不明原因复发性流产患者血清中TIPE2水平表达及与 炎症因子相关性分析

梁红梅，张仿珍，余红秀，张翅飞

(深圳市龙华区妇幼保健院妇产科，广东 深圳 518109)

0 引言

不明原因复发性流产(Unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)是指与同一个配偶连续发生2次及以上原因不明的胚胎自然丢失或停止发育，约占复发性流产的40%，给URSA患者的诊断、治疗及预防带来极大的挑战[1-2]。随着免疫学不断深入研究发现，URSA的发生和发展与辅助性T细胞1/辅助性T细胞2(Th1/Th2)比例失衡而导致母胎界面免疫耐受异常有关，其中Th1细胞分泌的细胞因子水平升高不利于妊娠，而Th2细胞分泌的细胞因子水平升高有利于妊娠，而肿瘤坏死因子α诱导蛋白-2(tumor necrosis factor α induced protein-2，TIPE2)是维持免疫稳态的一种重要调控蛋白，多种分子通过调节TIPE2水平表达来调控机体的免疫功能，从而影响疾病的预后和转归[3-6]。为此，本研究对URSA和有2次或以上怀孕成功且活产的非妊娠健康妇女血清中TIPE2水平及其与IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平的相关性进行了对比研究分析，旨在探讨TIPE2在URSA发病中的作用，现报导如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2019年5月至2020年11月在深圳市龙华区妇幼保健院妇科就诊的URSA患者97例为 URSA组，年龄23～41岁，平均(32.05±8.47)岁；孕次2～5次，平均(3.18±1.03)次。其中<25岁26例，25～30岁22例，31～35岁29例及>35岁20例；孕2次29例，孕3次41例及孕>3次27例。URSA诊断标准依据《原因不明复发性流产的基础与临床研究进展》[7]，并排除夫妇染色体异常、内分泌异常、解剖异常、感染及抗磷脂综合征导致的流产。同期健康体检有2次或以上怀孕成功且活产的非妊娠妇女106名为对照组，年龄22～43岁，平均(31.42±9.17)岁，孕次2～4次，平均(2.71±0.89)次。其中<25岁31例，25～30岁25例，31～35岁31例及>35岁19例；孕2次37例，孕3次41例及孕>3次28例。比较两组的年龄和孕次等一般性资料，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究已经同医院伦理委员会批准同意，且患者及家属知情并签定知情同意书。

1.2 仪器与试剂

AE275全自动酶联免疫分析仪由深圳爱康科技有限公司提供；TIPE2，IFN-α，IL-17，IL-22，IL-6及IL-10试剂盒由上海江莱生物科技有限公司提供。

1.3 方法

采集空腹静脉血3～5mL 于无抗凝剂的干燥管内，室温静置30min后离心分离血清，采用酶联免疫吸附法(ELISA)对TIPE2，IFN-α，IL-17，IL-22，IL-6及IL-10水平进行测定。所有操作均严格按仪器和试剂盒说明书进行。

1.4 统计学分析

运用GraphPad Prism 5统计软件。计量资料用(±s)表示，比较采用t检验；计数资料以率(%)表示，比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组TIPE2水平比较

URSA组 血 清 中TIPE2水 平 为(391.52±57.64)ng/L，明显低于对照组的(682.76±71.08)ng/L，差异有统计学意义(t=5.2647，P<0.05)。

2.2 两组IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比较

URSA组IFN-α、IL-17及IL-22水平明显高于对照组，而IL-6和IL-10水平明显低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)，结果见表1。

表1 URSA组和对照组IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比较(±s)

表1 URSA组和对照组IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平比较(±s)

组别 例数 IFN-α(ng/L) IL-17(pg/mL) IL-2(pg/mL) IL-6(pg/mL) IL-10(pg/mL)URSA组 97 30.15±2.97 59.28±14.65 184.26±19.52 76.29±5.62 7.95±0.68对照组 106 12.63±1.14 31.04±11.82 103.47±16.35 124.72±13.89 18.02±1.94 t 7.0641 5.0613 6.0542 4.8172 8.2767 P<0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05

2.3 不同年龄及流产次数URSA患者TIPE2及炎症因子水平比较

不同年龄及流产次数URSA患者TIPE2、IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平之间差异均无统计学意义(P>0.05)，结果见表2。

表2 不同年龄及流产次数URSA患者TIPE2及炎症因子水平比较(±s)

表2 不同年龄及流产次数URSA患者TIPE2及炎症因子水平比较(±s)

因素 n TIPE2(ng/L) IFN-α(ng/L) IL-17(pg/mL) IL-22(pg/mL) IL-6(pg/mL) IL-10(pg/mL)年龄(岁)<25 26 403.97±59.82 31.04±3.12 58.97±13.92 183.86±18.75 80.16±5.93 8.15±0.72 25～30 22 397.60±58.05 30.27±2.90 60.32±15.49 187.54±20.93 78.37±5.71 8.02±0.65 31～35 29 395.74±57.21 29.68±2.85 59.26±14.53 180.62±17.68 77.03±5.46 7.83±0.60>35 20 382.23±56.86 28.92±2.79 57.92±13.87 171.73±17.06 74.94±5.29 7.61±0.57 F 1.1067 1.2870 0.9782 1.3064 1.0693 1.2058 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05流产次数(次)2 29 390.06±57.15 28.71±2.85 61.05±16.28 172.54±17.65 80.03±6.12 8.17±0.72 3 41 382.98±56.26 31.09±2.91 58.20±14.09 180.26±18.94 79.29±5.97 8.05±0.69>3 27 405.26±61.20 32.25±3.01 57.64±13.95 183.09±18.90 75.21±5.56 7.59±0.58 F 1.0672 1.3715 0.9851 1.1982 1.3054 1.2063 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05 >0.05

