慢性心力衰竭患者血清LncRNA MEG3表达水平及临床意义

刘宁，汤秀英，张婷

慢性心力衰竭（CHF）是常见的心血管疾病并发症，可严重降低患者生活质量及生命健康，发病率逐年增加，尽早诊断进行有效治疗对改善预后十分重要[1,2]，寻找相关生物标志物对患者进行早期诊断及临床监测确有必要。长链非编码RNA（lncRNA）作为一类非编码RNA参与心力衰竭（心衰）[3]的发生发展进程。lncRNA人母系表达基因3（MEG3）被发现与急性心肌梗死等不良心血管疾病的发生密切相关[4]，抑制MEG3表达可改善心肌梗死模型大鼠心肌损伤及小鼠心肌肥大[5,6]。心肌梗死造成的心肌损伤及心肌肥大是导致心衰的危险因素[7]。目前关于MEG3在CHF临床中的研究较少，本研究通过对CHF患者血清LncRNA MEG3表达水平及临床意义的探究，以期为CHF的发生机制及临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2017年9月～2019年12月于保定市第一中心医院收治的确诊CHF患者115例为CHF组，其中男性53例，女性62例，平均年龄（60.75±6.69）岁，病程（4.05±1.74）年；根据美国纽约心脏协会（NYHA）对心功能分级将患者分为：Ⅰ级37例，Ⅱ级28例，Ⅲ级26例，Ⅳ级24例[8]；选取同时期本院健康体检者82例为对照组，其中男性32例，女性50例，平均年龄（59.26±7.41）岁。纳入标准：符合《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》中CHF的诊断要求[9]；临床资料完整；肾肺功能均正常。排除标准：合并恶性肿瘤及其他代谢性疾病患者；心肌梗死、先天性心脏病、心律失常等其他心脏疾病。所有受试者及家属均签署同意书，并经我院伦理委员会批准。

1.2 主要试剂与仪器反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒（货号：BTN170403-RFS、BTN90408-YNZ）购自北京百奥莱博科技有限公司；总RNA提取试剂盒（货号：CD-13433-ML）购自武汉纯度生物科技有限公司；N末端脑钠肽前体（NT-proBNP）ELISA试剂盒货号：SBJ-H0539）购自南京森贝伽生物科技有限公司；CFX384™Touch荧光定量PCR系统购自伯乐（Bio-Rad）公司；AU5800全自动分析系统购自美国贝克曼库尔特有限公司；SPRT2100C全自动酶标仪购自德国IFP公司。

1.3 研究方法入选者均空腹抽取静脉血4 ml，经3000 rpm离心10 min后，取上清行生化指标及MEG3表达检测。超声心动图测量左室射血分数（LVEF）及左室舒张末期内径（LVEDD）。严格按照ELISA法检测试剂盒说明书检测两组血清样本的NT-proBNP水平。用RNA提取试剂盒提取各血清样本总RNA后反转录为cDNA，并以其为模板经过qRT-PCR检测MEG3在各组血清中的表达情况。β-actin作为内参对待测mRNA进行标准化，2-△△Ct分析其表达水平，Oligo 7和Primer 3.0软件设计如表1所示引物并送至生工生物工程（上海）股份有限公司进行合成。

表1 引物序列

1.4 随访患者出院后随访1年，每3月复查一次，每次均行心功能分级及心脏彩超检测，以判断是否发生心脏不良事件（心力衰竭复发、心源性死亡），若发生则随访终止。

1.5 统计学方法计量资料用平均数±标准差（±s）进行描述，SPSS 23.0统计学软件对数据进行分析，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间有差异进一步采用LSD-t检测；计数资料以例表示，采用卡方检验；MEG3表达与NT-proBNP、LVEF、LVEDD间相关性采用Pearson相关系数法进行分析；受试者ROC工作特征曲线评估样本中MEG3表达水平对CHF的诊断价值；使用Logistic回归分析影响CHF预后的因素，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较两组受试者年龄、BMI、性别、高血压史、吸烟史和糖尿病史间无显著性差异（P＞0.05），表2。

表2 两组受试者一般资料比较

2.2 两组血清中NT-proBNP水平、LVEF和LVEDD比较与对照组比较，CHF组患者血清中NT-proBNP水平、LVEDD、MEG3表达显著增加，而LVEF则显著降低（P＜0.05），表3。

