采用固蓝RR盐、乙酸-ɑ萘酯、乙酸-β萘酯染色过夜，7%醋酸溶液漂洗、固定凝胶，胶片成像仪下拍照。

1.2.2 栽培试验

按照技术规程，依次制备原种、栽培种，采用玉米芯发酵料栽培方式[5]栽培，发酵料培养基按照配方堆置，料温达到60℃以后每2天翻堆1次，发酵10 d。采用26 cm×55 cm×0.015 cm规格塑料袋制袋，每袋平均装干料1.5 kg。播种时共播4层菌种，每层使用菌种量15%，室温发菌，适时采收。每个菌株栽培15袋，按照每个菌株出菇比例达到60%时统计子实体菌盖颜色、菌柄质地、菌褶颜色、菌褶密度，记录各菌株满袋时间、产量等指标。

菌褶密度（D）计算公式为：

式中：X表示统计的菌褶数（条）；C表示统计的菌褶长度（cm）。

生物学效率（E，%）计算公式为：

式中：M表示子实体鲜重（kg）；m表示培养料干重（kg）。

2 结果与分析

2.1 平菇不同菌株间酯酶同工酶分析

不同平菇菌株酯酶同工酶酶谱见图1。

图1 部分平菇菌株酯酶同工酶图谱Fig.1 Esterase isozyme zymogram for a parts of Pleurotus ostreatus

如图1所示，平菇的酶带较多，数量在3条～9条不等，共检测到13条迁移速度不同的酶带，根据酯酶同工酶条带的有无，按照有条带记为1，无条带记为0进行统计，采用相似系数法进行聚类分析，得到树状图，见图2。

图2 供试平菇菌株酯酶同工酶聚类分析树状图Fig.2 Dendrogram of esterase isozyme cluster analysis for Pleurotus ostreatus strains

由图2可以看出，当相似系数为0.65时，可以把29个平菇菌株分为4个类群。第一类群包括：野生1、野生4、PH5、PH2、豫三05、106-2共6个菌株；第二类群包括：野生2、野生3共2个菌株；第三类群包括：PH4、PH8、PH14、新科108、Pl46、650、8129、18003、新科 106、107-2、17004、615、8105、Pl54、黑平 2号、新831、雪F2、2106、99共19个菌株；第四类群包括：新科102、原生2号共2个菌株。其中第一类群、第二类群与第三类群、第四类群相似系数为0.51，第一类群与第二类群相似系数为0.53，第三类群与第四类群相似系数为0.61，29个平菇菌株的酯酶多态性较高，种质资源较为丰富。

2.2 栽培试验

不同平菇菌株栽培试验结果见表2。

表2 供试平菇菌株农艺性状比较Tab.2 Comparison of the agronomic characters of Pleurotus ostreatus strains

如表 2所示，菌株2106、650、180-2、8105、PH2、PH4、PH8、新科102这8个菌株菌丝生长速度最快，均为25 d满袋，野生4、PH5、豫三05这三个菌株菌丝生长速度较慢，大多数菌株菌丝满袋时间为26 d～30 d之间；供试菌株的子实体菌盖颜色分为灰白色、灰色、灰黑色至黑色；菌柄质地分为硬、中等程度硬和软；菌褶为白色和灰白色；菌褶密度差异较大，菌褶密度为13～21不等；前三茬生物学效率最高的菌株为2106，达82.9%，其次为新科108、650。通过对菌株满袋时间、子实体农艺性状、产量等一系列性状的比较，2106、新科108、650菌株综合性状较好，可作为本地秋冬季生产的优良平菇菌株。

3 讨论与结论

酯酶同工酶是从蛋白质水平反应生物的遗传变异，是一种主要的生化标记技术，目前已广泛应用于食用菌的分类鉴定及种质资源评价等研究[6-9]。本研究对收集和保藏的29个主要平菇栽培菌株进行了酯酶同工酶分析，得到了29个平菇供试菌株的遗传相似系数和聚类分析树状图，初步鉴定了29个供试菌株之间的亲缘关系。结果表明，29个平菇菌株的酯酶多态性较高，种质资源较为丰富，可作为遗传育种的备选材料。

豫北地区秋冬季发酵料栽培平菇，主要选用菌丝生长速度快、子实体菌盖颜色深、商品性状优的菌株作为生产用菌株。发酵料培养基为非纯培养培养基，菌丝生长速度快，生长优势强，一般抗杂性和栽培成功率较高；本地市场对菌盖颜色深、菌褶颜色白的菌株较为喜爱；菌褶密度与平菇商品的运输影响较大，一般认为菌褶密度较稀的菌株，在采摘及运输过程中，由于机械碰触，易造成菌褶破裂，影响商品性，菌褶密度大的菌株成为人为选择驯化的一个指标。综合29个平菇商品性状及产量，2106、新科108、650可作为本地秋冬季发酵料生产用的优良平菇菌株。