五丹胃福颗粒对胃癌前病变大鼠组织病理学及VEGF和HIF-1α的影响研究

祁向争，胡建功，马志豪，李志强，姬壮壮，徐旭

(1.天津中医药大学第二附属医院,天津 300150；2.天津药物研究院有限公司,天津 300193)

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，临床预后极差，病死率居各类肿瘤第二位[1]。胃癌前病变(PLGC)指慢性萎缩性胃炎(CAG)伴肠上皮化生、上皮内瘤变的病理状态，是慢性发病过程[2]。现代研究表明胃癌前病变中的肠上皮化生和瘤变是胃炎向胃癌转化的关键步骤，对其干预治疗可显著降低胃癌的发病率[3]。本次实验通过五丹胃福颗粒干预胃癌前病变大鼠，观察VEGF、HIF-1α指标及胃黏膜组织病理学变化，证实五丹胃福颗粒对PLGC的预防和治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康清洁级雄性SD大鼠，80只，鼠龄15 d，体质量(20±5)g，适应性饲养1周。

1.2 药物与制剂

雷尼替丁(天津太平洋制药有限公司)；N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG，Fluka公司)，每周用双蒸水配成1 g/L的母液，4 ℃避光储存，临用时用双蒸水配成100 μg/mL(每天配1次)，供大鼠自由饮用，饮水瓶用油漆涂黑避光；五丹胃福颗粒购自天津中医药大学第二附属医院药房，大鼠用药量根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量以及高、中、低剂量计算法确定，即高剂量1.44 g/mL，中剂量组0.72 g/mL，低剂量组0.36 g/mL。叶酸购自天津中医药大学第二附属医院药房(天津力生制药股份有限公司)。

1.3 分组与给药

造模成功大鼠56只，随机分为模型组(A组)、五丹低剂量组(B组)、五丹中剂量组(C组)、五丹高剂量组(D组)、理气组(E组)、祛瘀组(F组)、叶酸组(G组)。各中药组分别给予高中低不同浓度的3组中药颗粒剂，2 mL/次，2次/日，共12周。祛瘀组与理气组是五丹胃福颗粒的拆方，分别为丹参饮与五磨饮子为主组成。西药对照组给予叶酸，剂量根据《药理实验方法学》人和动物间按体表面积折算的等效剂量，0.72 g/mL。

1.4 病理组织学检测标准

治疗12周后进行病理组织学检测，HE染色观察胃黏膜病理变化，包括炎症、萎缩、肠化、瘤变的病理情况。参照《慢性萎缩性胃炎中医诊疗共识意见》[4]给予量化，主要变量是炎症、萎缩、肠化、瘤变。无病理组织学改变计为0分。炎症按“轻、中、重”三个级度分别计1、2、3分。萎缩、肠化按“轻、中、重”三个级度分别记3、6、9分。瘤变按“轻、重”二个程度分别记为3、9分。

1.5 检测指标

1.5.1 大鼠的一般情况

大鼠整体状态、精神状态、皮毛光泽度、反应能力、饮食情况。

1.5.2 VEGF、HIF-1α

干预12周末，停药2 d后，免疫印迹法检测大鼠VEGF、HIF-1α水平。

1.5.3 大鼠胃黏膜病理变化

动物处死后，取全胃，沿胃大弯剪开，取胃窦和胃体部。4%多聚甲醛浸润固定12 h以上，冲水24 h，50%、75%、95%、100%乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡后，石蜡包埋。切片厚5 μm，常规苏木精-伊红染色病理学检查。观察指标及病情分级标准：腺体炎症、萎缩病理组织学分级标准、肠上皮化生及上皮内瘤变分度标准。

1.6 统计学处理

统计分析采用SPSS22.0统计软件。计数资料组间比较使用χ2检验，等级资料组间比较使用秩和检验，以P<0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠一般情况

分组干预期间，大鼠经造模后，整体状态明显变差。经五丹胃福颗粒低剂量、中剂量、高剂量、理气组、祛瘀组和叶酸治疗后，一般状态有不同程度好转。

2.2 采用Western Blot法检测VEGF、HIF-1α结果

治疗12周，与A组比较，其他组胃窦部黏膜VEGF、HIF-1α显著降低(P<0.05)；B组、C组与D组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；E组、F组与D组相比，差异没有统计学意义(P>0.05)，但VEGF降低趋势在F组比E组更明显，HIF-1α降低趋势在E组比F组更明显。E组与F组比较，差异没有统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组大鼠胃窦黏膜VEGF、HIF-1α水平

2.3 胃窦黏膜病理结果

经12周药物干预后，A组可见胃壁弹性差，黏膜淡白、红白相间，或紫暗，皱襞低平或粗大，走向紊乱，皱襞减少甚至消失，黏膜表面粗糙，黏液减少，或可见散在糜烂出血点，可见单个或多个小结节。B、C、D、E、F、G组大鼠胃壁弹性尚可，黏膜呈粉红色，表面光泽，被覆较多黏液，黏膜皱襞平整光滑，走向基本规则，见图1。

图1 各组大鼠胃黏膜组织病理变化(HE染色)

