透骨草不同溶剂提取物对蚜虫的杀虫效果研究

□文/邢浩春 魏娜 李同庆 叶嘉 杨明建 昝立峰 李伟伟 丁岐峰

透骨草（Phryma leptostachya L.）是我国传统中药材，有镇痛抗菌、抗过敏、抗搔痒等作用，且有一定毒性，据记载透骨草全株煎水去渣后喷洒菜青虫、蛆等害虫，杀虫率可达100%。在我国分布广泛，河北是产地之一（别名为药曲草）。近年来，国内外学者陆续研究了透骨草全株、根、地上部分提取物对家蝇、黏虫、淡色库蚊、菇蝇、黏虫和小菜蛾幼虫等的杀虫活性，表明透骨草对上述害虫均有明显的杀虫活性，但对豆蚜、无翅成蚜、苹果黄蚜、白粉虱、叶螨没有明显效果。本实验通过超声波提取、萃取透骨草，得到的有效成分进行蚜虫体外杀虫活性测定，为透骨草在新型植物源农药研制方面提供参考依据。

一、材料与方法

1.实验材料

（1）植物：透骨草（Phryma leptostachya L.）干燥全草，购于药店。

（2）设备：电子天平、AS系列超声波清洗机、粉碎机、旋转蒸发仪、循环水式多用真空泵、电热恒温鼓风干燥箱、冰箱、智能编程人工气候箱。

（3）试虫：桃蚜（Myzus persicae S.）采于校园未喷洒农药的桃树树叶上，为自然种群。

2.实验方法

（1）透骨草提取物的制备

将全株透骨草干品打粉过60目筛。准确称取透骨草干燥粉末与90%甲醇溶液混合冷渍1天，60℃条件下超声波辅助提取，再抽滤，完成后收集滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩成浸膏，干燥后收集称重计算得率。放入4℃冰箱中保存。得到浸膏即为透骨草甲醇提取物。

（2）三种溶剂对透骨草提取物的萃取

将透骨草甲醇提取物浸膏加水溶解，加入等量石油醚溶液，超声波辅助萃取，分离水相和石油醚相。继续向水相中加入同等体积乙酸乙酯和正丁醇，进行萃取，分离得乙酸乙酯相和正丁醇相。分离后石油醚相、乙酸乙酯相和正丁醇相分别用旋转蒸发仪减压浓缩成浸膏，称重计算得萃取率。

（3）透骨草甲醇提取物不同溶剂萃取相对蚜虫生物活性测定

将得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物，分别配成0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升、4毫克/毫升浓度进行蚜虫的触杀活性测定，比较不同溶剂萃取物对蚜虫的生物活性效果。载毒叶片法：选取大小相同、新鲜程度一样的树叶浸入药液中，20秒后取出风干，对照组以丙酮溶液做相同处理。于培养皿底部垫上湿润滤纸，待叶片上溶剂挥发后将叶片放入培养皿中，每个培养皿中接入20头个体大小相同、健康活波的无翅蚜虫，重复3次。放置于人工气候箱中培养。24小时后观察记录中毒症状，计算死亡率与校正死亡率。

二、结果讨论

1.甲醇对透骨草的提取率

300克透骨草得到提取物37.38克，可知甲醇对透骨草有效成分的提取率为12.46%。

2.三种有机溶剂对透骨草甲醇提取物的萃取率

石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取后得到萃取物质量分别为0.93克、2.34克、3.84克，萃取率分别为0.31%、0.78%、1.28%。可以看出，乙酸乙酯和正丁醇比较适合透骨草提取物的进一步萃取纯化。

3.透骨草不同溶剂萃取物对蚜虫的生物活性测定

（1）三种溶剂萃取物对蚜虫的毒杀效果

结果表明：不同浓度3种萃取物对蚜虫的毒杀活性有显著差异（p＜0.05）。4毫克/毫升石油醚萃取物对蚜虫的校正死亡率显著高于其它处理组；4毫克/毫升、2毫克/毫升、1毫克/毫升的乙酸乙酯萃取物对蚜虫的校正死亡率均显著高于0.5毫克/毫升组；4毫克/毫升、2毫克/毫升的正丁醇萃取物对蚜虫校正死亡率显著高于1毫克/毫升、0.5毫克/毫升处理组。说明高浓度的溶剂萃取物毒杀蚜虫活性明显高于低浓度组，乙酸乙酯萃取物毒杀活性总体最好，在浓度为4毫克/毫升时矫正死亡率达85.07%，其次是石油醚萃取物。

（2）三种溶剂萃取物对蚜虫毒杀作用的回归分析

通过对比不同浓度3种溶剂萃取物对蚜虫的毒杀活性回归方程及LC50分析，在相同处理时间内，不同提取物和萃取物处理浓度与毒杀蚜虫的校正死亡率之间均呈现正相关关系。乙酸乙酯萃取物的致死中浓度（LC50）值最低，说明其对蚜虫的毒杀活性最强，其次是石油醚萃取物和正丁醇萃取物。因此从这个角度分析可以说明，对蚜虫的毒杀活性依次为乙酸乙酯萃取物＞石油醚萃取物＞正丁醇萃取物。

表1 三种溶剂萃取物对蚜虫毒杀效果的方差分析和多重比较（S±M）

表2 三种溶剂萃取物对蚜虫的毒杀作用回归方程及LC50

三、结论

本试验测定了不同浓度提取物和萃取物对蚜虫的毒杀效果。结果显示，乙酸乙酯对透骨草有效杀虫成分萃取效果较好。在4毫克/毫升浓度处理下，各组分萃取物均有明显的毒杀活性效果，但乙酸乙酯的毒杀活性效果最强达到85.07%，且在处理浓度为0.5毫克/毫升、1毫克/毫升、2毫克/毫升时，乙酸乙酯的毒杀作用效果均比其它萃取物效果好。因此综合不同溶剂对透骨草提取物的萃取率和对蚜虫的毒杀效果，认为乙酸乙酯更适合作为透骨草提取物的萃取剂来防治蚜虫。