血管内皮生长因子、转录因子-21在宫颈癌中的表达及对放疗敏感性的影响

弋振营，徐志巧，杨艳萍，李宁，申凤乾，田永巍

开封市中心医院肿瘤科，河南 开封 475000

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤，占生殖系统恶性肿瘤50%以上，发病率仅次于乳腺癌，病死率居女性恶性肿瘤首位。目前，宫颈癌病因尚未完全明确，但临床认为，其与环境、吸烟、多孕多产、人乳头瘤病毒感染等因素有关。多数宫颈癌患者缺乏典型的临床症状，确诊时多已属于中晚期，错过了最佳的手术治疗时机，放疗成为此类患者重要的治疗方案，但由于不同个体对放疗的敏感性不同，放疗疗效存在差异，因此，放疗无法使所有患者均获益，寻求敏感的预测宫颈癌放疗疗效的标志物，对预测患者临床疗效、开展个体化治疗、改善患者的预后十分重要。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是血管生成相关的特异性生长因子，宫颈恶性肿瘤增殖生长后能被激活，其活性能提高肿瘤细胞对放疗的抵抗力，既往诸多研究证实，肿瘤组织中VEGF阳性表达患者的放疗疗效更差，认为其与放疗抵抗有一定联系。转录因子-21（transcription factor-21，TCF-21）是一种抑癌因子，与肿瘤生长密切相关，在肺癌、胃癌等多种肿瘤组织中低表达，有研究表明，TCF-21高表达可增加肿瘤细胞的放疗敏感性，促进细胞凋亡。既往关于宫颈癌组织中VEGF与放疗敏感性的相关报道较多，但TCF-21对宫颈癌放疗敏感性影响的文献报道却较少，因此，本研究探讨宫颈癌组织中VEGF、TCF-21对放疗敏感性的预测价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月至2019年1月开封市中心医院收治的宫颈癌患者。纳入标准：①符合《宫颈癌诊断与治疗指南》（第四版）中关于宫颈癌的诊断标准，均经病理学或细胞学检查证实；②国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期为Ⅱb～Ⅲb期；③卡氏功能状态（Karnofsky performance status，KPS）评分≥70分；④具有放疗指征，具有可测量的病灶；⑤病历及随访资料完整。排除标准：①合并其他原发恶性肿瘤；②合并血液系统或免疫系统疾病；③急性或慢性感染，或心、脑、肝、肾等重要器官严重功能障碍；④合并精神疾病；⑤生存期不足3个月；⑥哺乳期或妊娠期女性。依据纳入和排除标准，本研究共纳入120例宫颈癌患者，年龄33～58岁，平均（47.09±9.11）岁；病理类型：鳞状细胞癌89例，腺癌31例；FIGO分期：Ⅱb期29例，Ⅲa期58例，Ⅲb期33例；分化程度：低分化28例，中分化62例，高分化30例。

1.2 放疗方法

所有患者均接受放疗，采用模拟定位机确定放疗部位后，使用西门子Primus直线加速器（具有6MV高能X线）对患者进行全盆腔不规则前后野等中心放疗，并行直肠铅挡，补充腔内放疗，盆腔前后野位置55 Gy，盆腔中央部位25 Gy；若宫旁浸润出现团块，野外照射剂量为10～15 Gy；若阴道浸润出现团块状，照射剂量为32～48 Gy，每周放疗1次，共放疗5次。

1.3 免疫组化法检测宫颈癌组织中VEGF、TCF-21表达情况

取120例宫颈癌患者的宫颈癌组织，40 g/L的多聚甲醛溶液固定，时间＞24 h，完成后脱水、包埋、切片6片，每片4 μm，其中1片进行苏木素-伊红染色，其他切片进行免疫组化法染色，常规脱蜡处理后 微 波炉 加 热 96℃，10～15 min，参考GK500705-DAKO-免疫组化检测试剂盒说明书完成其他步骤，抗体选择兔抗VEGF多克隆抗体及兔抗TCF-21多克隆抗体。免疫组织化学染色后细胞质或胞膜染成棕褐色或棕黄色即判定为VEGF、TCF-21表达阳性。

1.4 观察指标和评价标准

①依据实体瘤疗效评价标准（response evaluation criteria in solid tumor，RECIST）评估宫颈癌患者的放疗疗效：完全缓解（complete response，CR），CT、MRI等影像学检查未见肿瘤或仅见条索状影；部分缓解（partial response，PR），影像学检查显示肿瘤明显缩小，肿瘤最大垂直直径乘积减少≥30%；疾病稳定（stable disease，SD），影像学结果无明显变化，肿瘤最大垂直直径乘积减少＜30%或增大＜20%；疾病进展（progressive disease，PD），影像学结果显示有新肿瘤灶出现，肿瘤最大垂直直径乘积增大≥20%。有效率（%）=（完全缓解+部分缓解）例数/总例数×100%。②所有患者放疗后行外周静脉采血3～5 ml，以3000 r/min离心15 min，离心半径15 cm，收集血清，于-20℃低温保存，采用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤标志物水平，包括鳞状细胞癌相关抗原（squamous cell carcinoma-related antigen，SCC-Ag）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖类抗原 72-4（carbohydrate antigen 72-4，CA72-4）。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 VEGF、TCF-21表达情况的比较

120例宫颈癌患者宫颈癌组织中，VEGF阳性表达83例，阳性表达率为69.17%（83/120），TCF-21阳性表达34例，阳性表达率为28.33%（34/120）。

2.2 放疗疗效的比较

VEGF阳性表达宫颈癌患者的放疗总有效率为63.86%（53/83），明显低于VEGF阴性表达患者的97.30%（36/37），差异有统计学意义（

χ

=14.938，

P

＜0.01）。TCF-21阳性表达宫颈癌患者的放疗总有效率为94.12%（32/34），明显高于TCF-21阴性表达患者的60.47%（52/86），差异有统计学意义（

