补阳还五汤对高脂血症大鼠血液流变学和血小板聚集作用的影响

2021-11-28卞敬琦张玉昆冯月男牛雯颖

中国医药导报 2021年28期

卞敬琦张玉昆冯月男牛雯颖

黑龙江中医药大学实验实训中心，黑龙江哈尔滨 150040

近年来，心脑血管疾病逐年攀升，严重威胁人类健康。高脂血症是心脑血管发病的主要诱因，主要表现为血中总胆固醇和/或甘油三酯过高。研究显示，高脂血症的发病与炎症[1]、血管内皮功能障碍[2-3]和血小板活化所引起的血栓前状态或高凝状态的增强密切相关[4-5]。补阳还五汤具有补气、活血、通络之功效，主治中风之气虚血瘀证。本课题组成功复制了高脂血症大鼠，以补阳还五汤为探针，从血液流变学和血小板活化中的关键环节血小板的聚集作用两方面进行研究，以期为高脂血症等相关疾病提供新的研究思路与实验依据[6-7]。

1 材料与方法

1.1 实验动物

50 只2.5 月龄雄性清洁级SD 大鼠，体重240 g左右，由哈尔滨医科大学实验动物中心提供[合格证号SCXK（黑）2016-001]。

1.2 药物、主要试剂与仪器

补阳还五汤（黄芪120 g、归尾6 g、赤芍5 g、地龙3 g、川芎3 g、桃仁3 g、红花3 g）；辛伐他汀片（哈药集团三精明水药业有限公司，批号：201706001，规格：10 mg）；总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、血栓素B2、血栓素A2、6-酮-前列腺素F1α、前列环素、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：182022、180671、187831、20181126、20181126、20181126、20181126、20181126、20181126）。

IMark 酶标仪（美国伯乐公司）；LBY-N7500B 全自动血液流变仪（北京普利生仪器有限公司）；甘油三酯L-16G 型高速台式离心机（苏州捷美电子有限公司）；DZKW-D-1 水浴锅（上海医用分析仪器厂）；HYQ-2121A 涡旋仪（北京市永光明医疗仪器厂）；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）。

1.3 研究方法

所有大鼠适应性喂养7 d 后，随机选取10 只作为空白组喂食普通饲料，其余动物喂食高脂饲料，正常饮食、饮水。第4 周检测动物血浆中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量，三者均显著升高视为造模成功[8-9]。将40 只成模大鼠按随机数字表法分为模型组，补阳还五汤高、低剂量组，辛伐他汀对照组，每组10 只。补阳还五汤高、低剂量组给药量分别为14.0 g/kg、3.5 g/kg；辛伐他汀组给药量为0.004 g/kg。空白组继续伺以普通饲料，其他组继续高脂饲料喂养。各给药组灌服相应药物，空白组和模型组灌服等体积蒸馏水，每日1 次，连续4 周。

1.4 检测指标

1.4.1 取血取血前禁食12 h 但不禁水，于末次给药40 min后，腹腔注射5%的水合氯醛5 ml/kg 麻醉，腹主动脉采血，枸橼酸钠抗凝，测全血黏度，3000 r/min 离心10 min（离心半径127 mm）得血浆，测血浆黏度、血脂、血小板聚集指标。

1.4.2 血脂测定按试剂盒说明书，利用全自动生化分析仪检测血浆中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量。

1.4.3 全血黏度和血浆黏度的测定方法取抗凝血1 ml，用全自动血液流变仪进行全血黏度测定。取抗凝血1 ml，3000 r/min 离心10 min（离心半径127 mm）取血浆，用全自动血液流变仪测定血浆黏度。

1.4.4 血小板聚集指标检测按试剂盒说明书用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA）分别检测环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、血栓素A2、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α、前列环素各孔的光密度（optical density，OD）值，根据浓度和OD 值算出相应标准曲线的回归方程，拟合模型选用logistic 曲线（四参数）。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件对所得数据进行分析，计量资料采用均数±标准差（）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t 检验。以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠血脂指标的影响

与空白组比较，模型组血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的含量均显著升高，差异有高度统计学意义（P ＜0.01）；与模型组比较，补阳还五汤高、低剂量组血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的含量显著降低，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P<0.01）。见表1。

表1 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠血脂指标的影响（）

注：与空白组比较，aaP ＜0.01；与模型组比较，bP ＜0.05，bbP ＜0.01。“-”表示无数据

2.2 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠全血黏度及血浆黏度的影响

与空白组比较，模型组全血黏度、血浆黏度均显著升高，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P <0.01）；与模型组比较，补阳还五汤高剂量组在低、中切变率下全血黏度和血浆黏度均显著降低，补阳还五汤低剂量组在各切变率下全血黏度和血浆黏度均显著降低，差异有统计学意义（P ＜0.05 或P <0.01）。见表2。

