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中药糖蛋白的研究进展

2021-11-03唐雅楠韩喜桃刘子琴

天然产物研究与开发 2021年10期
关键词:糖蛋白活性中药

唐雅楠,韩喜桃,刘子琴,杜 红

北京中医药大学中药学院,北京 102488

糖蛋白是指由寡糖与多肽链共价连接而成的一类结合蛋白质[1],广泛存在于植物、动物和微生物中[2]。近年来对糖蛋白的研究日益增多,许多研究发现它具有显著的药用功效和保健功能,如免疫调节、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等[3],吸引着包括化学、生物学、细胞生物学、食品科学等众多学科在内的工作者从事这一领域的研究。这也引起了中医药领域学者们的关注,许多学者对部分中药材进行了相关研究,如黄芪[4]、枸杞[5]、土鳖虫[6]等,并取得了一定成果。本文就近年来对中药糖蛋白的研究作一概述,以期为中药材物质基础的研究及糖蛋白类药物的研发提供参考。

1 糖蛋白提取

糖蛋白兼具多糖和蛋白质的某些性质,大多数可溶于水、稀盐、稀酸和稀碱等溶液,因此,目前用于中药糖蛋白提取的方法主要有水提、稀盐溶液和缓冲溶液浸提、酸碱溶液提取以及酶解法[7,8]等。在进行提取工艺优化时,常以蛋白质提取率或糖提取率为指标,也有研究将所得糖蛋白干燥后,以重量法计算所得粗糖蛋白得率为指标。具体见表1。

表1 糖蛋白提取方法Table 1 Methods for glycoprotein extraction

1.1 水浸提法

由于糖蛋白中糖链的多羟基结构,大多数糖蛋白具有高度亲水性,因此水提法是糖蛋白提取的常用方法之一。水提法较其他方法更为经济,且工艺简单,但提取过程中常产生较多水溶性杂质,降低提取率。水提法在进行工艺优化时,通常考察提取时间、提取温度、提取次数和料液比。

1.2 盐溶液浸提法

由于盐离子能与糖蛋白的蛋白质部分结合,使其不易变性,稀盐和缓冲溶液浸提法是糖蛋白提取最常用的方法[27]。应用该方法进行提取,提取率高,且所得糖蛋白完整性和生物活性都较高,但后续需进行脱盐处理[7]。Deng等[9]在进行霍山石斛糖蛋白提取时,通过SDS-PAGE条带染色分析,发现NaCl溶液浸提法获得的糖蛋白谱带在浓度、数量和分子量范围上都显著高于水提法。Li[28]从黄芪中提取糖蛋白时,通过测定蛋白质和糖的得率及SDS-PAGE胶图分析对包括Tris-HCl缓冲液提取、水提、醇提和碱提酸沉在内的4种提取方法进行比较,结果以Tris-HCl缓冲液提取法提取率最高。稀盐溶液浸提法通常需要考察盐浓度、提取时间、提取温度、提取次数和料液比,缓冲液提取还要考察pH。

1.3 酸碱提取法

糖蛋白中的蛋白质是具有等电点的两性电解质,提取溶剂的pH应偏离等电点,一般碱性蛋白质用偏酸性溶液提取,酸性蛋白质则用偏碱性溶液[27]。用酸碱提取法提取糖蛋白时,要注意提取溶剂不能过酸、过碱,以避免糖蛋白发生不可逆变化导致活性丧失。

1.4 乙醇浸提

采用乙醇浸提法可以提取到部分不溶于水但可溶于乙醇的糖蛋白。Li等[29]采用50%乙醇对山茱萸进行提取时,能够得到对α-葡萄糖苷酶活性抑制率最高糖蛋白。Lee等[30,31]对龙葵、栀子糖蛋白进行研究时,均采用醇提法进行提取,将药材用95%或99%乙醇于黑暗中浸泡3~4个月后,经硫酸铵沉淀、柱色谱洗脱、透析等分离纯化得到糖蛋白纯品。但醇提法耗时久、溶剂耗用量大,生产成本较高,一般应用较少。

1.5 酶解法

酶解法能使不溶性糖蛋白分解为可溶性糖肽、游离肽或氨基酸,提高提取效率,并且由于酶的专一性和选择性,能够排除部分杂质,提高得率。应用酶解法提取糖蛋白时,要综合考虑酶的种类、用量、酶解时间和温度等,但目前酶解法在中药糖蛋白提取中应用较少,酶解条件和酶的种类都还需要进一步探讨。

