不同炮制机制对栀子化学成分含量及抗炎效果的影响

邓玉霞 孙世成威海市立医院药剂科，山东 6400；威海市中医院药剂科，山东 6400

栀子又称白蟾、越桃、水栀子，为茜草科植物。性喜温暖湿润性气候，多生长于南方，是典型的酸性花卉。其果实味微苦，具有去火利尿、清热解毒、护肝利胆等功效，是种传统的中医用药，在临床上多用于扭挫伤、黄疸型肝炎等症状［1］。因其治疗病症的多样化，所以得到了医疗学者的广泛关注及应用。栀子的化学成分主要包括环烯醚萜类，如栀子苷等；苷类，如西红花苷等；有机酸脂类，如绿原酸等；黄酮类，如芦丁等，挥发油及多糖等［2］。现代药理研究表明，栀子的抗炎效果良好，但因其所含化学成分众多，炮制机制各不相同，目前多数研究都侧重于单一成分的抗炎效果［3-4］，但却忽略了中药是多靶点、多组分综合作用的复杂整体，其药效应是联合产生的，且不同炮制机制对其抗炎效果影响并不相同。因此本文主要探讨分析不同炮制机制对栀子化学成分含量及抗炎效果的影响，以期为栀子临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器及设备 数控超声波清洗机（型号：KQ3200DE），东莞市科桥超声波设备有限公司；电子分析天平（型号：FA2004N），上海菁海仪器有限公司；万能高速粉碎机（型号：DE-100g），上海安亭科学仪器厂；紫外可见光谱仪（型号：UV-2550），日本SHIMADZU公司；ABL系列多功能炒药机（型号：25L），兰州阿泊罗电子设备有限公司；电热恒温鼓风干燥箱（型号：DHG-9075AD），上海齐欣科学仪器有限公司；丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒（型号：190103），广州科方生物技术股份有限公司；总胆红素测定试剂盒（型号：180615），日本SHIMADZU公司。

1.2 药物与试剂 本文所用到的试剂及材料如表1所示，试剂纯度均为色谱纯。

表1 试剂及材料一览表

1.3 实验步骤

1.3.1 不同机制栀子制备 用分析天平每次称取生栀子样品300 g，3种栀子步骤按照1988版《全国中药炮制规范》、2020版《中国药典》、2020版《湖南地方炮制规范》进行炮制［5］，得到炒栀子、焦栀子、栀子炭各3批，将其粉碎，过四号筛得到样品备用。

1.3.2 超高效液相色谱法（UPLC）测定不同机制栀子主要化学成分（1）制备对照品溶液：①称取适量对照品栀子苷、栀子苷酸、京尼平龙胆双糖苷、去乙酰车叶草酸甲酯、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ，分别置于容量瓶中并加入25 ml甲醇摇匀，配制成对照品母液，标好编号；②在10 ml容量瓶中，分别加入对照品母液0.5 ml、3.0 ml、2.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、1.0 ml，制成混合对照品溶液；③量取混合对照品溶液1.0ml，于2.0 ml容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，得到对照品溶液。（2）制备供试品溶液：①精确称取样品粉末0.1 g，加入锥形瓶中，再加入25 ml甲醇，称重；②超声处理30 min，冷却后称重，用甲醇补足减失重量，摇匀并过滤；③在25 ml容量瓶中加入10 ml过滤液，甲醇定容，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，得到供试品溶液。（3）色谱测定：用色谱仪测量样品含量，检测波长239 nm和440 nm；流速0.2 ml/min；柱温为30℃；进样量2μl。得到混合对照品和样品UPLC色谱图。

1.3.3 不同机制栀子抗炎效果测定（1）动物分组：选取SD雄性大鼠（体质量250～300 g）40只，每组10只分4组，为Model组（黄疸肝炎大鼠）、炒栀子组（黄疸肝炎大鼠给予炒栀子干预）、焦栀子组（黄疸肝炎大鼠给予焦栀子干预），栀子炭组（黄疸肝炎大鼠给予栀子炭干预）。（2）建模方法：所有大鼠均给予0.4%α-萘异硫氰酸酯（ANIT）橄榄油溶液（100 mg/kg）建立以ANIT诱导的黄疸肝炎作为炎症模型。（3）给药方案：大鼠建模后，炒栀子组、焦栀子组、栀子炭组连续10 d给药18 g/kg。Model组10 d连续灌胃相同计量的无菌生理盐水。（4）实验指标检测：造模48 h后，麻醉各组大鼠取血，将血样静置1 h后，离心15 min，用酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测门冬氨酸氨基转移酶（AST）、ALT、总胆红素、白介素-6（IL-6）指标和细胞因子表达水平。

