肺炎支原体感染患儿肺泡灌洗液中IL-17与IL-33表达水平及临床意义*

贺晓红 顾星 倪美艳 黎雯蒂 徐大琴

(成都市第一人民医院普儿科，四川 成都 610000)

肺炎支原体(Mycoplasma pnemuoniae，MP)是导致患儿肺炎支原体肺炎(Mycoplasma pnemuoniae pnemuonia，MPP)的常见病原体，约占肺炎总数的15%～30%，表现为发热、咽痛及咳嗽等症状，部分伴有黏液性或黏液脓性痰，易受累肺外系统，严重者可导致患儿死亡[1-2]。同时儿童身体尚未发育成熟，加上MP感染易复发，会影响患儿身心发育。因此早期评估患儿病情并及时给予有效治疗至关重要[3]。多数学者认为MP感染与炎症反应和机体免疫功能紊乱有关[4-5]。白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-33(IL-33)参与机体免疫反应，其中IL-17在炎性和自身免疫病变中具有重要作用，与自然受体结合后可被活化，引起趋化因子表达，并释放黏附分子，促使炎性因子的功能增强，造成炎性损害[6]。IL-33可调节细胞因子，并参与多种炎症反应，可诱导和调控宿主免疫反应对抗多种病原体[7]。而肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid, BALF)标本来源于病变的支气管及肺泡，能反应肺组织的病变[8]。因此本研究进一步分析MP感染患儿肺泡灌洗液中IL-17、IL-33表达水平及临床意义，旨在探讨MP感染发病机理，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年10月～2020年10月本院收治的105例MP感染患儿作为研究对象(观察组)，根据CPIS分为轻度组(CPIS<6分)55例和重度组(CPIS≥6分)50例。同时选取于同期住院的诊断为支气管异物并行纤支镜支气管异物取出术的患儿50例作为对照组。观察组纳入标准：①均符合《实用儿科学》[9]中MP感染诊断标准，急性期：病程≤8 d；恢复期：经抗生素治疗2～8周后症状消失或改善。②年龄2～14岁。③将病情和医疗措施、医疗风险、替代医疗方案等情况及时告知患者，并取得其书面同意。对照组纳入标准：①均为支气管异物患儿，近2个月无感染。②近期无呼吸道症状。③入院时均无喘息症状，听诊双肺呼吸音不对称。④无免疫性疾病及免疫缺陷病史。⑤未使用激素和免疫调节剂。⑥既往无喘息或哮喘病史、无个人及家族过敏史。⑦将病情和医疗措施、医疗风险、替代医疗方案等情况及时告知患者，并取得其书面同意。两组排除标准：①溶血贫血肺外并发患儿。②合并自身免疫疾病及中枢神经系统疾病者。③肺结核、支气管哮喘及其他呼吸系统疾病者。④使用糖皮质激素及免疫抑制剂者。本研究经伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 BALF中IL-17、IL-33水平 BALF采集：术前6 h禁食水，予以静脉镇静加局部麻醉，采用2%利多卡因咽喉局麻，纤维支气管镜经鼻、喉、声门进入气道。结合胸片及肺CT定位，寻找病变部位支气管开口，用生理盐水在37℃下灌洗病变肺段至少3次，然后负压抽吸。至少30%的输注被回收，保留肺泡灌洗液标本，将支气管镜缓慢拔出。对照组选择支气管异物病灶的对侧进行肺泡灌洗，灌洗液选用9g/L盐水，共灌洗3次，将灌洗液放置无菌收集瓶中。使用双层无菌纱布过滤BALF，1800 r/m离心，采用双抗体夹心ELISA法测定BALF中IL-17 IL--33水平。

1.2.2 免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平 入院第二天抽取空腹静脉血3 mL，采用免疫比浊法(TIIA)检测IgG、IgA、IgM水平。

1.3 观察指标 ①对比观察组和对照组BALF中IL-17、IL-33水平和免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平。②对轻度组和重度组BALF中IL-17、IL-33水平。③分析BALF中IL-17、IL-33水平与免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平的相关性。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 观察组中男性58例，女性47例，年龄2～13岁，平均(7.15±2.04)岁。对照组中男性28例，女性22例，年龄2～14岁，平均(6.89±2.01)岁。两组一般资料比较无显著差异(P>0.05)，具有可比性。

2.2 两组治疗前BALF中IL-17、IL-33表达水平比较 观察组BALF中IL-17、IL-33水平高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组治疗前BALF中IL-17、IL-33表达水平比较

2.3 轻度组与重度组治疗前BALF中IL-17、IL-33表达水平比较 重度组BALF中IL-17、IL-33表达水平高于轻度组(P<0.05)，见表2。

表2 轻度组与重度组治疗前BALF中IL-17、IL-33表达水平比较

2.4 两组治疗前免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平比较 观察组免疫球蛋白IgM高于对照组，IgA、IgG低于对照组(P<0.05)，见表3。

