异荭草素对T2DM小鼠血糖及大血管AGEs影响的研究

谭 娟，迟静薇，车 奎，王颜刚*

(1青岛大学医学部，山东 青岛 266000；2青岛大学附属医院)

脑、心脏、肾脏等大血管病变是2型糖尿病患者的重要并发症，其发病机制存在多种学说，得到公认的主要为糖基化终末产物(AGEs)和氧化应激学说等。研究证实，糖尿病血管并发症的发展中最为重要的是AGEs/RAGE途径。目前，临床对此病变尚无有效的防治方法。异荭草素(ISO)是一种存在于多种药用植物中的木犀草素糖苷类黄酮化合物。研究显示，其有着减轻胰岛素抵抗、抗氧化应激及抑制炎症等多种药理活性[1-5]。本研究将其应用于2型糖尿病小鼠模型，探讨对其血糖、大血管的影响及可能的机制。

1 材料与方法

1.1实验材料 选取C57BL雄性小鼠70只，均为健康、清洁级，6～8周龄，体重(20±2)g。于室温25℃、湿度60%，5～6只/笼，饲养。SPF级实验维持期鼠粮，以高压蒸汽灭菌法灭菌，小鼠自由饮食。异荭草素(北京普天同创生物科技有限公司)，链脲佐菌素(美国Medche-mExpress公司)，检测AGEs的ELISA试剂盒(武汉华美生物工程有限公司)。

1.2实验方法

1.2.1造模 将小鼠分为正常对照组(NC，饲养8周未发病的小鼠，共7只)和模型组(DM，饲养后糖尿病发病的小鼠，共46只)。基础饲料饲喂NC组4周。以高脂饲料饲喂DM组4周，连续5 d腹腔内注射链脲佐菌素30 mg/(kg·d)，每周在固定的时间称重，1周后自尾部针刺取血测随机血糖，连续2次随机血糖大于16.6 mmol/L者为造模成功。

1.2.2分组及处理 将46只成功造模的糖尿病小鼠随机分为5组：糖尿病模型组(BC)，共10只，发病后不采取任何干预措施；ISO低剂量组，共9只，10 mg/(kg·d)；ISO中剂量组，共9只，20 mg/(kg·d)；ISO高剂量组，共9只，40 mg/(kg·d)；胰岛素组(INS)，共9只，根据血糖情况给予适量的甘精胰岛素腹腔注射。8周后取各组小鼠胸主动脉，以4%多聚甲醛溶液固定部分组织做病理检测用，剩余的放入去RNA酶的EP管中，-80℃保存待用。光学显微镜观察血管内膜及血管结构的变化情况；BCA法对胸主动脉组织中蛋白含量进行检测；ELISA法检测样本中AGEs浓度。

2 结果

2.1一般状况 NC组小鼠较好，皮毛丰富有光泽，活跃敏捷；另外5组逐渐出现懒动、多食、消瘦、脱毛等情况，其中以BC组消瘦、脱毛更明显。

2.2组织病理学情况 镜下观察，NC组动脉结构完整，内膜光滑，中膜无增厚，平滑肌细胞排列较为整齐；BC组主动脉内膜明显增厚，局部可见内皮及沉积物向管腔内突出，内皮细胞破损，与内皮下层分界不清；ISO低剂量组主动脉内膜明显增厚，结构紊乱，内膜粗糙，内皮细胞形态不规则，中膜增厚；ISO中剂量组主动脉内膜增厚，中膜结构较松散，内膜下层可见增厚；INS组主动脉内膜表面不光滑，偶见黏附，内膜下层偶见增厚；ISO高剂量组血管内皮大致正常，中膜、平滑肌、外膜结构均未见明显异常。见封三图1。

2.3各组随机血糖及组织中AGEs水平情况 随机血糖：除BC组与ISO低剂量组、INS组与ISO高剂量组之间无统计学意义外(q=2.43，0.38；P>0.05)，其他各组间比较均有统计学意义(q=3.41～27.76，P<0.05)；主动脉中AGEs水平：除INS组与ISO中剂量组比较无统计学意义外(q=1.81，P>0.05)，其他各组间比较均有统计学意义(q=3.66～29.92，P<0.05)。见表1。

表1 各组随机血糖及大血管AGEs水平比较

3 讨论

流行病学研究表明，糖尿病患者易并发多种血管、神经等慢性并发症，其中大血管病变是导致其死亡的主要原因。在糖尿病患者动脉粥样硬化过程中，高血糖对于血管内皮等所产生的细胞毒性作用尤为重要[6]。持续高血糖，非酶促反应条件下，核酸、脂质、蛋白质等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合、重排、裂解、氧化修饰从而产生稳定的AGEs。已有研究发现[7-8]，RAGE是糖基化终末产物受体中研究最多的，其广泛存在于机体的各个组织器官中。多项研究表明[9-10]，AGEs/RAGE通路是糖尿病所致各种并发症的主要原因之一。

ISO具有多种药理作用。本研究通过不同剂量的ISO对糖尿病小鼠进行干预，结果显示，BC组随机血糖及AGEs水平最高，NC组最低；随着ISO剂量的升高，随机血糖及AGEs水平呈递降趋势。说明ISO可使糖尿病小鼠大血管组织AGEs的蓄积减少，进而使糖尿病大血管微环境得到改善，且高剂量ISO干预的作用与单纯应用胰岛素干预的作用相比更强，所以ISO有望作为治疗糖尿病大血管并发症的新方法应用于临床。

但是，目前仍有许多问题尚待解决，如ISO对于AGEs/RAGE通路是否有抑制作用，尚需进一步论证。另外持续高血糖血管壁脆弱，且小鼠体型较小，取材过程中的组织损伤、血管与周边组织分离不彻底等问题对于实验的效果均会产生影响，后续将继续改进。