表2 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠全血黏度及血浆黏度的影响（）

注：与空白组比较，aP ＜0.05，aaP ＜0.01；与模型组比较，bP ＜0.05，bbP ＜0.01。“-”表示无数据

2.3 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠血小板聚集作用指标的影响

与空白组比较，模型组中6-酮-前列腺素F1α、前列环素含量显著下降，血栓素B2、血栓素A2含量显著上升，差异有统计学意义（P ＜0.05）；与模型组比较，补阳还五汤高、低剂量组血栓素B2、血栓素A2含量均显著下降，前列环素含量均显著升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表3。

表3 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2 的影响（）

注：与空白组比较，aP ＜0.05，aaP ＜0.01；与模型组比较，bP ＜0.05，bbP ＜0.01。“-”表示无数据

与空白组比较，模型组中环磷酸鸟苷含量显著升高，差异有统计学意义（P ＜0.05）；与模型组比较，补阳化五汤高剂量组可显著降低环磷酸鸟苷含量，补阳化五汤低剂量组可显著降低环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷含量，差异有统计学意义（P ＜0.05）。见表4。

表4 补阳还五汤对高脂血症模型大鼠环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷的影响（）

注：与空白组比较，aP ＜0.05；与模型组比较，bP ＜0.05。“-”表示无数据

3 讨论

研究显示血脂代谢在冠状动脉疾病的发生、发展中具有重要作用。若患者出现血脂异常，则心脑血管疾病的发生风险将相应升高[10]。本实验结果显示，高脂血症模型大鼠血浆总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量显著升高，提示本模型符合血脂对于高脂血症诊断的客观标准。与模型组比较，补阳还五汤可有效降低总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量，提示补阳还五汤对于高脂血症具有显著治疗效果。

全血黏度和血浆黏度是衡量血液黏滞程度的重要指标，在血栓性疾病的预防、诊断、治疗方面起着重要作用[11-13]。本实验中，与空白组比较，模型组全血黏度和血浆黏度显著升高，提示高脂血症模型大鼠存在血液流变学异常。与模型组比较，补阳还五汤低剂量组可显著降低高脂血症模型大鼠的全血黏度及血浆黏度。

血小板聚集反应是血小板活化的关键环节，也是高脂血症及血栓形成的重要诱因之一[14]。血栓素A2是血小板释放的活性物质，具有强烈的聚集血小板和缩血管作用[15-16]。血栓素B2与6-酮-前列腺素F1α是血栓素A2与前列环素的代谢产物[17-18]。在正常状态下，血栓素A2-前列环素是处于平衡状态，但二者性质不稳定。而其代谢产物血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α性质稳定，测定后其的含量即可代表血栓素A2与前列环素的水平。血栓素B2具有强烈的缩血管、促血小板聚集及诱导血栓形成作用。检测血栓素B2含量，可直观反映体内瘀血情况。6-酮-前列腺素F1α具有抗血小板聚集和强烈的扩血管作用。6-酮-前列腺素F1α含量降低，提示血瘀证加重。血液中血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的失衡状态会加速血小板黏附和聚集，形成血栓[19]。环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷是细胞内信号传递的第二信使，各种诱导剂需要通过第二信使作用使血小板聚集[20-22]。血栓素A2可降低血小板中的环磷酸腺苷浓度促进血小板聚集。前列环素可增加血小板中的环磷酸腺苷浓度，并抑制血小板聚集和血管舒张。本研究发现，与空白组比较，模型组6-酮-前列腺素F1α、前列环素含量显著下降，血栓素A2、血栓素B2含量显著上升，血栓素A2和前列环素之间的平衡状态被打破，血小板发生聚集。给予药物干预后，与模型组比较，补阳还五汤高低剂量组中血栓素A2、血栓素B2含量均显著下降，前列环素含量显著升高。

中医认为高脂血症属本虚标实之证，本虚指肝、脾、肾三脏俱虚，标实指痰、湿、浊、瘀[23-24]。补阳化五汤中黄芪补气固表；当归补血活血；桃仁、红花、赤芍活血化瘀、散瘀止痛；现代药理学研究显示，补阳还五汤中的当归、桃仁、红花能显著延迟血栓形成[25-28]，当归、川芎能改善血小板聚集，川芎中川芎嗪可提高血小板内环磷酸腺苷水平，抑制血栓素A2合成酶活性；当归中阿魏酸钠也能抑制血栓素A2合成酶活性，从而达到抑制血小板聚集的作用。红花中含有的红花黄色素能降低血液黏度，预防血小板聚集，并且对已经聚集的血小板有显著的解聚作用[29]。综上，补阳还五汤降血脂的作用机制可能是通过改善血液流变学和抗血小板聚集作用共同实现的。