表3 两组治疗前免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平比较

2.5 BALF中IL-17、IL-33水平预测MP感染患儿的ROC曲线分析 ROC曲线分析显示，BALF中IL-17、IL-33水平联合预测MP感染患儿的敏感度及特异度均高于单独预测(P<0.05)，见图1。

图1 IL-17、IL-33水平预测MP感染患儿的ROC曲线分析

2.6 BALF中IL-17、IL-33表达水平与免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平的相关性 Spearman相关分析显示，BALF中IL-17、IL-33表达水平与免疫球蛋白IgM呈正相关性，与IgA、IgG呈负相关(P<0.05)，见表4、图2。

表4 BALF中IL-17、IL-33表达水平与免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平的相关性

图2 IL-17、IL-33水平与免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平的相关性

3 讨论

近年来，MP感染患儿发病率成上升趋势，严重影响患儿生长发育，且由于患儿年龄较小，机体抵抗能力较弱，一旦疾病进展容易损害多个器官，若不及时治疗，可出现器官功能障碍和衰竭，危及患儿生命，因此寻求简单、方便、安全的检查方法至关重要[10]。

以往研究显示，MP感染患儿存在Th1/Th2失衡[11]。初始CD4细胞在不同细胞因子作用下分化为不同T细胞(Th)，Th又可分为Th1、Th2及Th17[12]。而IL-17是Th17细胞分泌的主要细胞因子，在机体免疫反应中主要起促炎作用，可促进中性粒细胞成熟，并促进上皮和内皮细胞产生炎症递质，可通过募集中性粒细胞，在不同组织或细胞中的诱导参与了慢性气道炎症[13]。同时有研究指出，IL-17是一种促炎细胞分子，与MP细胞的免疫反应存在一定联系[14-15]。IL-33由平滑肌、成纤及内皮细胞等分泌，主要通过Th2细胞产生的炎症因子参与炎症和免疫反应，其不仅可作为促炎因子通过ST2介导的炎症通路激活炎症，加重组织损伤，还可作为染色质相关因子发挥转录抑制作用，协助抑制炎症前基因的表达[16]。IL-33在坏死、解体细胞的刺激下在细胞外释放，从而发挥细胞因子的调节作用[17-18]。本研究结果显示，观察组BALF中IL-17、IL-33水平高于对照组，提示IL-17、IL-33参与MP感染的发生发展，MP作为抗原刺激Th17、Th2细胞分泌IL-17、IL-33，进而通过生物学作用和其他细胞因子的相互作用，使体液免疫紊乱。且重度组BALF中IL-17、IL-33表达水平高于轻度组，提示BALF中IL-17、IL-33表达水平可鉴别MP感染的严重程度，IL-17、IL-33表达水平越高，患儿病情越严重，这是由于L-17、IL-33表达上调可诱导炎症级联反应，从而加速MP感染患儿病情。同时本研究进一步进行ROC曲线分析，结果显示，BALF中IL-17、IL-33水平联合预测MP感染患儿的敏感度及特异度均高于单独预测，进一步证明了BALF中IL-17、IL-33水平联合预测MP感染患儿价值较高，能够为临床治疗提供提供参考。

从免疫系统来看，MP属于抗原，可刺激机体分泌IgM和IgG抗体，而IgA是抗感染的主要抗体[19]。本研究对上述免疫球蛋白进行检测，结果显示，观察组免疫球蛋白IgM高于对照组，IgA、IgG低于对照组，与李沫民等[20]报道一致，说明免疫球蛋白IgM、IgA、IgG参与MP感染的发生发展，进一步分析其原因可能为：MP侵入儿童呼吸道粘膜表面黏液纤毛，粘附于粘膜上皮细胞，释放有毒代谢物，从而削弱纤毛运动，引起机体的体液和细胞免疫反应，分泌IgM和IgG。同时细胞损伤后诱导细胞免疫硬化，释放IgA抗体。与其他研究不同的是本研究进一步分析了IL-17、IL-33表水平与免疫球蛋白IgM、IgA、IgG水平的相关性，Spearman相关分析显示，BALF中IL-17、IL-33表达水平与免疫球蛋白IgM呈正相关性，与IgA、IgG呈负相关，提示随着BALF中IL-17、IL-33表达水平的增高，IgM随之增高，而IgA、IgG降低。

4 结论

MP感染患儿BALF中IL-17、IL-33水平呈高表达，对MP感染的诊断和病情评估具有一定的指导意义，且与免疫球蛋白IgM呈正相关性，与IgA、IgG呈负相关。但本研究样本量较少，将在下一步研究中增大样本量进一步分析其可能机制。