1.6 其他设备辅助提取

为提高效率,在提取糖蛋白时也会使用辅助设备,其中比较常用的是超声波或微波辅助提取法,这两种技术均能够使原料的细胞壁易于破碎,有利于糖蛋白的溶出,从而达到缩短时间、增加得率的效果。Wang等[10]在进行覆盆子糖蛋白提取时,对水浸提及超声提取进行了比较,超声提取法可将糖蛋白得率由7.526%提升至10.259%,并将提取时间由4 h缩短至20 min。Wang[32]应用NaCl溶液浸提和超声提取法提取丹参糖蛋白,发现超声提取可提高糖蛋白得率、缩短提取时间并降低溶剂盐浓度。Chen等[11]在提取蒲公英糖蛋白时,对稀盐溶液浸提及超声提取进行了比较,超声提取虽然将提取时间由3 h缩短至15 min,但得率由0.44%下降为0.26%,考虑到该研究提取液未经除杂处理,得率下降可能是其他成分溶出增加导致。超声波或微波辅助提取法除考察料液比、提取温度、提取时间和提取次数外,还需要考察频率及功率。

目前糖蛋白提取最常用且较为成熟的提取方法为Tris-HCl缓冲液提取,该方法较水提法提取率高,较稀盐溶液或其他缓冲液提取所需温度低、时间短,但将Tris-HCl缓冲液提取与设备辅助提取相结合进行工艺优化的研究较少。此外,超高压技术(ultrahigh pressure processing,UHPP)是一种近几年发展起来的新型提取技术,研究[33]表明该提取法由于压力较高,极大地加快了溶剂浸润和溶质扩散过程,能够缩短提取时间、提高提取率并减少杂质含量,且耗能低,适用于大生产。但超高压容易影响蛋白质、核酸等生物大分子的立体结构,使其变性或失活,目前该方法在中药糖蛋白提取中应用较少[34],其是否适用于糖蛋白提取、在何种压力条件下能够提高提取效率并保证糖蛋白完整性,还要进一步探讨。

2 糖蛋白分离纯化

糖蛋白的分离纯化是指除去杂质获得单一糖蛋白组分的过程,一般流程为先除去提取物中的大量游离蛋白、多糖和小分子杂质,再进一步分离纯化。

2.1 初步纯化

初步纯化阶段要将提取液中的非糖蛋白组分除去,一般是先除去游离蛋白质,再除去其他小分子杂质,最后得到粗糖蛋白。脱蛋白常用的方法为Sevage试剂法,由于样品蛋白质含量不同,具体次数和比例需通过实验验证[24]。对于粗糖蛋白中其他小分子杂质,一般通过透析法除去[35-37],也有学者采用超滤法对糖蛋白进行初步纯化[38]。除去杂质后,常需采用硫酸铵或醇沉的方法,将糖蛋白从提取液中分离出来,对于应用碱性溶液提取的糖蛋白,也可以采用碱提酸沉法[39]。

2.2 分级纯化

分级纯化是将粗糖蛋白中的单一组分分离。最常用的方法是阴离子交换柱层析、凝胶柱层析法。阴离子交换柱层析以二乙基氨基乙纤维素(diehlaminoethy)应用最为广泛,适用于分离各种酸性、中性或碱性的糖蛋白;凝胶柱层析由于价格昂贵,一般在用其他柱层析法处理后再使用。此外还有亲和柱层析法、超离心法、区带电泳法等。具体方法见表2。

表2 糖蛋白的分离纯化Table 2 Separation and purification of glycoprotein

续表2(Continued Tab.2)

糖蛋白的分离纯化技术已趋于成熟,多采用硫酸铵或乙醇沉淀、Sevage试剂除去游离蛋白、透析除盐进行初步纯化,再通过阴离子交换柱层析、凝胶柱层析法、亲和柱层析法等进行分级纯化。初步纯化阶段硫酸铵、Sevage试剂的用量及Sevage试剂中正丁醇、氯仿的比例,需要根据样品进行考察;而分级纯化则需要对洗脱液进行追踪检测。总体而言,目前糖蛋白的分离纯化过程还较为复杂繁琐,无法适用于大生产,对中药糖蛋白的进一步开发及应用,如新型药物的研发、保健食品的开发等有所限制。