χ

=13.141，

P

＜0.01）。（表1、表2）

表1 不同VEGF表达情况宫颈癌患者的放疗疗效[ n（%）]*

表2 不同TCF-21表达情况宫颈癌患者的放疗疗效[ n（%）]*

2.3 血清肿瘤标志物的比较

VEGF阳性表达宫颈癌患者血清SCC-Ag、CEA、CA72-4水平均明显高于VEGF阴性表达患者，TCF-21阳性表达宫颈癌患者血清SCC-Ag、CEA、CA72-4水平均明显低于TCF-21阴性表达患者，差异均有统计学意义（

P

＜0.01）。（表3、表4）

表3 不同VEGF表达情况宫颈癌患者血清肿瘤标志物水平的比较（±s）

表4 不同TCF-21表达情况宫颈癌患者血清肿瘤标志物水平的比较（±s）

3 讨论

宫颈癌好发于中年女性，调查研究显示，中国每年新增宫颈癌病例高达10万例，且随着生活习惯和饮食结构的变化，宫颈癌的患病率呈逐年上升及年轻化趋势。早期诊疗是改善患者预后的关键，放疗中晚期宫颈癌患重要的辅助治疗手段，提高放疗敏感性对改善放疗疗效至关重要。陆晓和冼磊的研究指出，肺腺癌细胞中TCF-21过表达后，放疗可迅速减小裸鼠成瘤体积，促进肿瘤细胞凋亡，表明TCF-21表达能够促进肿瘤细胞凋亡，增加放疗敏感性。VEGF是重要的血管内皮生长因子，具有促进血管内皮细胞增殖、增加血管通透性、维持血管完整的作用。肿瘤细胞生长、增殖过程中需要氧及营养成分，可自行分泌促血管生成因子，以促进肿瘤新生血管生成，而VEGF能够促进肿瘤细胞的增殖及转移，加重病情。既往多项研究指出，VEGF在肺癌、大肠癌、肝癌等恶性肿瘤中均成高表达，具有促进肿瘤细胞增殖、转移的作用，能够预测肿瘤患者的临床疗效及预后。

本研究结果显示，120例宫颈癌患者中，VEGF阳性表达83例，阴性表达37例，VEGF阳性表达宫颈癌患者的放疗总有效率为63.86%，明显低于VEGF现阴性表达患者的97.30%，提示VEGF阳性表达患者对放疗的敏感性更低，放疗疗效更差。有研究表明，乏氧细胞是肿瘤细胞放疗敏感性下降的重要原因，缺氧能使肿瘤细胞的部分基因及蛋白合成或表达上调，其中包括VEGF，而基因或蛋白的变化可使肿瘤细胞适应缺氧环境，增加自身侵袭性及对放化疗的抗拒性，因此，放化疗敏感性降低，疗效变差。同时，本研究结果显示，120例宫颈癌患者中，TCF-21阳性表达34例，阴性表达86例，TCF-21阳性表达宫颈癌患者的放疗有效率为94.12%，明显高于TCF-21阴性表达患者的60.47%，表明TCF-21阳性表达能够提高放疗敏感性及疗效。既往研究表明，TCF-21在肾癌、乳腺癌、膀胱癌等恶性肿瘤组织中表达下调，且与肿瘤细胞的多种生物学特性相关，与本研究结果基本相符，证实了

TCF-21

是一种抑癌基因，能够抑制肿瘤细胞增殖并促进其凋亡。肿瘤细胞的凋亡与多种基因的严格调控密切相关，是一系列蛋白的复杂调控结果，蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，又称AKT）信号通路在多种组织及器官中发挥生物学调控作用，并参与细胞生长、凋亡及肿瘤细胞对放疗敏感性等过程，TCF-21能够抑制AKT信号通路，提高宫颈癌细胞对放疗的敏感性，促进肿瘤细胞凋亡，因此，TCF-21阳性表达患者的放疗疗效更佳。

SCC-Ag、CEA及CA72-4均是肿瘤细胞或肿瘤宿主细胞的代谢产物，其水平反映肿瘤进展，相关研究指出，宫颈癌患者中SCC-Ag、CEA、CA72-4水平均明显高于健康者，可作为病情评估的特异性指标。本研究选取上述三个指标评估放疗疗效，结果显示，VEGF阳性表达宫颈癌患者的放疗有效率为63.86%，明显低于VEGF阴性表达患者的97.30%；TCF-21阳性表达宫颈癌患者的放疗有效率为94.12%，明显高于TCF-21阴性表达患者的60.47%。提示VEGF及TCF-21均与放化疗疗效密切相关，但VEGF阳性表达宫颈癌患者的血清SCC-Ag、CEA、CA72-4水平均明显高于VEGF阴性患者，TCF-21阳性表达宫颈癌患者血清SCC-Ag、CEA、CA72-4水平均明显低于TCF-21阴性表达患者，进一步验证了上述研究，表明TCF-21阳性表达能够提高放疗敏感性及疗效，降低血清肿瘤标志物水平，而VEGF阳性表达则会降低放疗敏感性及疗效。但本研究仍存在一些不足，如未对患者进行长期随访，尚有待广大学者进一步延长随访时间，以验证TCF-21、VEGF的表达对宫颈癌患者远期疗效的影响。

综上所述，TCF-21可促进宫颈癌细胞凋亡，对放疗诱导的宫颈癌细胞凋亡有协同作用，增加了宫颈癌患者对放疗的敏感性；VEGF能够增加宫颈癌细胞侵袭性及放疗抵抗性，降低放疗敏感性。