各组间炎症积分比较：B组、C组、D组、G组与A组比较，炎症积分减低(P<0.05)。B组、C组与D组比较，P>0.05，见表2。

表2 各组大鼠胃黏膜炎症程度积分比较(分)

各组间萎缩程度积分比较：B组、C组、D组与A组比较，积分减少(P<0.05)。B组、C组与D组比较，P>0.05，见表3。

表3 各组大鼠胃黏膜萎缩程度积分比较(分)

各组间肠化程度，仅模型组可见肠化，余治疗组未见肠化表现，各组间没有差异，见表4。

表4 各组大鼠胃黏膜肠化程度积分比较(分)

各组间瘤变程度积分比较：D组、G组与A组比较，积分减低(P<0.05)，见表5。

3 讨论

3.1 PLGC中医认识

胃癌前病变大多是由胃黏膜慢性炎症反应发展而来，与人们生活节奏变快、作息不规律、暴饮暴食等相关，患者多有胃脘胀痛等表现，严重影响生活质量，此期应该积极防治，以防止发生癌变[5-6]。

PLGC患者临床症状主要有心下痞满、胃脘胀痛、嘈杂吞酸、呕恶纳呆等，故多属中医“胃痞”“胃痛”等范畴，病位以胃为主，与肝脾相关[6]。因脾胃同居中焦，一脏一腑，以膜相连，互为表里，故脾病多及于胃。脾气升宣水谷精气，布施五脏为用；胃腑通降阴浊，和调六腑。升降相因，动静相和，故而以成中焦升降之变化，精微得化，气血得生[7-8]。肝为刚脏性喜条达而主疏泄，肝的疏泄功能促进和协调脾胃气机的升降，二者联系紧密[9]。

然胃为六腑之大主，多血多气，寒热痰瘀之邪，无一不先犯胃土，使胃气逆上，脾胃气血失和，而生胀痛。所以认为PLGC这一慢性病变过程主要是胃气郁滞，气郁日久，久病及血，而使胃络失和，导致瘀血阻于胃络。刘宇旻[10]等认为胃络瘀阻是贯穿PLGC胃黏膜屏障损伤的关键病理因素。张强[11]等认为气滞血瘀病机是PLGC 基本病理过程。现代实验研究认为PLGC血瘀证患者多存在微循环障碍，多有微循环血管内皮舒张功能和通透性异常，血管内皮受损，血细胞凝聚，血液呈高凝状态[12]。

3.2 五丹胃福颗粒作用机理

五丹胃福颗粒是天津中医药大学第二附属医院名老中医邵祖燕教授自创经验方，为传统名方五磨饮子与丹参饮化裁而成。现代研究表明五丹胃福汤可增加胃黏膜血流量，促进大鼠胃运动，使炎症因子表达降低，从而能有效治疗CAG，并延缓PLGC的发生发展[13-16]。方中木香可以促进胃排空，增强胃肠运动[17]；木香药理成分木香烃内酯(CO)、去氢木香内酯(DE)能抑制炎症因子肿瘤因子，使胃组织损伤减小[18]。沉香提取液降低氧化因子微量丙二醛(MDA)、及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、微量还原性谷胱甘肽(GSH)的活性，保护胃黏膜[19]。槟榔药理成分槟榔碱，可促进胃肠运动[20]。枳实可以促进胃肠动力[21]。丹参可以改善微循环，抑制胃酸分泌，减少胃黏膜损伤的作用[22]。丹参中丹参酮ⅡA有抗氧化、抗炎以及抗肿瘤的作用[23]。檀香加强胃肠蠕动[24]。砂仁具有保护胃黏膜、抗炎等作用[25]。从上可得此方剂主要通过理气和胃、化瘀通络的功效，进而改善胃黏膜炎症、调整胃肠运动、保护胃黏膜，治疗胃癌前病变，延缓肠上皮化生或不典型增生继续向胃癌的演变。

3.3 实验结果分析

各治疗组均能有效降低VEGF及HIF-1α，不同剂量组及拆方组之间，治疗效果没有明显区别。在VEGF改善方面，祛瘀组略优。在HIF-1α改善方面，理气组略优。改善病理炎症方面，各治疗组均有疗效，改善萎缩方面，中药各治疗组均有疗效，改善瘤变方面，中药高剂量组与叶酸组有治疗效果。通过以上实验结果可得五丹胃福颗粒可显著HIF-1α和VEGF，其中祛瘀组改善 VEGF方面略优，理气组在HIF-1α改善方面略优。这个空间架构与中医的“证”类似，反应为时间横断面上的空间变化。中医认为，气的运动是人生命的根本，在气的运动中，生命能量交换，物质代谢，所以气是维持人体生命活动之动力。正常情况下，人体处于气血和调的状态，一旦气的运动在各种因素干扰下，出现运行缓慢甚至停滞，人体会表现一定的症状，久之，则气滞血瘀，络脉瘀阻。五丹胃福颗粒通过理气活血降低PLGC大鼠的VEGF及HIF-1α表达，从而使胃黏膜病理积分显著降低，延缓了PLGC向胃癌的进展。