3 糖蛋白结构和组成分析

3.1 糖蛋白的纯度鉴定

分离纯化得到的糖蛋白在进一步分析前需要进行纯度鉴定,高纯度的糖蛋白是结构鉴定的基础。一般而言,糖蛋白的纯度需要两种以上的方法进行验证,常用方法有凝胶层析法、亲和层析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和高效液相色谱法,若结果得到单一对称的洗脱峰,或显色位置相同,则证明糖蛋白是均一组分。如Zhang等[42]通过毛细管区带电泳法、聚丙烯酰胺凝胶法、高压柱层析法等对人参糖蛋白进行纯度鉴定,所得结果均显示单一对称峰或染色带位置相同,表明经分离纯化后得到的人参糖蛋白为均一组分。此外,Shi等[43]采用尺寸排阻色谱-多角度激光光散射联用仪(SEC-MALLS)对锁阳糖蛋白组分CSG-1进行分析,所得色谱图呈对称峰,表明CSG-1是均一组分。SEC-MALLS法对任何相对分子质量(Mr)范围的高分子化合物,都可获得样品洗脱图中每一级分点的浓度和Mr,无需对照品即可得到准确的样品Mr及其分布[44],非常适合进行聚合物分子量及其分布的测定,但目前在糖蛋白鉴定中应用较少。

3.2 糖蛋白糖肽键连接类型鉴别

糖肽键是糖链和肽链的连接键。N-型糖肽键和O-型糖肽键,前者对碱稳定,后者可在NaOH作用下发生β-消除反应,使糖肽链上的丝氨酸、苏氨酸分别转化为在240 nm处产生明显紫外吸收的α-氨基丙烯酸和α-氨基丁烯酸。基于此,研究人员[45,46]一般取糖蛋白样品溶于氢氧化钠溶液中反应,以溶于水的样品为对照,比较240 nm处的紫外吸收峰,对糖蛋白的糖肽键类型进行初步判断。

3.3 糖蛋白糖链的结构分析

对于糖链结构的分析方法多样,如凝集素法、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应、红外光谱法、核磁共振等[2]。Zhao等[22]采用凝集素微阵列技术,以荧光强度为标准筛选出与生姜糖蛋白特异性结合的5种凝集素:VVA、ConA、STL、LCA 及 LEL,由此推测出生姜糖蛋白可能存在GlaNAc、mannose、GlcNAc、mannose和LacNAC等糖链结构。Sun等[35]通过红外光谱分析、Smith降解和高碘酸氧化推测,升麻糖蛋白组分CF-Ⅰ的糖链结构为α-吡喃型糖苷键,主要以1→4、1→6糖苷键连接而成。Du[47]对从薏苡仁糖蛋白组分TDBP-a、b进行红外光谱分析,结果显示二者均含有吡喃环。

3.4 单糖及氨基酸的组成分析

在对糖蛋白中单糖组成进行分析时,最常采用的方法是将糖蛋白衍生化处理或水解后,使用气相色谱法进行分析,如Li等[48]对黄芪糖蛋白进行糖腈乙酸酯衍生物法处理后,进行气相色谱分析;Wang[49]对兰州百合糖蛋白进行三氟乙酸水解、糖腈乙酸酯衍生化处理后采用 GC-MS分析;此外,纸层析法[32]、薄层色谱法[42]、高效液相色谱法[50]等也常常使用。对氨基酸组成的分析,一般选择酸水解后使用氨基酸自动分析仪进行分析[32,42],也有学者采用高效液相色谱法[49,50]。

目前糖蛋白在结构方面的探索还不够深入,主要集中于对多糖与氨基酸组成及含量的分析、糖链及糖肽链的初步判断上。而糖蛋白作为寡糖与多肽链共价相连的结合蛋白,其单糖与氨基酸的组成、含量及排列顺序,糖链、肽链及糖肽链的结构都可能影响糖蛋白的药理活性,因此对糖蛋白结构的探索还有待进一步深入。

4 中药糖蛋白的药理作用

研究发现从中药材中提取得到的糖蛋白具有一种或多种药理活性,主要包括免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等,具体见表3。

表3 中药糖蛋白的药理作用Table 3 Pharmacological actions of glycoprotein from Chinese materia medica