1.4 统计学分析 采用SPSS23.0进行统计分析，组间进行独立样本t检验、χ2检验，临床计量资料符合正态分布及方差齐性，描述采用均数±标准差（±s），事后检验采用SNK法，进行组间两两比较；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 UPLC检测结果 整体来看，炮制时间越长、炮制程度越深，栀子的化学成分含量大体变化为依次下降，顺序为炒栀子、焦栀子、栀子炭。其中京尼平龙胆双糖苷含量顺序为焦栀子、炒栀子、栀子炭；栀子苷酸含量顺序为焦栀子、栀子炭、炒栀子，其余化学含量变化皆为炒栀子、焦栀子、栀子炭。其色谱图见图1～4。

图1 混合对照品239 nm（A）及440 nm（B）波长下UPLC色谱图

2.2 抗炎效果结果 与Model组对比，炒栀子组、焦栀子组、栀子炭组大鼠血清中AST、ALT、总胆红素、IL-6含量均降低（均P＜0.05）；但其抗炎效果并不相同，抗炎效果炒栀子、焦栀子，栀子炭依次降低。具体见表2。

表2 各组SD雄性大鼠抗炎指标水平比较（mU/L，±s）

表2 各组SD雄性大鼠抗炎指标水平比较（mU/L，±s）

注：Model组为黄疸肝炎大鼠，炒栀子组黄疸肝炎大鼠给予炒栀子干预，焦栀子组黄疸肝炎大鼠给予焦栀子干预，栀子炭组黄疸肝炎大鼠给予栀子炭干预；AST为门冬氨酸氨基转移酶，ALT为丙氨酸氨基转移酶，IL-6为白介素-6

组别Model组炒栀子组焦栀子组栀子炭组F值P值只数10 10 10 10 AST 1 030.11±597.44 274.83±112.09 367.08±173.60 622.91±229.85 10.100＜0.001 ALT 725.08±342.73 243.58±75.33 476.92±187.43 614.67±215.53 8.938＜0.001总胆红素88.64±43.95 38.74±20.45 46.12±17.83 68.86±19.27 6.765 0.004 IL-6 41.49±15.85 25.91±8.94 34.97±4.78 30.29±16.31 2.870 0.013

3 讨 论

栀子是中药的一种，其最早出自《神农本草经》中［6］。栀子生长地多在南方，如湖南、福建、四川等地。栀子的药用价值很高，其在治疗糖尿病、胃病、促进胰腺分泌、保护神经等各类疾病中均发挥着重要作用［7］。现如今，栀子不仅用于制药，还用于制造保健品。现代医学表明，对栀子化学成分及药理进行研究探讨［8］，有利于对疾病治疗预防工作进行指导实践，并提高栀子的治疗效果。栀子的药理主要作用于抗炎、清热解毒等方面，而炎症的发病原因是机体被各种损伤因子刺激，导致血管系统活体组织产生的防御反应［9］。但因其栀子的化学成分过于复杂，且炮制机制不一，现阶段研究人员并没有深入探讨和研究栀子的化学成分及抗炎效果，所以本文主要探讨了不同炮制机制对栀子化学成分含量及抗炎效果的影响。

图2 炒栀子样品239 nm（A）及440 nm（B）波长下UPLC色谱图

结果表明，从整体来看，炮制时间越长、炮制程度越深，栀子的化学成分含量大体变化为依次下降，顺序为炒栀子、焦栀子、栀子炭。其中京尼平龙胆双糖苷含量顺序为焦栀子、炒栀子、栀子炭；栀子苷酸含量顺序为焦栀子、栀子炭、炒栀子，其余化学含量变化皆为炒栀子、焦栀子、栀子炭。而抗炎效果，与Model组对比，对于大鼠血清中AST、ALT、总胆红素、IL-6含量，其3种炮制机制均能使之降低（均P＜0.05），但其抗炎效果并不相同，抗炎效果炒栀子、焦栀子，栀子炭依次下降。

邓怒骄等［10］研究发现，对于酵母多糖类炎症，栀子苷有显著的效果，其能显著降低大鼠血清致炎因子，增加抗炎因子，降低肠黏膜病理性损伤。张冷等［11］研究发现，京尼平龙胆双糖苷可以抑制致炎细胞因子水平，其主要是通过核因子（NF）-κB抑制脂多糖（LPS）诱导的星形胶质细胞活化来进行的。吕辰子［12］研究发现，不同炮制机制的栀子，炒制温度、炒制时间都有最优解，其炒栀子炒制温度为179℃，炒制时间5.70 min；焦栀子为240℃，3.7 min；栀子炭为329.94℃，5.91 min。这与本文结果类似

图3 焦栀子样品239 nm（A）及440 nm（B）波长下UPLC色谱图

图4 栀子炭样品239 nm（A）及440 nm（B）波长下UPLC色谱图

综上所述，不同炮制机制对栀子的化学成分及抗炎效果有显著的影响，炮制时间、炮制程度是主要的影响因素，本文研究为以后进一步揭示栀子炮制机制对栀子化学成分及抗炎效果的影响提供了良好的理论基础。

利益冲突：作者已申明文章无相关利益冲突。