表3 两组血清中NT-proBNP水平、LVEF和LVEDD比较

2.3 CHF不同严重程度患者血清中MEG3比较CHF患者血清中MEG3表达水平随疾病严重程度（Ⅰ级 vs. Ⅱ级 vs. Ⅲ级 vs. Ⅳ级）显著增加（1.15±0.15 vs. 1.31±0.26 vs. 1.42±0.31 vs. 1.57±0.30），P＜0.05。

2.4 CHF组血清中MEG3表达与NT-proBNP、LVEF、LVEDD的相关性CHF组血清中MEG3表达与NT-proBNP、LVEDD均呈显著正相关（r=0.359，P=0.001；r=0.487，P=0.000），而与LVEF呈显著负相关（r=-0.461，P=0.000）。

2.5 ROC特征曲线分析MEG3对CHF发生的诊断价值MEG3评估CHF发生的ROC曲线下面积0.771（95%CI：0.704～0.837），截断值：1.237，灵敏度：61.74%（95%CI：52.20～70.6），特异性：91.46%（95%CI：83.20～96.50），图1。

图1 ROC特征曲线分析MEG3对CHF发生的诊断价值

2.6 Logistic回归分析影响CHF预后的因素以CHF患者是否发生心脏不良事件为因变量（未发生=0，发生=1），以MEG3、年龄、心功能分级为自变量（赋值：MEG3：＜1.237=0，≥1.237=1；病程：＜5年=0，≥5年=1；心功能分级：Ⅰ+Ⅱ级=0，Ⅲ+Ⅳ级=1），进行多因素Logistic回归分析发现MEG3≥1.237、年龄≥5年、心功能分级（Ⅲ+Ⅳ级）均是导致CHF患者发生心脏事件的独立危险因素（P＜0.05），表4。

表4 Logistic回归分析影响CHF发生的因素

3 讨论

心脏的运动无法维持有氧运动所需的排血量是CHF的主要原因[10]，心衰造成的心内压填充压力不足会导致肺疲劳、呼吸困难等症状的发生，是患者死亡的主要原因[11,12]。

CHF目前最常见的临床诊断指标是血清NTproBNP含量，但易受药物、非心衰疾病、肾功能等因素的影响，出现假阳性升高[8]。lncRNA是一种长度大于200个核苷酸的非编码RNA，大量报道称其参与心血管疾病的发生发展[2,11]。MEG3是一个高度保守的lncRNA，研究发现，抑制其在小鼠脏成纤维细胞表达可降低心肌肥大、心脏纤维化，改善舒张功能障碍；心肌肥大可导致心脏收缩功能减弱，从而增加心衰和猝死的风险[9]。缺血性心肌梗死（MI）是诱发CHF的主要原因之一，阿托伐他汀可通过抑制MEG3表达来保护小鼠缺氧心脏祖细胞（CPC）免受缺氧诱导的心肌损伤。研究发现急性心肌梗死（AMI）血清MEG3表达显著增加，与心肌损伤程度密切相关，用于判断患者预后。本研究发现CHF组患者血清中MEG3表达显著增加，且表达水平随疾病严重程度显著增加，其表达与NT-proBNP、LVEDD均呈显著正相关，而与LVEF呈显著负相关。该结果表明，MEG3可能参与CHF的发生发展，有成为疾病临床监测指标的可能。

此外，MEG3评估CHF发生灵敏度61.74%，特异性91.46%；MEG3≥1.237、年龄≥5年、心功能分级（Ⅲ+Ⅳ级）均是导致CHF患者发生心脏不良事件的独立危险因素。提示MEG3影响CHF的发生，其具有较好的诊断特异性，对疾病诊疗体系进行了进一步完善，其有作为CHF早期诊断及预后评估指标的潜能。

综上所述，MEG3参与CHF的发生发展，其表达情况与疾病严重程度及心功能状态密切相关，有作为疾病严重程度及预后评估指标的潜能。本研究不仅为CHF的生物标志物的研究提供参考，还对研究疾病的治疗靶点及发生机制具有重要意义。由于病例样本限制，统计学结果可能存在一定误差，会进一步扩大样本量对其验证。