4.1 免疫调节作用

肉桂糖蛋白[51]能够增强细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性,对B细胞产生免疫球蛋白(Ig)和单核细胞产生白细胞介素(IL-1)有促进作用;山药[52]及丹参[53]糖蛋白均能明显增强小鼠免疫器官胸腺器官指数及巨噬细胞吞噬功能,促进T细胞的增殖、分化及体液免疫中抗体的生成,这表明以上三者对非特异性免疫、体液免疫和细胞免疫作用均有增强作用,其中山药糖蛋白可能是通过调节MAPK和NF-κB信号通路来发挥免疫调节作用的;兰州百合糖蛋白[49]能够明显促进RAW 264.7细胞的增殖、释放NO及分泌TNF-α的能力,且呈现一定的浓度依赖性,表明兰州百合糖蛋白能促进 RAW 264.7细胞的大量增殖,并激活其免疫功能。

此外,许多学者发现黄芪糖蛋白具有免疫抑制作用。Yang等[54]发现黄芪糖蛋白在T细胞增殖早期对其有抑制作用,在高浓度(10 μg/mL)下能显著抑制双向混合淋巴反应,该反应相当于体外的同种异体排斥反应,说明黄芪糖蛋白能够抑制排异反应。Zhao[55-57]、Zhang[58,59]、Xing[60]、Zhang[61]等学者发现黄芪糖蛋白对佐剂性关节炎大鼠的关节炎症及实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的临床症状有缓解作用,研究发现黄芪糖蛋白能够通过调节凋亡相关因子Fas、FasL、Bax、Bcl-2的表达水平诱导脾细胞凋亡,上调转录因子Foxp3的表达,显著降低外周血中 CD3+CD28+、CD3+CD278+细胞的比例,抑制促炎趋化因子CCL2和CCL5的表达,减少炎性因子的释放,且实验显示黄芪糖蛋白在抑制其他炎性因子如TNF-α、IL-2的同时能够提高IFN-γ的分泌,表明黄芪糖蛋白在发挥免疫抑制作用的同时能够在一定程度上避免其他感染,表现出双向调节的优势,为代替目前常用但毒副作用较大的免疫抑制剂如硫唑嘌呤、环磷酰胺等[62]提供了可能。

4.2 降血糖作用

α-糖苷酶抑制剂是治疗2型糖尿病的常用药物之一,其通过与α-糖苷酶的竞争性抑制,延缓寡糖、淀粉等的分解,减缓葡萄糖吸收速度,达到降糖目的[63],其不良反应相对较小,但目前临床应用较多的药物如阿卡波糖等,也存在用药后可能出现肠胃不适、腹胀等问题[64]。而中药治疗糖尿病则具有多靶点、多途径、生物效应相对缓和、不良反应少等优点[65],研究发现许多中药糖蛋白具有α-糖苷酶抑制活性。

Sharma[66]、Yang等[67]均从山药中分离得到了具有α-糖苷酶抑制作用的糖蛋白纯品,Yang认为其抑制能力的强弱可能与多糖含量有关。Qiao[68]从淫羊藿中分离纯化得到的淫羊藿糖蛋白组分Ⅱ,能够抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性,抑制作用较阿卡波糖缓和。Tang等[69]分离得到分子量约118.8 kDa的山茱萸糖蛋白GoGP,能够抑制α-淀粉酶活性,其抑制类型表现为反竞争抑制。Zhao等[70]发现桔梗糖蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制作用随浓度增大而增加,其抑制能力及抑制趋势与阳性药阿卡波糖相近。

4.3 对神经系统的作用

Song等[71]研究发现人参糖蛋白能够通过升高海马内单胺类递质的含量,如5-HT及其代谢产物,以逆转利血平诱导的体温降低和眼睑下垂,对行为绝望模型小鼠具有保护作用。Lv[72]、Luo等[73]发现人参糖蛋白能够提高记忆获得障碍模型小鼠或老年痴呆模型大鼠的学习记忆能力、减轻Aβ25-35诱导的大鼠记忆障碍症状,研究发现人参糖蛋白能够抑制Aβ25-35诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y 细胞凋亡,阻止其DNA合成期的中止,降低NO的释放及iNOS活性[74,75],从而有效保护神经细胞。Wang等[76]发现人参糖蛋白具有镇静安眠及镇痛[77]作用,能够显著降低小鼠自主活动次数,减少阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠潜伏期、延长睡眠时间;在高剂量(40 mg/kg)下其镇痛活性远高于阿司匹林;纯化得到的三种组分PGG1、PGG2、PGG3,以蛋白质含量最高的PGG3镇痛作用最强,推测人参糖蛋白镇痛作用的强弱与蛋白质含量有一定关系。