2.4 相关性分析

经Spearman相关性分析，TIPE2与IFN-α、IL-17及IL-22水平呈负相关(r=-0.8241，-0.7054及-0.6729，P<0.05)，而与IL-6和IL-10水平呈正相关(r=0.5905，0.6419，P<0.05)。

3 讨论

URSA是一种病因和发病机制至今未明的妇科常见疾病。研究表明，URSA发病与染色体、血栓、生殖结构异常、生殖感染、内分泌失调及精液异常等多种因素无关，其发病率约为1%～5%，且有逐年上升趋势[8-9]。URSA不仅严重影响妇女顺利生育，造成夫妻双方巨大的社会和心理压力，对妇女身心健康造成伤害，还可引起一系列的家庭与社会问题，同时也是导致继发不孕的重要原因之一。因此，加强URSA病因及发病机制研究，对URSA诊断、治疗及预防具有重要意义。

妊娠过程中，Th1细胞对滋养层细胞产生细胞毒性作用，造成免疫损伤，影响胚胎发育，导致胚胎丢失，而Th2细胞维持母体与胚胎间的免疫耐受，维持妊娠成功，在正常妊娠过程中占主导地位。有研究表明，Th1/Th2细胞因子比例失衡在URSA发病中发挥了重要的作用[3,5,8]。TNF-α是一种Th1型细胞因子，可分解滋养细胞的DNA，使其变形，并刺激分泌血栓素的细胞，导致胎盘血管微血栓形成，从而抑制胚胎生长[10-11]。IL-17是一种主要由活化的T细胞产生的致炎细胞因子，可促进T细胞的激活和刺激上皮细胞、内皮细胞及成纤维细胞产生多种细胞因子，从而导致炎症的产生。IL-22是由多种免疫细胞分泌的一种细胞因子，其主要功能是促进组织的增殖、再生及调节宿主的黏膜屏障防御，但其还可引起组织病理性的炎症反应。近年来，有研究表明，IL-22在感染、自身免疫性及肿瘤等疾病中发挥独特的作用[9,12-14]。IL-6和IL-10都是Th2型细胞因子，其中IL-6通过对B细胞刺激作用影响着母体的免疫机制，限制并降低排斥作用，确保胎儿的安全性，而IL-10是一种参与免疫调节及具有免疫抑制功能的细胞因子，其除了可以诱导滋养细胞及母胎界面单核细胞HLA-G基因和蛋白表达增加和单核细胞表面的MHC-Ⅰ型和Ⅱ型抗原表达降低外，还可抑制Th1细胞分泌Th1型细胞因子[10-12,15]。本研究结果显示，URSA患者IFN-α、IL-17及IL-22水平比对照组明显升高，而IL-6和IL-10水平比对照组明显降低(P<0.05)，这表明URSA患者体内可能存在Th1/Th2细胞因子比例失衡现象，其中Th1细胞因子可能在URSA发病过程中占居主导地位。

TIPE2是近年来新发现的与免疫、炎症及肿瘤相关的一种调节因子，为肿瘤坏死因子α诱导蛋白8(Tumor necrosis factor α induces protein 8，TNFAIP8)家族成员之一[16-17]。有研究表明，TIPE2具有免疫负向调控功能，其表达水平降低可加重脓毒性休克时炎症反应，维持巨噬细胞、中性粒细胞、树突细胞及T和B细胞等免疫应答反应，参与多种疾病的发生和发展有关。本研究结果显示，URSA患者TIPE2水平比对照组明显降低(P<0.05)，与有关文献报导的基本一致[4,10,18]，这表明TIPE2在URSA发病中发挥了重要的免疫负向调节作用，这可能与其水平降低促进T淋巴细胞增殖和免疫活性有关。此外，研究结果显示，不同年龄及流产次数的URSA患者TIPE2、IFN-α、IL-17、IL-22、IL-6及IL-10水平之间差异无统计学意义(P>0.05)，同时TIPE2与IL-6和IL-10水平呈正相关，而与IFN-α、IL-17及IL-22水平呈负相关(P<0.05)，这可能与TIPE2在淋巴组织、T和B淋巴细胞呈高度表达，并在IFN-α的诱导后表达于其他细胞，其水平降低减弱了其对免疫负向调控的能力，从而导致Th1/Th2比例失衡有关，但其具体作用机制仍不明，有待进一步研究。

综上所述，TIPE2水平在URSA患者血清中明显降低，且与IL-6及IL-10水平呈正相关，而与IFN-α、IL-17及IL-22水平呈负相关，TIPE2在URSA发病中的作用可能与其水平降低导致Th1/Th2比例失衡有关。因此，加强TIPE2及其他细胞因子水平监测，对URSA患者的诊断、治疗及预防有一定的参考价值。