4.4 对心血管系统的作用

Ding等[78,79]研究发现天麻糖蛋白能够显著延长小鼠的凝血时间、出血时间和血浆复钙时间,降低血小板聚集率,对ADP致血小板凝集血栓的形成有抑制作用;也能够降低急性血瘀模型大鼠高切、中切的全血黏度和血浆黏度,及红细胞聚集指数,减少大鼠体外形成的血栓长度、湿重和干重;对人血浆凝血酶时间(TT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)有明显延长作用,表明天麻糖蛋白具有显著的抗凝、抗栓作用。Wei等[80]研究发现天麻糖蛋白能够提高SOD活力及NO含量,降低MDA含量及MPO活性,以改善胃黏膜局部的血液循环、清除氧自由基达到保护胃黏膜的作用。

4.5 抗肿瘤作用

中药糖蛋白主要是通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖及血管形成,同时调节机体免疫功能来实现抗肿瘤目的。

Deng等[38]从霍山石斛中纯化得到的相对分子质量为22.5、19.8 kDa的糖蛋白组分RG1、RG2对人肝癌细胞HepG2有毒活性,表明二者可能是霍山石斛抗肿瘤活性的物质基础之一。Han等[6]从土鳖虫内提取纯化得到的糖蛋白组分1对Hela细胞和食管癌 Eca109 细胞有明显抑制作用;Li等[81]从地鳖体内分离纯化得到的纤溶活性蛋白(EFP),对鸡胚尿囊膜新生血管生成有良好的抑制作用,红外光谱特征吸收峰推断EFP为一种糖蛋白。Sun[82]、Lee[30]和Oh等[83]发现龙葵糖蛋白各组分能够对人乳腺癌MCF-7细胞及HeLa细胞产生细胞毒性,其中对MCF-7细胞毒性较强的SNL-I能够抑制1,2-二甲基肼(DMH)诱导的结肠癌小鼠模型结肠黏膜上癌前病变,即异位隐窝灶(ACF)的产生[84]。研究显示龙葵糖蛋白能够抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化、增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡相关蛋白前体(pro-caspase-3和pro-PARP)的表达及NF-κB、AP-1的活性,促进细胞色素c的释放、caspase-8及caspase-3的活化和PARP裂解,降低iNOS、COX-2的表达及血浆中硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)含量,表明龙葵糖蛋白能够通过抑制细胞增殖、促进凋亡、抑制促炎症蛋白和因子表达及抗氧化来发挥抗肿瘤作用。

4.6 抗氧化作用

体内自由基过量会损伤体内生物大分子而造成机体损伤,癌症、衰老等都与自由基过量有关[85],因此,具有抗氧化活性的物质一直受到人们的广泛关注,在对中药糖蛋白的研究过程中发现,许多中药糖蛋白都具有较强的抗氧化活性。

玉竹[21]及蒲公英[86,87]糖蛋白均被发现具有较强的体外抗氧化活性,对羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用;二者均能提高小鼠血清、肝脏和脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,降低丙二醛(MDA)含量[88,89]。从山药[17,90]、海马[91]和丹参[92,93]中分离得到的各级糖蛋白纯品,也具有较强的体外抗氧化活性,其中海马糖蛋白组分HG-11和HG-21,以疏水性氨基酸和芳香族氨基酸含量较高的HG-21活性较强;山药糖蛋白纯品CYG1和CYG2,以多糖含量较高的CYG-2活性稍强。

4.7 抗衰老作用

衰老主要表现为机体全身各组织、器官的退行性变化,使细胞变性、萎缩、数量减少、组织脱水以致大部分脏器重量减轻[94],在年龄增长过程中,生物体内产生的抗氧化剂或酶类物质如SOD、GSH-Px逐渐下降,过氧化脂质逐渐增多,造成过氧化损伤,加速衰老[95]。因此,除了脏器指数、细胞形态等,体内抗氧化酶活性、MDA含量也常作为评价衰老的指标。

Zhang[45]通过血清代谢组学研究发现远志糖蛋白主要通过核苷酸代谢、碳水化合物合成代谢及糖代谢等通路发挥作用,其对D-半乳糖诱导的衰老小鼠的脏器指数、血清中过氧化氢酶(CAT)及脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活力均有增强作用,能够减缓器官萎缩、降低脑组织中丙二醛(MDA)的含量。Qi[96]发现覆盆子糖蛋白能够改善衰老小鼠体重增长缓慢的现象、缓解脏器损伤、提高体内抗氧化酶活性,其中经纯化得到的体外抗氧化活性最强的组分GP3,能够降低H2O2损伤下的TCMK-1、NRK-52E细胞的死亡率及β-半乳糖苷酶活性;RT-PCR及Western-blot实验结果表明GP3能使衰老小鼠肾脏中Klotho基因表达增多[97]。故推测覆盆子糖蛋白可能是通过清除体内有害自由基、修复脏器损伤,同时调节体内抗衰老基因Klotho的表达水平来实现抗衰老作用的。

4.8 抗炎作用

中药糖蛋白的抗炎机制主要是通过抑制NF-κB、AP-1等信号通路,降低iNOS和COX-2等促炎介质的转录水平,从而抑制炎性因子如TNF-α、IL-6等的分泌,最终达到抗炎目的。

Lee等[98,99]发现从栀子中分离得到的分子量为27 kDa的糖蛋白能够增强抗氧化酶(SOD和GPx)活性,清除体内氧自由基以抑制其对AP-1和NF-κB的激活,从而抑制受二者调控的炎性因子TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS的表达,达到抑制炎症反应的目的。Xia等[100]发现蒲公英糖蛋白能够显著上调受脂多糖刺激的RAW264.7细胞内IκB-α的蛋白表达,并下调P-IκB-α的蛋白表达,表明蒲公英糖蛋白可能是通过抑制NF-κB信号通路的活化,以减少炎症因子等的生成实现抗炎效果的。

糖蛋白药理活性广泛,大部分与原药材保持一致,如龙葵能够通过促进细胞凋亡、调控细胞周期等发挥抗肿瘤作用[101],与龙葵糖蛋白药理作用相似;有些中药糖蛋白的药理活性甚至强于目前普遍认为的药材有效成分,Wang等[77]研究发现相同剂量下人参糖蛋白表现出远高于人参总皂苷的镇痛作用,这提示我们某些中药糖蛋白可能是中药材发挥药效的重要基础;但也存在相反的情况,如黄芪具有免疫增强作用,其糖蛋白却有较强的免疫抑制活性。故糖蛋白与其原药材之间药理活性的关系及糖蛋白本身药理活性的影响因素尚不明确,如海马糖蛋白的抗氧化活性可能与疏水性氨基酸和芳香族氨基酸含量有关,山药糖蛋白的抗氧化活性则与多糖含量有关。

5 结语

目前对中药糖蛋白的研究,除了存在富集纯化过程复杂、无法适应大生产,结构研究不够深入,药理活性影响因素不明确等问题,还存在其他问题:如前文提到某些中药糖蛋白的药理活性或可强于目前普遍认为的有效成分,是中药材发挥药效的重要基础,那么对于许多没有明确指标性成分作为质量评价标准的中药材,糖蛋白是否可以成为其质量标准的评价指标之一?但针对此方面,对中药糖蛋白与普遍认为的有效成分之间的比较,以及以糖蛋白为指标进行质量评价的相关研究还少见报道。此外,中医临床用药要进行炮制或配伍,对中药材进行炮制或配伍时,是否会引起糖蛋白含量或结构的改变,糖蛋白的改变是否与药效改变有所联系,这些都未见报道。

虽然对中药糖蛋白的研究还存在很多问题和困难,但中药糖蛋白的研究无疑是具有重要意义的:除了能够为中药基础研究提供新思路,还能为中药新药研发提供参考。如前文所述黄芪糖蛋白的免疫抑制作用相较于目前常用的免疫抑制剂,具有毒副作用小、双向调节的优势;对新生血管生成有良好抑制作用的地鳖虫糖蛋白或可作为抗血管生成类药物参与肿瘤的临床治疗;而具有α-糖苷酶抑制作用的中药糖蛋白则有着药理作用广泛、作用效果更加缓和的优势。因此,中药糖蛋白作为多靶点、高疗效、低毒性的中药活性成分,为新药研发提供了参考,具有广阔的应用前景。

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